目的:研究肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae,S.pn）莢膜多糖（capsular polysaccharide,CPS）對C57BL/6小鼠急性中耳炎的炎癥應(yīng)答和組織損傷的作用。方法:首先通過同源重組的方式構(gòu)建TIGR4Δcps菌株,然后經(jīng)鼓膜穿刺,分別接種5μl/耳的TIGR4和TIGR4Δcps于C57BL/6小鼠的雙側(cè)中耳腔,對照組采用相同方法接種等體積無菌磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline,PBS）。觀察小鼠發(fā)病情況,分別于感染后1、3、5 d制備中耳組織切片,HE染色觀察中耳組織損傷及炎性細(xì)胞浸潤變化,同時收集中耳灌洗液（middle ear lavage fluids,MELF）,檢測MELF中細(xì)菌載量、炎性細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞因子含量。結(jié)果:成功構(gòu)建了TIGR4Δcps菌株。與TIGR4組相比,TIGR4Δcps組小鼠中耳上皮的損傷更輕,中性粒細(xì)胞募集減少（第1天時P=0.004;第3天時P=0.000;第5天時P=0.000）,MELF中細(xì)胞因子TNF-α和IL-6水平更低（第1天時P=0.076、P=0.000;第3... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2015年09期 第1175-1180頁 北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

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小鼠接種PBS，TIGR4或TIGR4Δcps后體質(zhì)量變化結(jié)果

2±0.9817.01±1.0317.06±1.3916.19±0.9914.96±1.0215.33±1.0516.64±0.7414.40±1.6015.34±1.2316.56±0.3914.79±1.8815.92±1.4840.2043.6296.24516.71±0.6214.76±1.6815.95±1.490.0000.0400.00016.93±0.6815.77±1.5516.65±1.3017.25±0.6416.01±1.3516.60±1.3517.40±0.4315.97±1.2516.73±1.34圖2小鼠接種PBS，TIGR4或TIGR4Δcps后體質(zhì)量變化結(jié)果（n=10）Fig.2ChangesinweightofmiceinoculatedwithPBS，TIGR4orTIGR4Δcps（n=10）圖3中耳組織切片HE染色（400×）Fig.3HEstainingofsectionsofmiddleeartissue（400×）表3小鼠接種S.pn后MELF中的CFU（x±s）Tab.3CFUofMELFfromMiceinoculatedwithS.pn（x±s）分組例數(shù)（n）TIGR4組TIGR4Δcps組t值P值551200.00±564.98360.00±424.032.6590.029484.00±258.2248.00±46.043.7170.006第1天第3天圖4中耳腔的炎癥細(xì)胞募集（HE染色40×）Fig.4Recruitmentsofinflammatorycellsinmiddleearcavity（HEstaining40×）201816141201234567天數(shù)（d）小鼠體質(zhì)量（g）PBSTIGR4TIGR4Δcps第1天第3天第5天PBSTIGR4TIGR4Δcps第1天第3天第5天PBSTIGR4TIGR4Δcps—1178—

4Δcps組增厚明顯，黏膜下炎癥細(xì)胞的募集明顯多于缺陷組，骨質(zhì)破壞也更嚴(yán)重，表明CPS加重了中耳組織損傷。2.4TIGR4和TIGR4Δcps中耳炎的細(xì)菌清除比較對MELF進(jìn)行細(xì)菌鋪板計數(shù)CFU，PBS組小鼠在整個病程中均未檢測到細(xì)菌，實(shí)驗組結(jié)果如表3所示，TIGR4與TIGR4Δcps均于接種后第5天被完全清除，但在第1天和第3天，TIGR4組的細(xì)菌載量明顯高于TIGR4Δcps組，表明TIGR4Δcps更易被宿主清除。2.5TIGR4和TIGR4Δcps中耳炎的炎癥細(xì)胞募集比較小鼠接種PBS、TIGR4、TIGR4Δcps后第1、3、5天的組織切片進(jìn)行HE染色，如圖4所示，PBS組中耳腔內(nèi)中性粒細(xì)胞的募集均較少，TIGR4組募集的炎癥細(xì)胞數(shù)量明顯多于TIGR4Δcps組。同時，對MELF細(xì)胞計數(shù)，如表4結(jié)果顯示，灌洗液中的炎癥細(xì)胞在接種后第3天達(dá)峰值，TIGR4組募集的炎癥細(xì)胞數(shù)量明顯多于TIGR4Δcps組。流式細(xì)胞術(shù)分類計數(shù)結(jié)果顯示＞95%炎癥細(xì)胞為中性粒細(xì)胞（圖略）。2.6TIGR4和TIGR4Δcps中耳炎的TNF-α和IL-6表達(dá)差異比較炎癥細(xì)胞因子檢測結(jié)果見表5、表6。TIGR4組和TIGR4Δcps組的MELF中TNF-α的表達(dá)在第3天達(dá)高峰，IL-6的表達(dá)在第1天達(dá)高峰，但TIGR4組MELF中的TNF-α水平和IL-6水平均明顯高于TIGR4Δcps組。表2小鼠接種PBS，TIGR4或TIGR4Δcps后體質(zhì)量變化結(jié)果（x±s，g，n=10）Tab.2ChangesinweightofmiceinoculatedwithPBS，TIGR4orTIGR4Δcps（x±s，g，n=10）分組第0天第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天PBS組TIGR4組TIGR4Δcps組F時間，P時間F處理，P處理F交互，P交互16.72±0.9817.01±1.0317.06±1.3916.19±0.9914.96±1.0215.33±1.0516.64±0.7414.40±1.6015.34±1.2316.56±0.39

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]小鼠急性中耳炎模型的建立[J]. 周愛娥,王維,項云,黃益飛,董姍姍,何於娟.  激光雜志. 2013(04)
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碩士論文
[1]轉(zhuǎn)化缺失的無莢膜肺炎鏈球菌作為活疫苗候選菌株的安全性及保護(hù)效果評價研究[D]. 王一平.重慶醫(yī)科大學(xué) 2013



本文編號：2896555