本文關(guān)鍵詞：視網(wǎng)膜色素變性家系SAG基因新致病突變的鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：視網(wǎng)膜色素變性(Retinitis pigmentosa, RP)是視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞退行性變導(dǎo)致的一組眼底疾病,是世界范圍內(nèi)失明的主要原因之一。該病屬于單基因遺傳病,具有明顯的遺傳異質(zhì)性,致病基因眾多,同一基因致病突變多。已經(jīng)鑒定的非綜合征型RP致病基因僅能解釋約60%RP患者的遺傳病因。找到更多的RP致病基因,闡明基因型與表型的關(guān)系以及其致病機(jī)制,為臨床分子診斷和基因治療奠定基礎(chǔ),從而提高患者的生活質(zhì)量具有重要意義。本課題以一個(gè)視網(wǎng)膜色素變性家系為研究對(duì)象,旨在找到該家系的致病基因,并進(jìn)一步闡明基因型和表型的關(guān)系,為研究疾病的發(fā)病機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法：首先收集到一個(gè)視網(wǎng)膜色素變性家系和對(duì)照樣本,詳細(xì)了解家系成員的信息,繪制家系圖,然后對(duì)家系成員進(jìn)行詳細(xì)的問(wèn)診和眼科檢查,明確診斷,留取血液樣本,提取基因組DNA。接著對(duì)先證者進(jìn)行全外顯子測(cè)序,測(cè)序完成后運(yùn)用BWA軟件將原始數(shù)據(jù)與UCSC hgl9參考序列進(jìn)行比對(duì)、篩選數(shù)據(jù)并評(píng)估測(cè)序結(jié)果,然后用SAMTools軟件檢測(cè)并注釋變異數(shù)據(jù),并用SIFT等軟件預(yù)測(cè)突變功能,最后用dbSNP和1000G數(shù)據(jù)庫(kù)篩除變異數(shù)據(jù)里的已知變異后得到候選基因位點(diǎn)。然后用Sang er測(cè)序的方法在家系中對(duì)過(guò)濾出的基因位點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證,鑒定基因型與表型共分離的基因,并在家系外的正常對(duì)照樣本中進(jìn)一步驗(yàn)證。分析目的基因的生物信息學(xué)信息,應(yīng)用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)目的基因在小鼠視網(wǎng)膜組織的表達(dá)及定位。構(gòu)建攜帶目的基因野生型及突變型的真核表達(dá)載體,通過(guò)Western blot檢測(cè)野生型和突變型基因編碼蛋白在293T細(xì)胞內(nèi)是否有表達(dá)。熒光共聚焦顯微鏡觀察野生型及突變型基因編碼蛋白在cos7細(xì)胞內(nèi)表達(dá)及定位是否存在差異。結(jié)果：該視網(wǎng)膜色素變性家系為常染色體顯性遺傳。對(duì)先證者(Ⅲ-14)進(jìn)行全外顯子測(cè)序,經(jīng)過(guò)將全外顯子測(cè)序的數(shù)據(jù)進(jìn)行過(guò)濾分析后篩選出27個(gè)可能的致病基因位點(diǎn)。用Sanger測(cè)序在家系中及家系外對(duì)這27個(gè)基因位點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證,僅SAG基因上的雜合突變c.257AG (p.D86G)在該家系中與疾病表型呈現(xiàn)共分離,并且在對(duì)照樣本中未發(fā)現(xiàn)該突變存在。生物信息學(xué)分析顯示該突變位點(diǎn)位于序列保守區(qū)域、突變功能預(yù)測(cè)提示為有害突變(Damaging)。SAG基因是光感受器細(xì)胞退行性變特異基因,主要在視網(wǎng)膜組織視桿細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。我們成功構(gòu)建了攜帶SAG基因野生型和突變型的真核表達(dá)載體,Western blot檢測(cè)到突變型和野生型在293T細(xì)胞內(nèi)均有表達(dá)。熒光共聚焦顯微鏡觀察到SAG基因野生型和突變型在cos7細(xì)胞內(nèi)表達(dá)位置存在差異。結(jié)論：1.SAG基因上的雜合突變c.257AG (p.D86G)可能是視網(wǎng)膜色素變性家系的致病突變。2.SAG野生型和突變型基因在體外培養(yǎng)的細(xì)胞表達(dá)存在差異,可能是突變型SAG基因致病的原因。
【關(guān)鍵詞】：視網(wǎng)膜色素變性 全外顯子測(cè)序 SAG基因
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R774.1
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-8
• 前言8-12
• 材料與方法12-33
• 結(jié)果33-42
• 討論42-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-53
• 英漢縮略詞對(duì)照表53-55
• 致謝55-56
• 綜述56-72
• 參考文獻(xiàn)68-72

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊慧敏,傅俊江,李麓蕓;視網(wǎng)膜色素變性的分子遺傳學(xué)研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊(cè);2000年06期

2 劉曉軍,柴建華;視網(wǎng)膜色素變性治療的臨床前研究進(jìn)展[J];生物工程進(jìn)展;2000年02期

3 橫山利幸他;曲成業(yè);;視網(wǎng)膜色素變性癥[J];疼痛;2000年04期

4 馬曉曄;視網(wǎng)膜色素變性光傳遞過(guò)程中相關(guān)基因研究[J];眼科研究;2001年03期

5 崔云,王立,趙堪興;X性連鎖視網(wǎng)膜色素變性遺傳學(xué)研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊(cè);2001年01期

6 胡勁,涂巍,滕云;視網(wǎng)膜色素變性相關(guān)基因的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊(cè);2001年03期

7 付群,楊尊之,畢毅敏;異體組織埋藏治療視網(wǎng)膜色素變性對(duì)視力和眼底熒光造影變化的影響[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2001年06期

8 閻澤英;半側(cè)性視網(wǎng)膜色素變性1例[J];中國(guó)中醫(yī)眼科雜志;2001年02期

9 梁麗娜,莊曾淵;視網(wǎng)膜色素變性患者視網(wǎng)膜光學(xué)相干斷層掃描觀察[J];中國(guó)中醫(yī)眼科雜志;2001年04期

10 王樂(lè)今,于寧,王黎明;眼底有色素和無(wú)色素沉積患者并存的視網(wǎng)膜色素變性一家系[J];中華眼底病雜志;2001年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張紅;莊曾淵;;色素變性方治療特殊類(lèi)型視網(wǎng)膜色素變性的治療體會(huì)[A];全國(guó)第九次中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合眼科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2010年

2 譚涵宇;王芬;彭清華;李海中;;中西醫(yī)治療視網(wǎng)膜色素變性研究進(jìn)展[A];第十屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合眼科學(xué)術(shù)會(huì)議暨第五屆海峽眼科學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2011年

3 夏小平;田東華;宋國(guó)祥;唐香成;;中西藥治療視網(wǎng)膜色素變性臨床研究[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)第七次眼科學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2008年

4 謝漢興;彭清冬;;中醫(yī)藥對(duì)視網(wǎng)膜色素變性的治療觀察及其對(duì)眼電生理的影響[A];全國(guó)首屆中青年中醫(yī)眼科學(xué)術(shù)研討會(huì)資料匯編[C];1996年

5 羅萍;彭清華;廖泉清;;無(wú)色素型視網(wǎng)膜色素變性17例臨床分析[A];全國(guó)首屆中青年中醫(yī)眼科學(xué)術(shù)研討會(huì)資料匯編[C];1996年

6 龐榮;;中醫(yī)治療視網(wǎng)膜色素變性療效觀察[A];全國(guó)第九次中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合眼科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2010年

7 彭抿;彭清華;李建超;彭波;;視網(wǎng)膜色素變性的中醫(yī)藥文獻(xiàn)研究[A];全國(guó)第九次中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合眼科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2010年

8 劉旭陽(yáng);郭力恒;魏紅;王云;閆乃紅;楊巧娜;周曉敏;蔡素萍;;非典型視網(wǎng)膜色素變性家系的分子遺傳學(xué)分析[A];第十屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合眼科學(xué)術(shù)會(huì)議暨第五屆海峽眼科學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2011年

9 唐仕波;羅燕;孟晶;胡潔;朱曉波;邱觀婷;張淳;丁小燕;;視網(wǎng)膜色素變性能治療嗎?[A];中國(guó)神經(jīng)科學(xué)學(xué)會(huì)第六屆學(xué)術(shù)會(huì)議暨學(xué)會(huì)成立十周年慶祝大會(huì)論文摘要匯編[C];2005年

10 馬迪;黃楚開(kāi);張銘志;;無(wú)色素性視網(wǎng)膜色素變性的臨床報(bào)告[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 衛(wèi)紅;視網(wǎng)膜色素變性研究獲突破[N];中國(guó)消費(fèi)者報(bào);2001年

2 云祥;治療視網(wǎng)膜色素變性有新法[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2000年

3 記者 陸健 通訊員 高孟;視網(wǎng)膜色素變性研究獲新進(jìn)展[N];光明日?qǐng)?bào);2014年

4 湖南中醫(yī)學(xué)院附一院 張健;何謂視網(wǎng)膜色素變性[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2002年

5 根據(jù)眼科專(zhuān)家石潯接聽(tīng)熱線整理;視網(wǎng)膜色素變性有沒(méi)好的治療辦法[N];家庭醫(yī)生報(bào);2005年

6 本報(bào)特約通訊員 劉堅(jiān);視網(wǎng)膜色素變性的針灸治療[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2004年

7 本報(bào)記者 張子平;視網(wǎng)膜色素變性應(yīng)終身服藥[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2001年

8 蔣月榮;免費(fèi)為患者檢測(cè)致病基因突變[N];科技日?qǐng)?bào);2005年

9 日聞;綠藻基因成功治療失明鼠[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2008年

10 劉燕玲;手術(shù)逆轉(zhuǎn)眼底病[N];健康報(bào);2007年

  本文關(guān)鍵詞：視網(wǎng)膜色素變性家系SAG基因新致病突變的鑒定，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：410849