本文關(guān)鍵詞：殼聚糖衍生物對(duì)蒸發(fā)過(guò)強(qiáng)型大鼠干眼癥緩解作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?隨著計(jì)算機(jī)的普遍應(yīng)用，使用者眼睛長(zhǎng)期受電磁輻射和強(qiáng)光刺激，瞬目率減少，引起淚膜不穩(wěn)定，造成眼表?yè)p害，引發(fā)眼睛干澀、發(fā)癢、紅腫等干眼癥狀。目前干眼癥最基本的治療方法是使用人工淚液。近年來(lái)人工淚液從增加水分潤(rùn)濕眼表治療輕度干眼癥，逐漸向修復(fù)受損眼表細(xì)胞治療中重度干眼癥的方向發(fā)展。 殼聚糖具有良好的生物相容性、可生物降解且降解產(chǎn)物無(wú)毒，是理想的生物醫(yī)用材料。殼聚糖及其衍生物在眼科方面的研究表明，其可以促進(jìn)受損角膜上皮的愈合，促進(jìn)結(jié)膜上皮細(xì)胞生長(zhǎng)，可作為角膜上皮細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的組織工程材料，在眼表疾病治療方面具有廣泛的應(yīng)用前景。本實(shí)驗(yàn)主要以高分子量殼聚糖化學(xué)制備的羧甲基殼聚糖和羥乙基殼聚糖為材料，制作蒸發(fā)過(guò)強(qiáng)型大鼠干眼癥模型，并評(píng)價(jià)這兩種材料對(duì)緩解該類干眼癥狀的作用效果。實(shí)驗(yàn)方法：1.化學(xué)合成法制備出羧甲基殼聚糖和羥乙基殼聚糖，并對(duì)其進(jìn)行基團(tuán)取代位置、取代度、分子量等理化性質(zhì)的表征。2.在室內(nèi)溫度為22oC、空氣相對(duì)濕度為20%的環(huán)境中，通過(guò)縫合大鼠的上下眼瞼暴露角結(jié)膜6天來(lái)制作動(dòng)物干眼癥模型，并通過(guò)Schirmer I試驗(yàn)、淚膜破裂時(shí)間檢測(cè)、熒光素鈉染色以及病理組織切片來(lái)評(píng)價(jià)該模型建立效果。3.評(píng)價(jià)羧甲基殼聚糖和羥乙基殼聚糖對(duì)造模成功的大鼠干眼癥的緩解作用。以無(wú)菌淚液緩沖液為陰性對(duì)照、市售玻璃酸鈉為陽(yáng)性對(duì)照，將羧甲基殼聚糖和羥乙基殼聚糖配成具有一定pH值和滲透壓的水溶液，對(duì)模型組大鼠每天滴眼3次，分別于滴眼后2天、4天、7天、14天對(duì)各組大鼠進(jìn)行眼表檢查，淚液分泌量檢測(cè)、熒光素鈉染色觀察、淚膜破裂時(shí)間檢測(cè)、組織病理學(xué)切片檢查等。4.體外大鼠眼結(jié)膜杯狀細(xì)胞的原代培養(yǎng)。無(wú)菌環(huán)境下完整取下大鼠眼球，剪取結(jié)膜組織部分，置于含10%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)液中，以組織塊培養(yǎng)法進(jìn)行培養(yǎng)。顯微鏡下觀察遷出細(xì)胞形態(tài)，并通過(guò)免疫熒光染色鑒定結(jié)膜杯狀細(xì)胞的遷出生長(zhǎng)情況。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1、對(duì)羧甲基殼聚糖和羥乙基殼聚糖的基本理化性質(zhì)的測(cè)定結(jié)果顯示羧甲基殼聚糖和羥乙基殼聚糖的取代位均主要在C6位的羥基上，羧基取代度為0.98，羥乙基取代度為3.11，分子量分別為196kD和124kD。 2、通過(guò)縫合大鼠的上下眼瞼暴露角結(jié)膜的干眼癥模型組動(dòng)物，其淚液分泌量相對(duì)于正常組動(dòng)物明顯下降，淚膜破裂時(shí)間縮短、角膜上皮細(xì)胞部分缺失。眼球組織切片可見(jiàn)模型組動(dòng)物的眼球結(jié)膜、穹窿部結(jié)膜和瞼結(jié)膜中杯狀細(xì)胞數(shù)量急劇降低。上述結(jié)論說(shuō)明大鼠干眼模型制作成功，并為后面研究殼聚糖衍生物對(duì)干眼癥的緩解作用奠定了基礎(chǔ)。 3、本研究配制的羧甲基殼聚糖和羥乙基殼聚糖兩種滴眼液的pH值分別為7.31和7.39，滲透壓分別為319mOsm/kg和317mOsm/kg，均符合眼部用藥的基本要求。隨著滴眼液滴眼時(shí)間的增加，淚液緩沖液陰性組大鼠的各項(xiàng)眼表淚液指標(biāo)均較模型組的變化不明顯，角膜損傷至第14天仍為陽(yáng)性，淚液分泌量雖有所增加但只恢復(fù)至正常組的約40%。玻璃酸鈉組大鼠的角膜損傷至第14天已完全恢復(fù)，其淚液分泌量自第4天起明顯增加，至第7天已恢復(fù)至正常大鼠的85%，其后變化不大；羧甲基殼聚糖和羥乙基殼聚糖改善大鼠干眼癥狀的效果與玻璃酸鈉類似。眼表組織病理切片HE染色、AB-PAS、MUC5AC免疫熒光染色結(jié)果表明玻璃酸鈉、羧甲基殼聚糖和羥乙基殼聚糖均可促進(jìn)角膜細(xì)胞的修復(fù)，隨著滴眼時(shí)間的延長(zhǎng)，大鼠眼球結(jié)膜、穹窿部結(jié)膜和瞼結(jié)膜的杯狀細(xì)胞的含量也大幅增加。這些結(jié)果表明羧甲基殼聚糖和羥乙基殼聚糖均能緩解大鼠蒸發(fā)過(guò)強(qiáng)型干眼癥的癥狀，同時(shí)暗示這些物質(zhì)可以通過(guò)促進(jìn)結(jié)膜杯狀細(xì)胞修復(fù)來(lái)發(fā)揮作用的。 4、大鼠結(jié)膜杯狀細(xì)胞的原代培養(yǎng)，培養(yǎng)第2天貼壁組織塊邊緣會(huì)長(zhǎng)出少量細(xì)胞，到第4天細(xì)胞逐漸增多，細(xì)胞呈現(xiàn)多角形或梭形，第5天往后變化不明顯，有懸浮的死細(xì)胞出現(xiàn)。原代培養(yǎng)第2天到第7天對(duì)遷出細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光鑒定，結(jié)果表明該時(shí)間段內(nèi)杯狀細(xì)胞的生長(zhǎng)呈現(xiàn)先上升然后下降的趨勢(shì)。結(jié)論：羧甲基殼聚糖和羥乙基殼聚糖對(duì)大鼠蒸發(fā)過(guò)強(qiáng)型干眼癥起到了緩解作用，為治療VDT干眼癥的醫(yī)學(xué)材料研究提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：干眼 羧甲基殼聚糖 羥乙基殼聚糖 結(jié)膜杯狀細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R777.34
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-16
• 第一章 前言16-26
• 1.1 干眼癥的類型17
• 1.2 干眼癥的發(fā)病機(jī)制17-20
• 1.2.1 淚膜的穩(wěn)定性17-18
• 1.2.2 淚液動(dòng)力學(xué)18
• 1.2.3 炎癥18-19
• 1.2.4 神經(jīng)調(diào)控異常19-20
• 1.2.5 細(xì)胞凋亡20
• 1.2.6 性激素失調(diào)20
• 1.3 干眼癥動(dòng)物模型的建立20-23
• 1.3.1 蒸發(fā)過(guò)強(qiáng)型干眼模型21
• 1.3.2 淚液缺乏型干眼模型21
• 1.3.3 實(shí)驗(yàn)誘發(fā)干眼模型21-22
• 1.3.4 苯扎氯銨誘發(fā)干眼模型22
• 1.3.5 肉毒桿菌毒素 B 誘發(fā)干眼模型22
• 1.3.6 淚液高滲透壓性干眼模型22
• 1.3.7 神經(jīng)調(diào)控干眼模型22
• 1.3.8 性激素失調(diào)干眼模型22-23
• 1.4 干眼癥的治療23
• 1.5 殼聚糖及其衍生物在眼科方面的應(yīng)用23-25
• 1.6 本論文的研究目的及意義25-26
• 第二章 羧甲基殼聚糖和羥乙基殼聚糖的制備及表征26-35
• 2.1 材料、試劑與儀器26-28
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料26-27
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑27
• 2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器27-28
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法28-32
• 2.2.1 材料的制備與純化28-29
• 2.2.1.1 羧甲基殼聚糖的制備方法28
• 2.2.1.2 羥乙基殼聚糖的制備方法28
• 2.2.1.3 材料的純化方法28-29
• 2.2.2 材料性質(zhì)的測(cè)定29-31
• 2.2.2.1 水分的測(cè)定29
• 2.2.2.2 灰分的測(cè)定29-30
• 2.2.2.3 pH 的測(cè)定30
• 2.2.2.4 相對(duì)分子量的測(cè)定30
• 2.2.2.5 脫乙酰度的測(cè)定30-31
• 2.2.2.6 羧甲基殼聚糖羧基取代度的測(cè)定31
• 2.2.2.7 羥乙基殼聚糖羥基取代度的測(cè)定一元素分析法31
• 2.2.3 FTIR 表征31-32
• 2.3 結(jié)果與討論32-34
• 2.3.1 羧甲基殼聚糖和羥乙基殼聚糖的理化性質(zhì)32
• 2.3.2 FTIR 表征32-34
• 2.4 本章小結(jié)34-35
• 第三章 干眼癥動(dòng)物模型的建立35-51
• 3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)35-36
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物35
• 3.1.2 飼養(yǎng)環(huán)境35-36
• 3.2 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑36-37
• 3.2.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器36
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑與器械36-37
• 3.2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑36-37
• 3.2.2.2 實(shí)驗(yàn)器械37
• 3.3 干眼模型的建立方法37-38
• 3.4 評(píng)價(jià)指標(biāo)及其測(cè)試方法38-42
• 3.4.1 觀察大鼠眼表變化情況38
• 3.4.2 Schirmer I 試驗(yàn)38
• 3.4.3 淚膜破裂時(shí)間的測(cè)定38-39
• 3.4.4 熒光素染色39
• 3.4.5 病理組織切片觀察39-42
• 3.4.5.1 眼球石蠟切片制作39-40
• 3.4.5.2 石蠟切片 HE 染色40-41
• 3.4.5.3 石蠟切片 AB-PAS 染色41
• 3.4.5.4 眼球冰凍切片制作及觀察41-42
• 3.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果42-49
• 3.5.1 眼表觀察及熒光素鈉染色42-43
• 3.5.2 Schirmer I 試驗(yàn)43-44
• 3.5.3 淚膜破裂時(shí)間（BUT）44
• 3.5.4 組織切片觀察44-49
• 3.5.4.1 角膜組織石蠟切片 HE 染色44-45
• 3.5.4.2 結(jié)膜組織石蠟切片 HE 染色45-47
• 3.5.4.3 眼球石蠟切片 AB-PAS 染色47-48
• 3.5.4.4 眼球冰凍切片免疫組化染色48-49
• 3.6 討論49-50
• 3.7 本章小結(jié)50-51
• 第四章 殼聚糖衍生物對(duì)大鼠干眼癥的作用評(píng)價(jià)51-69
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法51-53
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料51
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑51-52
• 4.1.3 實(shí)驗(yàn)器械52
• 4.1.4 主要實(shí)驗(yàn)儀器52-53
• 4.2 滴眼液的制備及理化性質(zhì)測(cè)定53-54
• 4.2.1 滴眼液的配制53-54
• 4.2.2 理化性質(zhì)的測(cè)定54
• 4.2.2.1 pH 的測(cè)定54
• 4.2.2.2 滲透壓的測(cè)定54
• 4.3 眼部給藥54
• 4.4 滴眼后的觀察54
• 4.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果54-67
• 4.5.1 各種滴眼液的理化性質(zhì)54-55
• 4.5.2 眼表觀察及熒光素鈉染色55-56
• 4.5.3 Schirmer I 試驗(yàn)56-57
• 4.5.4 淚膜破裂時(shí)間57
• 4.5.5 眼球石蠟切片 HE 染色57-62
• 4.5.5.1 角膜組織石蠟切片 HE 染色57-58
• 4.5.5.2 結(jié)膜組織石蠟切片 HE 染色58-62
• 4.5.6 眼球石蠟切片 AB-PAS 染色62-65
• 4.5.7 眼球冰凍切片免疫組化染色65-67
• 4.6 討論67-68
• 4.7 本章小結(jié)68-69
• 第五章 大鼠眼結(jié)膜杯狀細(xì)胞原代培養(yǎng)的初步探究69-75
• 5.1 實(shí)驗(yàn)試劑及器材69-70
• 5.2 實(shí)驗(yàn)儀器70
• 5.3 大鼠眼結(jié)膜杯狀細(xì)胞原代培養(yǎng)70-71
• 5.4 細(xì)胞的免疫熒光鑒定71
• 5.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果71-73
• 5.5.1 大鼠結(jié)膜杯狀細(xì)胞的原代培養(yǎng)71-72
• 5.5.2 細(xì)胞的免疫熒光鑒定72-73
• 5.6 討論73-74
• 5.7 本章小結(jié)74-75
• 全文總結(jié)75-77
• 參考文獻(xiàn)77-86
• 論文的創(chuàng)新點(diǎn)與不足86-87
• 致謝87
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷87
• 發(fā)表的學(xué)術(shù)論文87-88

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：殼聚糖衍生物對(duì)蒸發(fā)過(guò)強(qiáng)型大鼠干眼癥緩解作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：384107