本文關(guān)鍵詞：實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)真菌性角膜炎常見(jiàn)致病菌種方法的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)真菌性角膜炎常見(jiàn)致病菌種方法的建立 目的：真菌性角膜炎是一種由致病真菌引發(fā)的致盲率很高的眼科常見(jiàn)的角膜感染性疾病，在我國(guó)，鐮刀菌是真菌性角膜炎最常見(jiàn)致病菌，其中又以茄病鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、串珠鐮刀菌為著，本研究旨在建立真菌性角膜炎常見(jiàn)致病菌中茄病鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、串珠鐮刀菌的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法。 方法：通過(guò)檢索GenBank真菌的COI基因序列，首次設(shè)計(jì)茄病鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、串珠鐮刀菌的種特異性引物，對(duì)模板DNA進(jìn)行倍比稀釋?zhuān)_定反應(yīng)的靈敏度；使用青霉、煙曲霉、白色念珠菌等真菌進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR，觀察設(shè)計(jì)引物的特異性。優(yōu)化實(shí)驗(yàn)反應(yīng)條件，建立了SYBR Green Ⅰ實(shí)時(shí)熒光PCR對(duì)鐮刀菌快速檢測(cè)的方法。 結(jié)果：所設(shè)計(jì)引物特異性強(qiáng)、敏感性高，可對(duì)茄病鐮刀菌、尖孢鐮刀菌及串珠鐮刀菌的靶DNA進(jìn)行定量分析，該檢測(cè)方法的靈敏度達(dá)1pg級(jí)。引物特異性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，只有與引物對(duì)應(yīng)的目的菌種DNA發(fā)生擴(kuò)增，，產(chǎn)生特異的單峰熔解曲線(xiàn)，其它種屬真菌均未發(fā)生擴(kuò)增，表明設(shè)計(jì)的引物具有良好的種特異性 結(jié)論：研究中建立的實(shí)時(shí)熒光PCR方法能特異、靈敏的檢測(cè)出臨床真菌性角膜炎中三種最常見(jiàn)鐮刀菌的感染，為臨床鐮刀菌感染的診斷提供了一種快速、準(zhǔn)確的方法。
【關(guān)鍵詞】：實(shí)時(shí)熒光PCR 真菌性角膜炎 鐮刀菌 COI基因
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R772.21
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 第一章 前言9-13
• 第二章 材料與方法13-21
• 2.1 材料13-16
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株13
• 2.1.2 主要試劑13-14
• 2.1.3 試劑配制14-15
• 2.1.4 主要儀器設(shè)備15-16
• 2.2 方法16-21
• 2.2.1 種特異性引物的設(shè)計(jì)16
• 2.2.2 菌株分離培養(yǎng)、活化16
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)菌株 DNA 的提取16-17
• 2.2.4 COI 基因種特異性引物 PCR 反應(yīng)條件優(yōu)化17-18
• 2.2.5 COI 基因種特異性引物 PCR 反應(yīng)擴(kuò)增18
• 2.2.6 瓊脂糖凝膠電泳18-19
• 2.2.7 實(shí)時(shí)熒光 PCR 反應(yīng)體系及反應(yīng)條件19
• 2.2.8 實(shí)時(shí)熒光 PCR 反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制及確定檢測(cè)的靈敏度19-20
• 2.2.9 實(shí)時(shí)熒光 PCR 特異性驗(yàn)證20-21
• 第三章 結(jié)果21-30
• 3.1 菌種鑒定21-22
• 3.2 COI 基因種特異性引物 PCR 反應(yīng)條件優(yōu)化22-24
• 3.3 COI 基因種特異性引物的 PCR 擴(kuò)增24
• 3.4 實(shí)時(shí)熒光 PCR 反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制及確定檢測(cè)的靈敏度24-26
• 3.5 實(shí)時(shí)熒光 PCR 檢測(cè)的的特異性26-30
• 第四章 討論30-36
• 第五章 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-40
• 綜述40-61
• 參考文獻(xiàn)53-61
• 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果61-62
• 致謝62

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

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  本文關(guān)鍵詞：實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)真菌性角膜炎常見(jiàn)致病菌種方法的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：325263