角膜堿燒傷是臨床上常見的眼部損傷,堿燒傷后引起角膜持續(xù)潰瘍及新生血管,進而破壞角膜高度透明及無血管狀態(tài),因此一直受到關(guān)注。然而,堿燒傷后角膜傷口愈合過程仍不清楚。缺氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）是參與低氧反應(yīng)的關(guān)鍵因子,在缺血性視網(wǎng)膜病變中能引發(fā)血管生成,水通道蛋白1（aquaporin1,AQP1）在眼睛各組織廣泛表達,與眼部多種病理學(xué)過程相關(guān)。由于兩者在眼部損傷病理中的重要作用,近來引起人們的普遍關(guān)注。本研究首先對小鼠角膜堿創(chuàng)傷后的病理表現(xiàn)進行探究,其次利用免疫熒光染色和qRT-PCR技術(shù)檢測HIF-1α和AQP1在角膜堿創(chuàng)傷后各時期的表達情況。結(jié)果顯示,堿創(chuàng)傷后的小鼠角膜表層出現(xiàn)空泡,基質(zhì)層纖維排布雜亂。正常組HIF-1α和AQP1分別在角膜上皮基底膜及內(nèi)皮層有弱表達;堿燒傷后1 d、4 d和7 d HIF-1αmRNA表達上調(diào),創(chuàng)傷后1 d和7 d AQP1 mRNA表達上調(diào)。為明確在堿性燒傷后AQP1對小鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞在傷口修復(fù)時的影響,本實驗通過MTT實驗及流式細(xì)胞術(shù)得到一定濃度的CoCl₂用于... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

小鼠角膜組織HE染色圖

24圖 3-2 小鼠視網(wǎng)膜組織 HE 染色圖。A 、B、C、D、E 分別為對照及角膜堿創(chuàng)傷后 1 d、4 d、7 d、14 d 各時間段 HE 結(jié)果，A1、B1、C1、D1、E1 分別為上述圖片區(qū)域放大圖，圖中 RGC表示視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞層，INL、ONL 分別為視網(wǎng)膜內(nèi)外核層；F 為角膜堿創(chuàng)傷后各時間段視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞數(shù)量相比于對照組的數(shù)量統(tǒng)計，G 為角膜堿創(chuàng)傷后各組視網(wǎng)膜外核層與內(nèi)核層厚度比率統(tǒng)計。結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（mean ± standard deviation）表示，n = 3。與對照組對比，*P < 0.05，* *P < 0.01.Figure 3-2 The HE staining of Retinal. A, B, C, D and E were the results of the control groupand 1 d, 4 d, 7 d and 14 d after the alkali burn of corneal respectively. A1, B1, C1, D1 were partialenlarged view of the above picture respectively. RGC represents the retinal ganglion cell layer,and INL represents the retinal inner nuclear layer, and ONL represents the retinal outer nuclearlayer in the figure. F represents the number of retinal ganglion cells in each group after cornealalkali burns compared with control group. G represents the ratio of the the thickness of the outernuclear layer to the inner nuclear layer in each group after corneal alkali burn. Data werepresented as mean ± standard deviation, n = 3.*P < 0.05,* *P < 0.01, and compared with thecontrol group.

對照組數(shù)量對比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。視網(wǎng)膜外核層與內(nèi)核層厚度比率統(tǒng)計結(jié)果發(fā)現(xiàn)在堿創(chuàng)傷后 1 d 其數(shù)值上升，說明視網(wǎng)膜組織發(fā)生一定程度水腫，之后其它各時期與對照組別的正常組織相比，外核層與內(nèi)核層厚度比率無明顯變化（圖3-2）。3.2 小鼠角膜堿燒傷后 HIF-1α 和 AQP1 的表達為了得到堿創(chuàng)傷后 HIF-1α 和 AQP1 在角膜上的變化情況，我們采用免疫熒光染色和 qRT-PCR 技術(shù)對其進行了探究。免疫熒光染色結(jié)果為，我們的對照組中，HIF-1α 僅在角膜上皮基底膜有表達；堿灼傷后 1 d ，HIF-1α 在角膜上皮層開始有表達，堿創(chuàng)傷后 4 d 和 7 d，除在眼角膜上皮層的有出現(xiàn)外，在基質(zhì)層也出現(xiàn)表達，至堿創(chuàng)傷后 14 d，HIF-1α 只在角膜上皮層有表達，其余各層無 HIF-1α出現(xiàn)（圖 3-3）。免疫熒光染色結(jié)果展示，對照實驗中，AQP1 僅在角膜內(nèi)皮層有表達，角膜受到堿創(chuàng)傷后 4 d 和 7 d， AQP1 在內(nèi)皮細(xì)胞和基質(zhì)層細(xì)胞中都有表達，至堿創(chuàng)傷后 14 d，AQP1 僅在內(nèi)皮層有出現(xiàn)（圖 3-4）。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3409921