背景:遺傳性眼病是由于遺傳物質(zhì)改變所導(dǎo)致的眼部疾病,對(duì)眼的結(jié)構(gòu)和功能危害嚴(yán)重,且部分眼病不易在早期發(fā)現(xiàn),是當(dāng)前影響視覺(jué)系統(tǒng)的重要疾病。該類(lèi)疾病具有眾多特點(diǎn)包括:病種多,發(fā)病率高,治療困難,預(yù)后較差,致盲性高以及具有高度臨床與表型異質(zhì)性。全外顯子組測(cè)序(Whole-Exome Sequencing,WES)是指利用序列捕獲技術(shù)將全基因組外顯子區(qū)域DNA捕捉并富集后進(jìn)行高通量測(cè)序的基因組分析方法。相比于傳統(tǒng)的Sanger測(cè)序,該測(cè)序方法具有眾多優(yōu)點(diǎn)包括:高效便捷,對(duì)樣品要求低、靈敏度高,獲得的信息量豐富,可以檢測(cè)到新的致病基因。目的:鑒定 Stargardt 病(Stargardt disease,STGD)、視錐-視桿營(yíng)養(yǎng)不良(Cone-rod dystrophy,CORD)與 Nance-Horan 綜合征(Nance-Horan syndrome,NHS)共三種遺傳性眼病家系的致病基因突變,以期發(fā)現(xiàn)新的致病突變。同時(shí)為患病家系提供有效的遺傳咨詢(xún),進(jìn)一步豐富相關(guān)疾病的遺傳學(xué)研究。方法:首先根據(jù)家系的初步診斷,查詢(xún)并獲得文獻(xiàn)中已報(bào)道的相關(guān)疾病的致病基因。收集該家系成員的臨床檢查結(jié)果和血液樣品,對(duì)該家系的先證者進(jìn)行全外顯子組測(cè)序。在測(cè)序結(jié)果中篩選相關(guān)致病基因的非同義突變作為最初的候選致病突變。然后通過(guò)一系列的生物信息學(xué)分析、Sanger測(cè)序驗(yàn)證以及共分離分析對(duì)這些候選突變進(jìn)行層層篩選并得到該家系的致病基因突變。最后利用ACMG遺傳變異分類(lèi)與指南對(duì)家系的致病突變進(jìn)行分類(lèi)。如果在已知致病基因中未篩選得到患病家系的致病突變,則需要擴(kuò)大候選基因范圍或?qū)π碌幕蜻M(jìn)行研究。結(jié)果:在STGD家系中篩選得到ABCA4基因中的復(fù)合雜合突變NM_000350.2:c.5646GA:p.M1882I,c.3523-2AG;在CORD家系中篩選得到CRX基因中的移碼突變NM_000554.4:c.538dupG:p.Val180fs;在NHS家系中篩選得到NHS基因中的移碼突變NM_001291867.1:c.302dupA:p.Ala102fs。共分離分析結(jié)果表明這三個(gè)突變均與家系中的疾病表型共分離,為家系中的致病突變。其中ABCA4中的剪接位點(diǎn)突變以及CRX和NHS中的移碼突變均為第一次報(bào)道。結(jié)論:通過(guò)WES,在三個(gè)遺傳性眼病家系中篩選出三個(gè)新的致病突變。新的致病突變的發(fā)現(xiàn)拓寬了相應(yīng)疾病的致病突變譜,有助于為家系成員提供有效的遺傳咨詢(xún)。研究表明WES是一種進(jìn)行遺傳病家系遺傳診斷的有效工具。對(duì)于一些臨床癥狀不典型的眼病患者,疾病的確診需要臨床表現(xiàn)與遺傳診斷的結(jié)合。
【圖文】：

２．２．１研宄對(duì)象逡逑我們?cè)趶V西柳州市婦幼保健院收集到一個(gè)初步診斷為ＳＴＧＤ的患病家系，，家系逡逑圖見(jiàn)圖１。共有８名成員（包括３名患者和５名正常成員）參與到這次研究中，詳逡逑細(xì)記錄了所有研宄對(duì)象的基本信息

圖２全外顯子組測(cè)序的簡(jiǎn)要流程圖逡逑（來(lái)源：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ａｇｉｌｅｎｔ．ｃｏｍ／）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２邋Ｔｈｅ邋ｂｒｉｅｆ邋ｆｌｏｗｃｈａｒｔ邋ｏｆ邋ｗｈｏｌｅ－ｅｘｏｍｅ邋ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ逡逑（ｓｏｕｒｃｅ：邋ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ａｇｉｌｅｎｔ．ｃｏｍ／）逡逑庫(kù)構(gòu)建：逡逑用Ｃｏｖａｒｉｓ破碎儀將符合要求的基因組ＤＮＡ隨機(jī)打斷成平均約１５０－２００使用Ａｇｅｎｃｏｕｒｔ邋ＡＭＰｕｒｅ邋ＸＰ邋ｂｅａｄｓ對(duì)打斷后的ＤＮＡ片段進(jìn)行純化；１００邋Ｂｉｏａｎａｎｌｙｚｅｒ檢測(cè)純化后核苷酸長(zhǎng)度；逡逑用Ｉｌｌｕｍｉｎａ邋Ｐａｉｒｅｄ－Ｅｎｄ邋Ｓａｍｐｌｅ邋Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ試劑盒對(duì)上述ＤＮＡ片段進(jìn)行用Ａｇｅｎｃｏｕｒｔ邋ＡＭＰｕｒｅ邋ＸＰ邋ｂｅａｄｓ對(duì)末端修復(fù)后的樣品進(jìn)行純化；逡逑用邋Ｉｌｌｕｍｉｎａ邋Ｐａｉｒｅｄ－Ｅｎｄ邋Ｓａｍｐｌｅ邋Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ邋試劑盒在己修復(fù)的邋ＤＮＡ邋片段嘌呤（Ａ）堿基；使用ＡｇｅｎｃｏｕｒｔＡＭＰｕｒｅＸＰｂｅａｄｓ對(duì)３＇末端加Ａ尾的；逡逑用邋Ｉｌｌｕｍｉｎａ邋Ｐａｉｒｅｄ－Ｅｎｄ邋Ｓａｍｐｌｅ邋Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ邋試劑盒在加邋Ａ邋尾后的邋ＤＮＡ邋片
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R77

【參考文獻(xiàn)】

 

相關(guān)期刊論文 前4條

 

 

1 顧蕾;韓冬梅;舒婉婷;馮亞蘭;吳星偉;;視錐-視桿營(yíng)養(yǎng)不良的發(fā)病分子機(jī)制研究現(xiàn)狀[J];臨床眼科雜志;2015年04期

2 賴(lài)征,周偉,張咸寧,李繼承;Stargardt病的分子遺傳學(xué)研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊(cè);2005年01期

3 方艷文;Stargardt病的病因及治療展望[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).眼科學(xué)分冊(cè);2003年05期

4 徐海峰,陳有信;Stargardt氏病及其研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).眼科學(xué)分冊(cè);1998年01期

 

本文編號(hào)：2709668