目的初步研究色素上皮衍生因子（Pigment epithelium-derived factor,PEDF）對(duì)氧化應(yīng)激損傷下視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞（adult retinal pigment epithelial-19,ARPE-19）中解偶聯(lián)蛋白2（the uncoupling protein 2,UCP2）表達(dá)的影響。方法將ARPE-19細(xì)胞分為不同濃度H₂O₂（0,75,150和200μmol/L）氧化應(yīng)激損傷組,持續(xù)損傷24小時(shí)。保護(hù)組使用上述不同濃度H₂O₂損傷時(shí),同時(shí)加入200ng/ml PEDF處理24小時(shí)。利用活細(xì)胞實(shí)時(shí)檢測(cè)儀,CCK-8實(shí)驗(yàn),LDH釋放法及PI染色法測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)曲線及細(xì)胞活力,并對(duì)不同濃度損傷組及PEDF保護(hù)組中的細(xì)胞進(jìn)行UCP2免疫熒光標(biāo)記。利用RT-PCR及Real-Time PCR檢測(cè)ARPE-19細(xì)胞中UCP2 mRNA表達(dá)情況并作半定量分析,同時(shí)檢測(cè)150μM H₂O₂損傷下ARPE-19不同代數(shù)細(xì)胞內(nèi)凋亡基因cas... 

【文章來源】：西安醫(yī)學(xué)院陜西省

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

不同濃度HO損傷下的ARPE-19細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線

顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，結(jié)果顯示伴隨H O 濃度的增加，細(xì)胞形態(tài)皺縮且凋亡數(shù)目增加，但PEDF處理后，顯著減少了氧化應(yīng)激損傷下凋亡細(xì)胞的數(shù)量，細(xì)胞形態(tài)較氧化損傷組中胞質(zhì)飽滿，且基本呈長(zhǎng)梭型（圖2）。圖 1 不同濃度 H O 損傷下的 ARPE-19 細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線注釋：cell index 細(xì)胞生長(zhǎng)指數(shù)，反應(yīng)細(xì)胞活力。通過 xCell-igence RTCADP 儀器檢測(cè) ARPE-19 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線并利用不同濃度 H O (0,50,75,150,200,300 和 500μM）處理 24 小時(shí)。 隨著 H O 濃度增加，細(xì)胞死亡和皺縮細(xì)胞數(shù)目增加（p <0.05，n = 6）。 最終選擇 H O 的處理濃度為（0,75,150 和 200μM）。 * p <0.05 表示與 0μM H O 組相比，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

細(xì)胞生長(zhǎng)曲線結(jié)果表示隨著H O 濃度增加，細(xì)胞活性逐漸下降，細(xì)胞生長(zhǎng)指數(shù)明顯降低。當(dāng)H O 濃度為75μM和150μM時(shí)加入PEDF處理后，其細(xì)胞活性明顯增加，分別為25%(±4.5) 和75%(±5.2)（圖3A/ B）。當(dāng)H O 濃度為200μM時(shí)，兩組細(xì)胞間未發(fā)現(xiàn)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（圖3C）。同時(shí)發(fā)現(xiàn)PEDF處理組與未處理組兩組細(xì)胞的存活率有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p<0.05）。利用CCK-8實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證這一結(jié)果，如圖3D所示，PEDF能夠有效地保護(hù)細(xì)胞免受H O 誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡，但是PEDF的保護(hù)作用在不同濃度H O 處理組間比較未發(fā)現(xiàn)明顯變化（p>0.05）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]滲出性老年黃斑變性視力性質(zhì)分析[J]. 邱峰,陶軍,王雅文,仝慧娟.  中國(guó)實(shí)用眼科雜志. 2014 (07)
[2]老年黃斑變性的患病情況[J]. 曹翠萍,王菡,任廣運(yùn),劉志剛.  中國(guó)老年學(xué)雜志. 2013(08)



本文編號(hào)：3279218