本文關(guān)鍵詞：實時熒光PCR檢測真菌性角膜炎常見致病菌種方法的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：實時熒光PCR檢測真菌性角膜炎常見致病菌種方法的建立 目的：真菌性角膜炎是一種由致病真菌引發(fā)的致盲率很高的眼科常見的角膜感染性疾病，在我國，鐮刀菌是真菌性角膜炎最常見致病菌，其中又以茄病鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、串珠鐮刀菌為著，本研究旨在建立真菌性角膜炎常見致病菌中茄病鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、串珠鐮刀菌的實時熒光PCR檢測方法。 方法：通過檢索GenBank真菌的COI基因序列，首次設(shè)計茄病鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、串珠鐮刀菌的種特異性引物，對模板DNA進行倍比稀釋，確定反應(yīng)的靈敏度；使用青霉、煙曲霉、白色念珠菌等真菌進行實時熒光PCR，觀察設(shè)計引物的特異性。優(yōu)化實驗反應(yīng)條件，建立了SYBR Green Ⅰ實時熒光PCR對鐮刀菌快速檢測的方法。 結(jié)果：所設(shè)計引物特異性強、敏感性高，可對茄病鐮刀菌、尖孢鐮刀菌及串珠鐮刀菌的靶DNA進行定量分析，該檢測方法的靈敏度達1pg級。引物特異性檢測實驗結(jié)果表明，只有與引物對應(yīng)的目的菌種DNA發(fā)生擴增，，產(chǎn)生特異的單峰熔解曲線，其它種屬真菌均未發(fā)生擴增，表明設(shè)計的引物具有良好的種特異性 結(jié)論：研究中建立的實時熒光PCR方法能特異、靈敏的檢測出臨床真菌性角膜炎中三種最常見鐮刀菌的感染，為臨床鐮刀菌感染的診斷提供了一種快速、準確的方法。
【關(guān)鍵詞】：實時熒光PCR 真菌性角膜炎 鐮刀菌 COI基因
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R772.21
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 第一章 前言9-13
• 第二章 材料與方法13-21
• 2.1 材料13-16
• 2.1.1 實驗菌株13
• 2.1.2 主要試劑13-14
• 2.1.3 試劑配制14-15
• 2.1.4 主要儀器設(shè)備15-16
• 2.2 方法16-21
• 2.2.1 種特異性引物的設(shè)計16
• 2.2.2 菌株分離培養(yǎng)、活化16
• 2.2.3 實驗菌株 DNA 的提取16-17
• 2.2.4 COI 基因種特異性引物 PCR 反應(yīng)條件優(yōu)化17-18
• 2.2.5 COI 基因種特異性引物 PCR 反應(yīng)擴增18
• 2.2.6 瓊脂糖凝膠電泳18-19
• 2.2.7 實時熒光 PCR 反應(yīng)體系及反應(yīng)條件19
• 2.2.8 實時熒光 PCR 反應(yīng)標(biāo)準曲線的繪制及確定檢測的靈敏度19-20
• 2.2.9 實時熒光 PCR 特異性驗證20-21
• 第三章 結(jié)果21-30
• 3.1 菌種鑒定21-22
• 3.2 COI 基因種特異性引物 PCR 反應(yīng)條件優(yōu)化22-24
• 3.3 COI 基因種特異性引物的 PCR 擴增24
• 3.4 實時熒光 PCR 反應(yīng)標(biāo)準曲線的繪制及確定檢測的靈敏度24-26
• 3.5 實時熒光 PCR 檢測的的特異性26-30
• 第四章 討論30-36
• 第五章 結(jié)論36-37
• 參考文獻37-40
• 綜述40-61
• 參考文獻53-61
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果61-62
• 致謝62

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 王文華;李樹明;任玉新;李春龍;;氟康唑治療真菌性角膜炎的臨床探討[J];國際眼科雜志;2006年01期

2 張明營;;球結(jié)膜遮蓋術(shù)治療重癥真菌性潰瘍[J];國際眼科雜志;2008年07期

3 劉克菊;王峰;;深層板層角膜切除治療真菌性角膜炎的效果[J];眼外傷職業(yè)眼病雜志.附眼科手術(shù);2006年06期

4 王榮光,鄒留河,董東生;干燥保存角膜片在真菌性角膜潰瘍手術(shù)治療中的作用[J];中華眼科雜志;2000年01期

5 陳劍,丁琦,徐錦堂,吳靜;新鮮羊膜移植術(shù)治療早期堿燒傷對角膜新生血管和上皮愈合的影響[J];中國實用眼科雜志;2002年03期

6 羅小玲,徐錦堂,黃菊天,朱格非,葛鈞;新鮮多層羊膜移植治療深層角膜潰瘍的臨床探討[J];中國實用眼科雜志;2003年02期

7 Hua Gong;Xiangming Gong;;Combined Application of 5% Natamycin and 0.2% Fluconazole for the Treatment of Fungal Keratitis[J];Eye Science;2013年02期

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本文編號：325263