目的:視網(wǎng)膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）細胞發(fā)生退行性病變是年齡性相關(guān)性黃斑變性（age related macular degeneration,AMD）的關(guān)鍵病理改變。課題組前期研究提示RPE細胞損傷后,其免疫調(diào)節(jié)功能受損導(dǎo)致的眼底炎性微環(huán)境可能是促進AMD進展的重要機制。新近研究發(fā)現(xiàn),AMD標(biāo)志性病理沉積物玻璃膜疣（drusen）的重要成分之一淀粉樣蛋白β（amyloidβ,Aβ）可能通過介導(dǎo)RPE分泌炎癥因子引起炎性微環(huán)境。本研究建立Aβ介導(dǎo)的RPE損傷模型,探究Aβ沉積引起炎性微環(huán)境的可能機制及靶點。方法:以C57BL/6小鼠為研究對象,采用玻璃體腔注射Aβ_1-40建立Aβ相關(guān)RPE損傷動物模型,以玻璃體腔注射PBS作為對照組,運用電生理及蘇木精—伊紅（hematoxylin-eosin,HE）染色法分別在功能學(xué)及形態(tài)學(xué)方面評估RPE細胞損傷,采用qPCR檢測IL-1β、IL-18、IL-12b、IL-8、IL-6及REL家族的轉(zhuǎn)錄水平。同時分別在ARPE-19細胞及WT小鼠原代RPE細胞中加入Aβ_1... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖2.5年內(nèi)從早期AMD變?yōu)檫M展期AMD/nvAMD患者的OCT同平面圖像變化過程

1.2 結(jié)果1.2.1 玻璃體腔注射 Aβ1-40可以穿透視網(wǎng)膜到達 RPE 層為了探究玻璃體腔注射 Aβ1-40是否能穿透視網(wǎng)膜，本研究給小鼠玻璃體腔注射 5μl 濃度為 700μM 寡聚態(tài) Aβ1-40（共 14μg）每眼建模，在建模后的 2 天、4 天分別取小鼠眼球行冰凍切片及免疫熒光，檢測 Aβ1-40的分布，發(fā)現(xiàn)與 PBS 注射組相比，Aβ1-40注射組的熒光信號明顯增強（紅色），視網(wǎng)膜各層均有分布，且無論是注射后 2 天還是 4 天 RPE 層上方都可以觀察到明顯 Aβ 沉積，同時在 Aβ 沉積處可以觀察到外核層（outernuclearlayer,ONL）形態(tài)異常（圖 3A）。進 步本研究探討這種損傷是否是由于玻璃體腔注射引起的，于是在建模 4 天后行石蠟切片及 HE 染色，在光鏡下發(fā)現(xiàn) Aβ1-40注射組視網(wǎng)膜形態(tài)異常，結(jié)構(gòu)紊亂，PBS 組視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)正常，未及明顯損傷，并且模型組形態(tài)異常處與玻璃體腔注射點沒有直接關(guān)系（圖 3B）。

1.2.2 沉積于 RPE 層的 Aβ1-40可以引起視網(wǎng)膜形態(tài)及功能異常為了探究 Aβ1-40沉積于 RPE 細胞后是否會對 RPE 細胞形態(tài)功能產(chǎn)生影響，本研究取PBS組及造模組的小鼠眼球行透射電鏡檢測，結(jié)果顯示Aβ1-40組的RPE細胞形態(tài)異常呈梭形，伴有 bruch’s 膜（bruch’s membrane，BrM）和 RPE 基底部皺褶增厚（圖 4A）；我們通過 ERG 對視網(wǎng)膜進行功能學(xué)檢測，在暗適應(yīng)條件下，以光強為 3.0 cd·s/m2作為刺激條件，以基線到 a 波波谷的距離為 a 波的波幅，a 波波谷至 b 波波峰的距離作為 b 波的波幅，ERG 結(jié)果顯示 PBS 組小鼠 a波、b 波波幅平均值分別為 72.43±6.59μV、146.30±6.54μV，Aβ1-40組的小鼠 a 波、b 波波幅平均值分別為：51.10±0.30μV、83.07±10.92μV，與 PBS 組相比，Aβ1-40組的電生理波幅發(fā)生明顯下降（n=4,a 波：P<0.05，b 波：P<0.01）（圖 4B），提示 Aβ1-40沉積可以引起視網(wǎng)膜形態(tài)異常及功能損傷。


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