目的:建立穩(wěn)定表達(dá)融合自殺基因CD/UPRT.UL49的CNE-2鼻咽癌細(xì)胞株。方法:構(gòu)建表達(dá)載體pcDNA3.1（-）E6.BARF1p.CD/UPRT.UL49,經(jīng)脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染CNE-2細(xì)胞,G418和前體藥物5-氟胞嘧啶篩選出陽性克隆細(xì)胞并擴(kuò)大培養(yǎng)。抽提陽性克隆細(xì)胞總蛋白質(zhì),Western-blotting檢測(cè)目的基因表達(dá)。結(jié)果:融合自殺基因CD/UPRT.UL49在CNE-2轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)。結(jié)論:本組通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù),成功地建立了穩(wěn)定表達(dá)融合CD/UPRT.UL49基因的CNE-2細(xì)胞株。 

【文章來源】：臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志. 2014,28(03)北大核心

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

圖１融合啟動(dòng)子Ｅ６．ＢＡＲＦ１ｐ的測(cè)序圖譜

臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志第２８卷圖１融合啟動(dòng)子Ｅ６．ＢＡＲＦ１ｐ的測(cè)序圖譜圖２目的基因序列ＣＤ／ＵＰＲＴ．ＵＬ４９的測(cè)序圖譜圖３ＣＮＥ－２細(xì)胞中融合蛋白ＣＤ／ＵＰＲＴ．ＵＬ４９的Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔｔｉｎｇ圖３討論將基因治療與放射治療結(jié)合，可以增加鼻咽癌的放射敏感性、提高放射療效、降低放射線的使用劑量，尤以自殺基因ＣＤ／ＵＰＲＴ效果顯著。胞嘧啶脫氨酶（ｃｙｔｏｓｉｎｅｄｅａｍｉｎａｓｅ，ＣＤ）將５－ＦＣ轉(zhuǎn)化為有毒的５－ＦＵ，隨后形成５＇－氟尿苷酸（５′－ｆｌｕｏｒｏｕｒｉｄｉｎｅｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ，５－ＦｕＴＰ）或５′－氟脫氧尿苷酸（５＇－ｆｌｕｏｒｏｄｅｏｘｙｕｒｉｄｙｌａｔｅ，５－ＦｄｕＴＰ），前者可以整合到ＲＮＡ，干擾ＲＮＡ合成；后者抑制腺苷酸合成酶，干擾ＤＮＡ的合成，導(dǎo)致細(xì)胞死亡〔１〕。ＵＰＲＴ基因的產(chǎn)物則能直接將５－ＦＵ轉(zhuǎn)化為５－ＦｕＭＰ，然后轉(zhuǎn)化為５－ＦｄｕＭＰ和５－ＦｕＴＰ，從而減少了多種競(jìng)爭(zhēng)酶對(duì)５－ＦＵ的降解〔２〕�；谀蜞奏ち姿岷颂腔D(zhuǎn)移酶（ｕｒａｃｉｌｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓ，ＵＰＲＴ）能明顯增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)５－ＦＵ的敏感性，ＣＤ和ＵＰＲＴ共表達(dá)時(shí)則可能產(chǎn)生殺傷腫瘤細(xì)胞的協(xié)同效應(yīng)。然而如能進(jìn)一步提高腫瘤的瘤內(nèi)轉(zhuǎn)染效率，增加基因轉(zhuǎn)染的靶向性，如ＥＢ病毒編碼的潛伏膜蛋白－１的調(diào)控序列來調(diào)節(jié)自殺基因的腫瘤特異性表達(dá)〔３－４〕，進(jìn)行鼻咽癌放射－基因治療，可望有更好的臨床應(yīng)用前景。因此，深入探討如何增

臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志第２８卷圖１融合啟動(dòng)子Ｅ６．ＢＡＲＦ１ｐ的測(cè)序圖譜圖２目的基因序列ＣＤ／ＵＰＲＴ．ＵＬ４９的測(cè)序圖譜圖３ＣＮＥ－２細(xì)胞中融合蛋白ＣＤ／ＵＰＲＴ．ＵＬ４９的Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔｔｉｎｇ圖３討論將基因治療與放射治療結(jié)合，可以增加鼻咽癌的放射敏感性、提高放射療效、降低放射線的使用劑量，尤以自殺基因ＣＤ／ＵＰＲＴ效果顯著。胞嘧啶脫氨酶（ｃｙｔｏｓｉｎｅｄｅａｍｉｎａｓｅ，ＣＤ）將５－ＦＣ轉(zhuǎn)化為有毒的５－ＦＵ，隨后形成５＇－氟尿苷酸（５′－ｆｌｕｏｒｏｕｒｉｄｉｎｅｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ，５－ＦｕＴＰ）或５′－氟脫氧尿苷酸（５＇－ｆｌｕｏｒｏｄｅｏｘｙｕｒｉｄｙｌａｔｅ，５－ＦｄｕＴＰ），前者可以整合到ＲＮＡ，干擾ＲＮＡ合成；后者抑制腺苷酸合成酶，干擾ＤＮＡ的合成，導(dǎo)致細(xì)胞死亡〔１〕。ＵＰＲＴ基因的產(chǎn)物則能直接將５－ＦＵ轉(zhuǎn)化為５－ＦｕＭＰ，然后轉(zhuǎn)化為５－ＦｄｕＭＰ和５－ＦｕＴＰ，從而減少了多種競(jìng)爭(zhēng)酶對(duì)５－ＦＵ的降解〔２〕。基于尿嘧啶磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶（ｕｒａｃｉｌｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓ，ＵＰＲＴ）能明顯增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)５－ＦＵ的敏感性，ＣＤ和ＵＰＲＴ共表達(dá)時(shí)則可能產(chǎn)生殺傷腫瘤細(xì)胞的協(xié)同效應(yīng)。然而如能進(jìn)一步提高腫瘤的瘤內(nèi)轉(zhuǎn)染效率，增加基因轉(zhuǎn)染的靶向性，如ＥＢ病毒編碼的潛伏膜蛋白－１的調(diào)控序列來調(diào)節(jié)自殺基因的腫瘤特異性表達(dá)〔３－４〕，進(jìn)行鼻咽癌放射－基因治療，可望有更好的臨床應(yīng)用前景。因此，深入探討如何增

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]BARF1基因的啟動(dòng)子活性及其在鼻咽癌細(xì)胞中腫瘤特異性分析研究[J]. 卿菁,趙素萍,蔣衛(wèi)紅,章華.  現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué). 2013(05)
[2]靶向性質(zhì)粒表達(dá)載體pcDNA3.1（-）CMV·Egr-1CDglyTK的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染研究[J]. 唐瑤云,肖健云,趙素萍,唐愛發(fā),夏昆,陳主初.  中國(guó)耳鼻咽喉顱底外科雜志. 2003(01)



本文編號(hào)：3391913