發(fā)布時間：2021-04-13 13:06

　　目的嚴(yán)重?zé)齻芍卵郾斫Y(jié)膜組織大量壞死,并導(dǎo)致角膜基質(zhì)持續(xù)性炎癥反應(yīng)及潰瘍形成。本研究探討結(jié)膜成纖維細(xì)胞壞死上清產(chǎn)生的警報素（alarmins）對人角膜基質(zhì)成纖維細(xì)胞（HCFs）釋放促炎因子及粘附分子的影響。方法通過凍融方法制備結(jié)膜成纖維細(xì)胞壞死上清（NHCS）,用NHCS、IKK2抑制劑、IL-1及TNF-α受體拮抗劑對HCFs進(jìn)行處理。ELISA檢測IL-6、IL-8及MCP-1的表達(dá),Western blot分析ICAM-1表達(dá)及IκB-α磷酸化,免疫熒光染色檢測NF-κB p65亞基定位。結(jié)果 NHCS可刺激HCFs表達(dá)IL-6、IL-8、MCP-1和ICAM-1,激活I(lǐng)κB-α磷酸化,并介導(dǎo)NF-κB p65亞基的核內(nèi)轉(zhuǎn)移。此外,IKK2抑制劑、IL-1及TNF-α受體拮抗劑可抑制NHCS誘導(dǎo)的上述炎性介質(zhì)的表達(dá)。結(jié)論由結(jié)膜成纖維細(xì)胞壞死上清產(chǎn)生的警報素包括IL-1和TNF-α,可通過激活NF-κB信號通路促進(jìn)角膜基質(zhì)成纖維細(xì)胞表達(dá)促炎因子和粘附分子。IL-1和TNF-α可能成為改善嚴(yán)重眼燒傷角膜基質(zhì)炎癥反應(yīng)的潛在治療靶點。 

【文章來源】：中國實驗診斷學(xué). 2020,24(06)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

NHCS對HCFs釋放炎性因子、趨化因子及粘附分子的影響

NF-κB信號通路在眼部炎癥中起著重要作用。為了研究NHCS對HCFs中NF-κB信號可能的影響，我們用3×105cell/mL NHCS對HCFs進(jìn)行了不同時間的處理。免疫印跡分析表明，NHCS以一種時間依賴的方式激活參與NF-κB信號通路途徑的IκB-α（圖2A）。免疫熒光染色顯示，NF-κB p65亞基（綠色熒光）在NHCS處理30min后進(jìn)入細(xì)胞核。（圖2B）注：標(biāo)尺為20μM。以上結(jié)果表明，NHCS可通過誘導(dǎo)IκB-α磷酸化和介導(dǎo)NF-κB p65亞基入核參與NF-κB信號通路。2.3 IKK-2抑制劑對NHCS誘導(dǎo)HCFs產(chǎn)生炎性介質(zhì)的影響

為了確定NF-kB信號通路在HCFs產(chǎn)生炎性介質(zhì)過程中的作用，用不同濃度的NF-kB信號通路抑制劑IKK-2抑制劑（0、0.3、1、3、10μM）孵育2h，然后用3×105cell/mL NHCS+IKK2抑制劑孵育24h。ELISA檢測顯示，添加IKK-2抑制劑的組能明顯抑制NHCS所誘導(dǎo)的IL-6（圖3A）、IL-8（圖3B）和MCP-1（圖3C）的表達(dá)，且呈濃度依賴性減少。同時，免疫印跡分析表明，用IKK-2抑制劑能夠顯著抑制NHCS誘導(dǎo)的粘附分子ICAM-1的表達(dá)（圖3D）。以上表明，IKK-2抑制劑可抑制NHCS所誘導(dǎo)的HCFs炎癥反應(yīng)。2.4 IL-1受體拮抗劑（IL-1RA）和TNF-α受體拮

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Role of corneal collagen fibrils in corneal disorders and related pathological conditions[J]. Hong-Yan Zhou,Yan Cao,Jie Wu,Wen-Song Zhang.  International Journal of Ophthalmology. 2017(05)



本文編號：3135352