發(fā)布時(shí)間：2017-06-01 19:12

  本文關(guān)鍵詞：丁基苯肽減輕糖尿病性白內(nèi)障氧化應(yīng)激損傷及其作用機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:活性氧(Reactive oxygen species,ROS)在糖尿病性白內(nèi)障的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。丁基苯酞(DL-3-n-butylphthalide,NBP)是一種抗氧化劑,現(xiàn)在是用于治療缺血性腦卒中的藥物。在本實(shí)驗(yàn)研究中,我們旨在探討糖尿病大鼠模型給予口服丁基苯酞后,是否能對(duì)模型組大鼠的糖尿病性白內(nèi)障的病變進(jìn)展有減緩作用,并且內(nèi)源性轉(zhuǎn)錄因子Nrf2和其下游的抗氧化酶之間是否存在關(guān)系。方法:1選取體重(200±15g)健康雄性6周齡SD大鼠45只,將其隨機(jī)分為:(1)正常對(duì)照組(C組):15只大鼠(30只眼);(2)糖尿病模型組(DM組):15只大鼠(30只眼);(3)丁基苯酞給藥組(DM+NBP組):15只大鼠(30只眼)。2糖尿病組和丁基苯酞給藥組大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ,60mg/kg),建立糖尿病模型,而正常對(duì)照組大鼠則僅接受注射檸檬酸鈉緩沖液。72小時(shí)后取尾尖血測(cè)定血糖,以血糖≥16.7 mmol/L,尿糖(+++~++++)作為糖尿病模型成功的標(biāo)志。3丁基苯酞溶于植物油中,按照80毫克/公斤體重的劑量通過口服灌胃管飼5天/周。確認(rèn)造模成功后:(1)正常對(duì)照組(C組):給予等劑量的植物油灌胃;(2)糖尿病模型組(DM組):給予等劑量的植物油灌胃;(3)丁基苯酞給藥(DM+NBP)組:每日9點(diǎn)左右給予80mg/kg丁基苯酞灌胃。4樣本采集:糖尿病大鼠模型建成后,每2周測(cè)血糖和測(cè)定大鼠的體重,不符合標(biāo)準(zhǔn)者棄去。在實(shí)驗(yàn)期間,每3周散瞳觀察大鼠晶狀體混濁情況并分級(jí)。12周后處死大鼠,取眼球并且保存用于實(shí)驗(yàn)分析。左眼的晶狀體固定在溶解于0.01mol/l PBS的4%多聚甲醛中,用于組織學(xué)和免疫組化檢查。右眼的晶狀體儲(chǔ)存于-80℃中,用于生化分析測(cè)量。血樣待取出眼球后從股動(dòng)脈采取。血清是從EDTA處理的全血樣品中提取的,用于血糖和8-OHd G水平的檢查。氧化應(yīng)激參數(shù)如4-羥基壬烯醛(4-HNE)和MDA也存在于晶狀體中,通過Western印跡和硫代巴比妥酸分析測(cè)定。Nrf2及其下游的抗氧化酶catalase通過Western blot和免疫組化測(cè)定。5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,每組數(shù)據(jù)表示為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD),組間的差異通過采用單因素方差分析方法進(jìn)行評(píng)估,若P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1大鼠的一般狀況:DM和DM+NBP組的血糖水平明顯高于正常對(duì)照組(P0.05)。DM+NBP給藥組血糖水平顯著降低于糖尿病組(P0.05)。而且DM+NBP組大鼠表現(xiàn)出較好的活力,體重正常。2血清8-OHd G含量的測(cè)定:與正常對(duì)照組相比,糖尿病組大鼠血清8-OHd G明顯升高(P0.05);與糖尿病組相比,丁基苯酞給藥組大鼠血清8-OHd G降低(P0.05)。3晶狀體及病理形態(tài)學(xué)觀察:設(shè)定3、6、9、12周的時(shí)間點(diǎn)觀察各組白內(nèi)障的病變進(jìn)展。在實(shí)驗(yàn)期間,正常對(duì)照組大鼠晶狀體明顯清亮正常。4晶狀體MDA、氧化損傷物4-HNE、氧化蛋白的檢測(cè):相較于正常對(duì)照組,糖尿病組大鼠三個(gè)指標(biāo)明顯增高(P0.05);而與糖尿病組大鼠相比,丁基苯酞給藥組大鼠三個(gè)指標(biāo)降低(P0.05)。5 Nrf2和其下游抗氧化蛋白Catalase水平檢測(cè):通過Western blot檢測(cè),與正常對(duì)照組相比糖尿病組大鼠晶狀體的細(xì)胞漿和細(xì)胞核中Nrf2幾乎檢測(cè)不到(P0.05)。然而,DM+NBP組大鼠晶狀體細(xì)胞漿和細(xì)胞核中Nrf2明顯高于DM組(P0.05)。為了進(jìn)一步測(cè)定Nrf2,我們進(jìn)行了免疫組化定位檢測(cè)。正常情況下,Nrf2陽性主要表達(dá)于晶狀體上皮細(xì)胞及纖維細(xì)胞的細(xì)胞漿和細(xì)胞核中,然而糖尿病組大鼠晶狀體的Nrf2在上皮細(xì)胞及纖維細(xì)胞的胞漿和胞核內(nèi)幾乎不表達(dá),Nrf2在DM+NBP組中比糖尿病組表達(dá)增多。在Western blot檢測(cè)結(jié)果中,與Nrf2表達(dá)結(jié)果相一致,與正常對(duì)照組比較,Catalase在糖尿病組大鼠晶狀體細(xì)胞漿中的表達(dá)顯著降低(P0.05);與DM組比較,Catalase在DM+NBP組大鼠晶狀體細(xì)胞漿中表達(dá)明顯增多(P0.05)。結(jié)論:1氧化應(yīng)激與糖尿病性白內(nèi)障發(fā)病機(jī)制有密切的關(guān)系。2丁基苯酞可以在一定程度上抑制糖尿病大鼠的氧化應(yīng)激反應(yīng)。3丁基苯酞可以減緩糖尿病性白內(nèi)障的病變進(jìn)展。4丁基苯酞可以減輕糖尿病大鼠晶狀體蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的過氧化。5丁基苯酞通過調(diào)控Nrf2和其下游的抗氧化劑Catalase,而發(fā)揮治療作用。
【關(guān)鍵詞】：丁基苯酞 氧化應(yīng)激 糖尿病性白內(nèi)障 Nrf2 Catalase
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R587.2;R776.1
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-21
• 結(jié)果21-25
• 附圖25-29
• 附表29-31
• 討論31-36
• 結(jié)論36
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 綜述 氧化應(yīng)激與糖尿病性白內(nèi)障39-49
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 致謝49-50
• 個(gè)人簡歷50

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Rajesh Kumar;Dinesh Kumar Patel;Damiki Laloo;Krishnamurthy Sairam;Siva Hemalatha;;Inhibitory effect of two Indian medicinal plants on aldose reductase of rat lens in vitro[J];Asian Pacific Journal of Tropical Medicine;2011年09期

  本文關(guān)鍵詞：丁基苯肽減輕糖尿病性白內(nèi)障氧化應(yīng)激損傷及其作用機(jī)制的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：413288