發(fā)布時(shí)間：2022-02-09 18:30

　　背景及目的:年齡相關(guān)性黃斑變性（age-related macular degeneration,AMD）又稱老年性黃斑變性,常伴有不可逆的視功能嚴(yán)重?fù)p害,是西方發(fā)達(dá)國(guó)家首位致盲性眼病,隨著我國(guó)人口老齡化日趨嚴(yán)重,其患病率也日益增加。然而,AMD發(fā)病機(jī)制尚不十分明確,因此,研究AMD的發(fā)病機(jī)制迫在眉睫。RPE細(xì)胞對(duì)于維持正常視功能及眼底微環(huán)境有著重要作用。研究發(fā)現(xiàn),RPE細(xì)胞功能障礙與AMD發(fā)病有關(guān)。隨著年齡增長(zhǎng),RPE細(xì)胞脂褐素不斷沉積,研究已證明,其主要成分A2E可導(dǎo)致DNA損傷。端粒位于染色體末端,與衰老密切相關(guān),為DNA脆性位點(diǎn),由此,我們推測(cè),A2E可導(dǎo)致端粒DNA損傷,加速RPE細(xì)胞衰老,改變RPE細(xì)胞分泌表型,從而影響眼底微環(huán)境,為AMD的發(fā)病機(jī)制之一。因此,本課題主要探索A2E加速RPE細(xì)胞衰老及其相關(guān)機(jī)制在AMD發(fā)病中的作用,為尋找新的治療靶點(diǎn)奠定理論依據(jù)。方法:本課題使用ARPE19細(xì)胞株。第一步,A2E孵育RPE細(xì)胞,經(jīng)藍(lán)光照射建立光損傷模型;通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)觀察不同濃度A2E對(duì)于RPE細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,從而選擇合適的干預(yù)濃度。進(jìn)一步,通過(guò)Westernblot檢測(cè)D... 

【文章來(lái)源】：上海交通大學(xué)上海市211工程院校985工程院校教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

AMD的病理分期[6]

圖 2. 衰老過(guò)程中眼底病理改變示意圖[22]Fig.2 RPE cells in 3-year old child and 80-year old person.[22]目前已經(jīng)證實(shí)，過(guò)多無(wú)功能的 RPE 細(xì)胞累積導(dǎo)致衰老及疾病的發(fā)生[23]。臨床及體外研究發(fā)現(xiàn)，老年人 RPE 細(xì)胞的復(fù)制能力及對(duì)損傷應(yīng)答能力在衰老過(guò)程中不斷減退[24, 25]，吞噬功能不斷下降，導(dǎo)致過(guò)度代謝產(chǎn)物堆積，尤其是脂褐

上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文與磷脂酰乙醇胺（phosphatidylethanolamine, PE）發(fā)生Schiff-base反應(yīng)形成A2PE，最終通過(guò)磷酸水解形成 A2E。RPE 細(xì)胞中，A2E 具有光氧化損傷作用，對(duì)于430-460nm 波段（即藍(lán)光波段）光照十分敏感，可產(chǎn)生單線態(tài)氧、超氧化物，或通過(guò)環(huán)氧化產(chǎn)生環(huán)氧化物等活性氧簇（ROS），進(jìn)而對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生氧化損傷。此外，高濃度 A2E 導(dǎo)致細(xì)胞膜溶解，直接破壞 RPE 細(xì)胞[29]；A2E 可以降低線粒體膜電位，限制 RPE 細(xì)胞的氧化磷酸化，影響 ATP 生成，降低吞噬功能[30]；A2E通過(guò)提高溶酶體內(nèi) PH 來(lái)抑制溶酶體降解功能[31]；A2E 影響膽固醇的流出，并且抑制了酸性脂肪酶，影響 RPE 細(xì)胞中膽固醇循環(huán)[32]。重要地是，有研究證實(shí)，藍(lán)光誘導(dǎo)下 A2E 可以攻擊 DNA，使 G 氧化為 8-oxo-dG，造成 DNA 損傷[33]。另一方面，A2E 可以通過(guò)自身環(huán)氧化形成 A2E 環(huán)氧化物，使得堿基氧化，造成DNA 損傷，并且，抗氧化劑可以緩解這一現(xiàn)象[34]。


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