敲除長鏈非編碼RNA MALAT-1基因?qū)θ撕眵[狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞的抑制作用
發(fā)布時(shí)間：2021-03-25 04:33
目的:喉癌,作為頭頸部腫瘤的一種,在所有呼吸系統(tǒng)腫瘤中居第二位。大約2%3%的呼吸系統(tǒng)惡性腫瘤為喉癌。目前喉癌的治療方法包括手術(shù)治療、放療和化療。手術(shù)是喉癌治療最多使用的方法。手術(shù)治療的原則是在完全切除腫瘤的前提下盡可能保留喉的發(fā)聲功能,目的是提高喉癌患者的術(shù)后生活質(zhì)量。然而,一項(xiàng)流行病學(xué)調(diào)查顯示,在過去的20年間,喉癌的臨床治療效果尚不盡如人意。因此,從分子水平開展喉癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制的研究將有助于提高喉癌的診治水平。本研究從分子水平探討敲除長鏈非編碼RNA MALAT-1基因?qū)θ撕眵[狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞的抑制作用。方法:使用實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）以永生化鼻咽上皮（NPE）細(xì)胞株NP-69作為參照檢測(cè)FaDu、Hep-2和鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞MALAT1的表達(dá),使用shmalat1慢病毒轉(zhuǎn)染Hep-2細(xì)胞,RT-PCR檢測(cè)其MALAT1的表達(dá)。增殖速率分析,MTT法明確MALAT-1對(duì)細(xì)胞增殖的影響。流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡。采用Transwell小室檢測(cè)Hep-2細(xì)胞的遷移。最后使用Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)評(píng)估shmalat1和shCtrl...
【文章來源】：蚌埠醫(yī)學(xué)院安徽省
【文章頁數(shù)】：51 頁
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
敲除人喉鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞和Hep-2細(xì)胞MALAT1基因的結(jié)果
我們通過流式細(xì)胞儀評(píng)估細(xì)胞周期各時(shí)相的 Hep-2 細(xì)胞（圖2A）。與 MOCK and shCtrl 細(xì)胞相比， MALAT1-shRNA 慢病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞 S 期細(xì)胞數(shù)量顯著增加（P＜0.01，圖 2B）。此外，細(xì)胞在 G2／M 期的百分比下降（P＜0.01)�？傊�，這些數(shù)據(jù)表明，由于失去 MALAT1，細(xì)胞阻滯在 S 期。圖 2 敲除 MALAT1 導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯Figure 2. MALAT1 knockdown leads to cell cycle arrest. (A) Cell cycle phases ofHep-2 cells were analyzed by flow cytometry. (B) Compared to MOCK and shCtrlcells, MALAT1 knockdown cells showed a significant increase in the proportion ofcells in the S phase (P< 0.01). In addition, in MALAT1 cells, a significant decreasewas observed in the proportion of cells in the G2/M phase (P < 0.01) compared to theMOCK and shCtrl cells.3.3 敲除 MALAT1 對(duì) Hep-2 細(xì)胞克隆形成的抑制作用經(jīng)過克隆形成實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果，敲除 MALAT1 抑制 Hep-2 細(xì)胞克隆的能力。敲除 MALAT1 的 Hep-2 細(xì)胞克隆能力明顯受損，下降約 7.5%。shCtrl 慢病毒處理過的細(xì)胞中觀察到了平均 124 個(gè)
圖 3 敲除 MALAT1 不影響人喉鱗狀細(xì)胞癌 HFigure 3. Knockdown of MALAT1 does notmalignant LSCC Hep-2 cells. A) Representativecells in a 6-well plate. B) Colony formationlentivirus (MOCK), shCtrl and shMALAT1. ThSD of three separate experiments ( P < 0.05; P <3.4 流式細(xì)胞儀進(jìn)行凋亡定量分析MALAT1 的低表達(dá)誘使 Hep-2 細(xì)胞凋亡，亡程度由 Annexin v-apc 染色和流式細(xì)胞儀檢用流式細(xì)胞儀進(jìn)行凋亡定量分析表明，與未轉(zhuǎn)比(5.74% ± 0.22%)，敲除 MALAT1 的 Hep-2 細(xì)0.15%) (P < 0.01)。
本文編號(hào)：3099032
【文章來源】：蚌埠醫(yī)學(xué)院安徽省
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【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
敲除人喉鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞和Hep-2細(xì)胞MALAT1基因的結(jié)果
我們通過流式細(xì)胞儀評(píng)估細(xì)胞周期各時(shí)相的 Hep-2 細(xì)胞（圖2A）。與 MOCK and shCtrl 細(xì)胞相比， MALAT1-shRNA 慢病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞 S 期細(xì)胞數(shù)量顯著增加（P＜0.01，圖 2B）。此外，細(xì)胞在 G2／M 期的百分比下降（P＜0.01)�？傊�，這些數(shù)據(jù)表明，由于失去 MALAT1，細(xì)胞阻滯在 S 期。圖 2 敲除 MALAT1 導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯Figure 2. MALAT1 knockdown leads to cell cycle arrest. (A) Cell cycle phases ofHep-2 cells were analyzed by flow cytometry. (B) Compared to MOCK and shCtrlcells, MALAT1 knockdown cells showed a significant increase in the proportion ofcells in the S phase (P< 0.01). In addition, in MALAT1 cells, a significant decreasewas observed in the proportion of cells in the G2/M phase (P < 0.01) compared to theMOCK and shCtrl cells.3.3 敲除 MALAT1 對(duì) Hep-2 細(xì)胞克隆形成的抑制作用經(jīng)過克隆形成實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果，敲除 MALAT1 抑制 Hep-2 細(xì)胞克隆的能力。敲除 MALAT1 的 Hep-2 細(xì)胞克隆能力明顯受損，下降約 7.5%。shCtrl 慢病毒處理過的細(xì)胞中觀察到了平均 124 個(gè)
圖 3 敲除 MALAT1 不影響人喉鱗狀細(xì)胞癌 HFigure 3. Knockdown of MALAT1 does notmalignant LSCC Hep-2 cells. A) Representativecells in a 6-well plate. B) Colony formationlentivirus (MOCK), shCtrl and shMALAT1. ThSD of three separate experiments ( P < 0.05; P <3.4 流式細(xì)胞儀進(jìn)行凋亡定量分析MALAT1 的低表達(dá)誘使 Hep-2 細(xì)胞凋亡，亡程度由 Annexin v-apc 染色和流式細(xì)胞儀檢用流式細(xì)胞儀進(jìn)行凋亡定量分析表明，與未轉(zhuǎn)比(5.74% ± 0.22%)，敲除 MALAT1 的 Hep-2 細(xì)0.15%) (P < 0.01)。
本文編號(hào)：3099032
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