發(fā)布時間：2021-05-11 01:03

　　目的在機體生長過程中細胞周期調(diào)控起著關(guān)鍵性的作用,而其進程的失衡也會導致腫瘤的發(fā)生與發(fā)展,cyclin D-CDK4/6-INK4-Rb為細胞周期調(diào)控過程中重要通路,其在頭頸部鱗癌中改變非常常見,但細胞周期蛋白依賴激酶4（Cyclin-dependent kinase 4,CDK4）作為該通路中關(guān)鍵性因子之一在頭頸部鱗癌細胞中具體生物學行為機制仍不明確,需進一步研究,本實驗通過構(gòu)建帶Flag標簽的pcDNA3.0載體CDK4基因真核表達載體并初步驗證該基因?qū)戆┘毎℉ep-2）的生物學行為影響,為今后進一步研究喉癌細胞發(fā)生發(fā)展機理奠定前期基礎(chǔ)。方法以人乳腺文庫為模板通過聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)擴增出CDK4的CDS區(qū)序列,采用雙酶切技術(shù)將擴增出的CDK4序列插入到帶Flag標簽的pcDNA3.0載體中,將產(chǎn)物進行DH5α感受態(tài)細胞轉(zhuǎn)化,獲得陽性克隆菌液并提取質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細胞,進行基因蛋白表達和基因測序鑒定,待鑒定結(jié)果正確,將pcDNA3.0-Flag-CDK4與pcDNA3.0-Flag真核表達載體進行喉癌細胞（Hep-2）轉(zhuǎn)染,經(jīng)實時熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)檢測C... 

【文章來源】：錦州醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：43 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語表
前言
實驗材料與方法
實驗結(jié)果
討論
結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
附錄
    一 文獻綜述
        參考文獻
    二 在學期間科研成績
    三 致謝
    四 個人簡介



本文編號：3180410