目的探討變異性漿細(xì)胞瘤異位1（plasmacyto-mavarianttranslocation1,PVT1）抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制。方法構(gòu)建特異性的shRNA PVT1慢病毒載體,包裝慢病毒（LV/shRNA PVT1）并轉(zhuǎn)導(dǎo)鼻咽癌C666-1細(xì)胞,檢測Smad4的表達(dá);LV/shRNA PVT1轉(zhuǎn)導(dǎo)C666-1細(xì)胞24 h后轉(zhuǎn)染Smad4 siRNA,通過細(xì)胞計數(shù)、四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）法及流式細(xì)胞術(shù)分析沉默Smad4對LV/shRNA PVT1介導(dǎo)的鼻咽癌細(xì)胞生長及細(xì)胞周期的影響,并檢測細(xì)胞周期相關(guān)調(diào)控因子的表達(dá)。結(jié)果下調(diào)PVT1后鼻咽癌細(xì)胞中Smad4的表達(dá)升高,而用siRNA沉默Smad4表達(dá)后,結(jié)果顯示,抑制Smad4表達(dá)可阻斷LV/shRNA PVT1介導(dǎo)的細(xì)胞生長抑制效應(yīng),同時細(xì)胞周期結(jié)果顯示,與對照組相比,shRNA PVT1/Smad4 siRNA組細(xì)胞G1期比例降低,S期和G2期比例升高,并且CDK4、CDK6及c-myc的mRNA水平升高。結(jié)論下調(diào)PVT1可抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖,并升高Smad4的表達(dá),沉默Smad4可阻斷shRNA PVT1對鼻咽癌細(xì)胞增... 

【文章來源】：中國耳鼻咽喉顱底外科雜志. 2020,26(05)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 細(xì)胞株和主要試劑
        1.1.2 siRNA的設(shè)計
    1.2 方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.2 病毒包裝及濃縮
        1.2.3 熒光定量RT-PCR檢測Smad4的表達(dá)
        1.2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及RT-PCR檢測
        1.2.5 細(xì)胞生長曲線測定
        1.2.6 MTT比色實(shí)驗(yàn)
        1.2.7 細(xì)胞周期檢測
        1.2.8 細(xì)胞周期相關(guān)調(diào)控因子檢測
        1.2.9 統(tǒng)計學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 慢病毒感染后PVT1及Smad4的表達(dá)
    2.2 轉(zhuǎn)染Smad4 siRNA后Smad4的表達(dá)
    2.3 沉默Smad4對LV/shRNA PVT1介導(dǎo)的鼻咽癌細(xì)胞生長的影響
    2.4 沉默Smad4對LV/shRNA PVT1介導(dǎo)的細(xì)胞細(xì)胞周期分布的影響
    2.5 沉默Smad4對LV/shRNA PVT1介導(dǎo)的細(xì)胞周期調(diào)控因子表達(dá)的影響
3 討論



本文編號：3192709