瞼裂狹小綜合癥是一種常染色體遺傳病。病人主要表現(xiàn)瞼裂狹小、上瞼下垂、到轉(zhuǎn)型內(nèi)眥贅皮、內(nèi)眥間距過大等眼瞼發(fā)育缺陷,部分女性病人還伴隨卵巢早衰和不育。轉(zhuǎn)錄因子FOXL2突變是造成瞼裂狹小綜合癥的主要原因,這些FOXL2突變包括基因內(nèi)突變和染色體易位、基因組缺失等基因外突變。大量研究顯示,FOXL2的表達(dá)受到遠(yuǎn)距離調(diào)控元件的控制。在本實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行小鼠piggyBac （PB）轉(zhuǎn)座子插入誘變過程中,我們發(fā)現(xiàn)了一個(gè)突變品系B61aR14。該品系純合突變小鼠呈現(xiàn)面部發(fā)育缺陷,主要包括瞼裂狹小和上頜骨發(fā)育不良�；貜�(fù)突變實(shí)驗(yàn)確認(rèn)這些缺陷是由PB插入而不是背景突變造成。該品系PB插入位于9號染色體非編碼RNAAK087804內(nèi)含子中的一個(gè)TTAA位點(diǎn)上。反轉(zhuǎn)錄PCR發(fā)現(xiàn)AK087804在卵巢而非面部表達(dá)。PB插入破壞了AK087804的表達(dá),但轉(zhuǎn)基因表達(dá)AK087804不能拯救純合小鼠面部發(fā)育缺陷。因此,純合小鼠面部發(fā)育缺陷與AK087804無關(guān)。距離PB插入位點(diǎn)約160kb的轉(zhuǎn)錄因子Foxl2在胚胎面部表達(dá),并且在突變體中表達(dá)水平下降。PB插入部分破壞了Foxl2在胚胎面部腮弓區(qū)域的表達(dá)分布,并伴隨Fo... 

【文章來源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 序言
    1.1 顱面發(fā)育和遺傳缺陷
        1.1.1 神經(jīng)嵴發(fā)育
        1.1.2 面部的生長和模式形成
        1.1.3 顱面骨骼的誘導(dǎo)和分化
        1.1.4 骨縫生長和顱縫早閉
    1.2 性別決定、卵巢和卵泡發(fā)育
        1.2.1 哺乳動(dòng)物性別決定機(jī)制
        1.2.2 卵巢和卵泡發(fā)育
    1.3 基因組中的長距離調(diào)控元件
        1.3.1 長距離調(diào)控元件的主要類型
        1.3.2 長距離調(diào)控元件的作用機(jī)制
        1.3.3 長距離調(diào)控元件的基本特征和研究方法
        1.3.4 長距離調(diào)控元件和人類疾病
2 Foxl2在小鼠面部和卵巢發(fā)育中的功能研究
    2.1 背景知識(shí)
        2.1.1 瞼裂狹小綜合癥及其臨床特征
        2.1.2 FOXL2基因突變導(dǎo)致瞼裂狹小綜合癥
        2.1.3 Foxl2的基因結(jié)構(gòu)、進(jìn)化和表達(dá)
        2.1.4 Foxl2的發(fā)育生物學(xué)功能
        2.1.5 Foxl2的細(xì)胞生物學(xué)功能和作用機(jī)制
        2.1.6 選題的目的和意義
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 PB插入純合突變小鼠面部發(fā)育缺陷
        2.2.2 PB插入突變的定位和鑒定
        2.2.3 PB插入破壞了AK087804的表達(dá)
        2.2.4 轉(zhuǎn)基因表達(dá)AK08704不能拯救突變小鼠面部缺陷
        2.2.5 PB插入造成Foxl2部分失活
        2.2.6 面部發(fā)育相關(guān)標(biāo)記基因表達(dá)檢測
        2.2.7 純合雌鼠卵巢功能下降
    2.3 小結(jié)與討論
3 Foxl2基因表達(dá)長距離調(diào)控元件初探
    3.1 背景知識(shí)
        3.1.1 PIS缺失突變導(dǎo)致FoxL2表達(dá)下調(diào)
        3.1.2 導(dǎo)致BPES的FOXL2基因外突變
        3.1.3 位于FOXL2上游的遠(yuǎn)距離調(diào)控元件
        3.1.4 選題的目的和意義
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 確定PB插入位點(diǎn)附近候選調(diào)控區(qū)段
        3.2.2 PB插入位點(diǎn)兩側(cè)存在進(jìn)化保守區(qū)域
        3.2.3 ECR1可以促進(jìn)報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄
        3.2.4 ECR1含有DNase I超敏感位點(diǎn)
        3.2.5 ECR1與Foxl2啟動(dòng)子區(qū)域相互作用
        3.2.6 ECR1單獨(dú)作用不能控制Foxl2基因正常表達(dá)
    3.3 小結(jié)與討論
4 材料與方法
    4.1 小鼠品系
        4.1.1 PB和PBase小鼠品系
        4.1.2 BAC轉(zhuǎn)基因小鼠培育
    4.2 表型分析
        4.2.1 茜素紅-阿辛藍(lán)染色
        4.2.2 micro-CT掃描成像
    4.3 組織學(xué)
        4.3.1 組織切片
        4.3.2 蘇木精-伊紅染色
    4.4 分子生物學(xué)
        4.4.1 GT-PCR
        4.4.2 質(zhì)粒構(gòu)建
        4.4.3 RNA實(shí)驗(yàn)
        4.4.4 蛋白實(shí)驗(yàn)
        4.4.5 小鼠全胚原位雜交
        4.4.6 DNase I超敏感位點(diǎn)作圖
        4.4.7 染色質(zhì)構(gòu)象捕獲實(shí)驗(yàn)
    4.5 細(xì)胞生物學(xué)
        4.5.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        4.5.2 β-半乳糖苷酶試驗(yàn)和熒光素酶試驗(yàn)
    4.6 生物信息學(xué)
        4.6.1 Blast和序列比對
        4.6.2 人-小鼠進(jìn)化保守區(qū)域分析
    4.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)
總結(jié)和展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3496200