目的:觀察調(diào)控衰老標(biāo)記蛋白30（Senescence Marker Protein 30,SMP30）含量的改變對人晶狀體上皮細(xì)胞株（Human Lens Epithelial Cells,HLEC）SRA01/04增殖和凋亡的影響,為白內(nèi)障病因和預(yù)防機(jī)制的研究提供新的思路。方法:（1）預(yù)感染實(shí)驗(yàn)確定SRA01/04細(xì)胞是否易于被慢病毒感染及其最佳感染條件:將處于對數(shù)生長期的SRA01/04細(xì)胞按2×10³/孔的密度接種96孔板,待細(xì)胞密度增至20%時(shí),用慢病毒GV115-NC（pGcsil-004）在四種培養(yǎng)液（完全培養(yǎng)基、含5μg/ml助感染試劑的完全培養(yǎng)基、感染增強(qiáng)液、含5μg/ml助感染試劑的感染增強(qiáng)液）及三種復(fù)感染指數(shù)（1、10、100）的培養(yǎng)條件下感染SRA01/04細(xì)胞,每組三個(gè)樣本、所有實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)三次。（2）SMP30過表達(dá)和沉默穩(wěn)定株構(gòu)建:確定好感染條件和最佳病毒滴度后,將處于對數(shù)生長期的SRA01/04細(xì)胞按5×10⁴/孔接種6孔板,待細(xì)胞密度增至20%時(shí)采用兩組RGN（Regucalcin,SMP30）慢病毒LV-RG... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

人晶狀體上皮細(xì)胞SRA01/04按2×103/孔均勻接種96孔板，使用細(xì)胞計(jì)數(shù)CCK-8法在貼壁后第1天、2天、3天、4天、5天檢測細(xì)胞活力，繪制增殖曲線

圖 1-2 用含體積分?jǐn)?shù)為 10%胎牛血清的 1640 培養(yǎng)基，在 37℃、含 5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培體上皮細(xì)胞 SRA01/04，光鏡下觀察細(xì)胞均勻貼壁生長，形態(tài)呈梭形或多邊形，細(xì)胞核較黑較間隙明顯，細(xì)胞質(zhì)均勻。Figure1-2 The human lens epithelial cells SRA01/04 were cultured in a 1640 medium containingl bovine serum at 37°C in a 5% CO2incubator. The adherent growth of the cells was observed t microscope. Shape or polygon, the nucleus is black, the cell gap is obvious, and the cytoplaform.2 慢病毒感染 SRA01/04 細(xì)胞通過預(yù)感染實(shí)驗(yàn)，我們確定了 SRA01/04 細(xì)胞最佳感染條件rmal+Polybrene（5μ g/ml）（即完全培養(yǎng)基+5μ g/ml 的助感染試劑），5（即病毒數(shù)量與細(xì)胞總數(shù)之比為 5:1），在此條件下感染細(xì)胞狀態(tài)較綠色熒光的細(xì)胞融合率為 80%左右（圖 2-1）。

圖 2-2 100X:放大率為 100 倍;B.jpg:光鏡視野;G.jpg:綠色熒光顯微鏡視野;CON:正常對照組細(xì)；NC-OE:SMP30 過表達(dá)陰性對照組細(xì)胞；OE：SMP30 過表達(dá)組細(xì)胞；NC-KD:SMP30 沉默陰性對照組胞； KD:SMP30 沉默組細(xì)胞。Figure 2-2 100X: Magnification 100; B.jpg: Light microscope field of view; G.jpg: Green fluorescenceicroscopy field of view; CON: Normal control group cells; NC-OE: SMP30 overexpression negativeontrol group cells; OE: SMP30 overexpression group cells; NC-KD: SMP30 knock down negative controlroup cells; KD: SMP30 knock down group cells.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]高鈣狀態(tài)對人晶狀體上皮細(xì)胞株SRA01/04氧化應(yīng)激水平的影響[J]. 陳曦,韓子豪,李舒凝,李松蔓,李艷瑋,梁皓.  眼科新進(jìn)展. 2017(10)
[2]β淀粉樣蛋白與年齡相關(guān)性白內(nèi)障[J]. 鄭天玉,徐婕,盧奕.  中國眼耳鼻喉科雜志. 2017(05)
[3]白內(nèi)障患者房水中淀粉樣蛋白含量及其與年齡的相關(guān)性研究[J]. 李臻,張健,蔣慧中,盧艷.  眼科. 2017(04)
[4]過氧化氫誘導(dǎo)的急性氧化應(yīng)激對人晶狀體上皮細(xì)胞形態(tài)、生存率及衰老標(biāo)記蛋白30（SMP30）表達(dá)的影響[J]. 李舒凝,陳曦,張鴻侃,蔣林志,梁皓,譚少健.  眼科新進(jìn)展. 2017(04)
[5]Aquaporin-1 down regulation associated with inhibiting cell viability and inducing apoptosis of human lens epithelial cells[J]. Hong-Hua Zheng,Guo-Xing Xu,Jian Guo,Li-Cheng Fu,Yao Yao.  International Journal of Ophthalmology. 2016(01)
[6]CXCR4慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及細(xì)胞轉(zhuǎn)染[J]. 段司沁,范遙,趙雪,曹園芝,譚毅,龍北國,馬偉峰.  實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志. 2015(17)
[7]衰老標(biāo)記蛋白30在不同年齡白內(nèi)障患者晶狀體上皮細(xì)胞中的表達(dá)變化[J]. 賴偉霞,譚少健,李霞,鄒文進(jìn),蔣林志,梁皓.  中華實(shí)驗(yàn)眼科雜志. 2014 (06)
[8]晶狀體蛋白與年齡相關(guān)性白內(nèi)障研究進(jìn)展[J]. 姚瑤,徐國興.  國際眼科雜志. 2014(02)
[9]白內(nèi)障晶狀體的蛋白質(zhì)組學(xué)研究進(jìn)展[J]. 孫亮,李軍花,倪茂巍,朱忠欣,叢維濤,金利泰.  中國醫(yī)藥生物技術(shù). 2012(05)
[10]糖尿病性白內(nèi)障和年齡相關(guān)性白內(nèi)障晶狀體蛋白質(zhì)組學(xué)的差異分析[J]. 禹倩倩,姚勇,儲(chǔ)兆東,陶永輝,邵珺,黃玉政.  中華實(shí)驗(yàn)眼科雜志. 2012 (06)



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