本文關鍵詞：Octreotide對視網(wǎng)膜缺血再灌注的保護效應及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

網(wǎng)友Alphago近日為您收集整理了關于Octreotide對視網(wǎng)膜缺血再灌注的保護效應及機制研究的文檔，希望對您的工作和學習有所幫助。以下是文檔介紹：單位代碼10475學號104753121023分類號R34碩士學位論文Octreotide對視網(wǎng)膜缺血再灌注的保護效應及機制研究學科、專業(yè):基礎醫(yī)學生物化學與分子生物學研究方向:視網(wǎng)膜缺血再灌注申請學位類別:理學碩士申請人:孫自強指導教師:李彥章教授王軍副教授二〇一五年四月A STUDY OF THE PROTECTIVE EFFECTS OF OCTREOTIDE AGAINST RETINAL ISCHEMIA REPERFUSION INJURY AND ITS MECHANISMS INVOVEDA Dissertation Submitted to the Graduate School of Henan Universityin Partial Fulfillment of the Requirementsfor the Degree ofMasterofEducation in ScienceByZiqiang SunSupervisor: Prof.Yanzhang LI A.P. Jun WangDateApril, 2015關于學位論文獨創(chuàng)聲明和學術誠信承諾本人向河南大學提出碩士學位申請。本人鄭重聲明:所呈交的學位論文是本人在導師的指導下獨立完成的,對所研究的課題有新的見解。據(jù)我所知,除文中特別加以說明、標注和致謝的地方外,論文中不包括其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包括其他人為獲得任何教育、科研機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同事對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。在此本人鄭重承諾:所呈交的學位論文不存在舞弊作偽行為,文責自負。學位申請人(學位論文作者)簽名:201 年月日關于學位論文著作權使用授權書本人經(jīng)河南大學審核批準授予碩士學位。作為學位論文的作者,本人完全了解并同意河南大學有關保留、使用學位論文的要求,即河南大學有權向國家圖書館、科研信息機構、數(shù)據(jù)收集機構和本校圖書館等提供學位論文(紙質(zhì)文本和電子文本)以供公眾檢索、查閱。本人授權河南大學出于宣揚、展覽學校學術發(fā)展和進行學術交流等目的,可以采取影印、縮印、掃描和拷貝等復制手段保存、匯編學位論文(紙質(zhì)文本和電子文本)。(涉及保密內(nèi)容的學位論文在解密后適用本授權書)學位獲得者(學位論文作者)簽名:201 年月日學位論文指導教師簽名:201 年月日I摘要背景缺血-再灌注損傷的定義是:“在缺血的基礎上恢復血流后組織損傷反而加重,甚至發(fā)生不可逆性損傷的現(xiàn)象稱為缺血-再灌注損傷(ischemia reperfusion injury,IRI)”視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷(retinal ischemia-reperfusion injury, RIRI)不僅是誘發(fā)某些眼科疾病的始發(fā)因素,也是導致視力嚴重下降甚至失明的終末通路,這些疾病主要有:青光眼(a)、缺血性視祌經(jīng)病變(ischemic opticoneuropathy)、脈絡膜血管阻塞、糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy)、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變(Retinopathy of prematurity,ROP)、視網(wǎng)膜中央動脈阻塞以及外傷性視網(wǎng)膜病變等眼科疾病。生長抑素(somatostatin,SST;somatotropin release inhibitory factor,SRIF)是一種下丘腦分泌的生理性14個氨基酸的多肽激素,能抑制垂體前葉生長激素釋放。通過與細胞膜上的生長抑素受體結合而發(fā)揮作用,目前已分離克隆的出生長抑素受體(somatostatin receptor,SSTR)有5 種不同的類型。SSTR的5種受體在視網(wǎng)膜中均可以檢測到,揭示了SST在視網(wǎng)膜中功能的復雜性。然而,SST的T1/2很短,只有3min(2min~4min),不便于治療和研究。奧曲肽(Octreotide sandostain,SMS 20l -995)一種SST八肽類似物名,T1/2長達90min-120min,便于注射,可以靜脈滴注,皮下注射甚至可以口服;其較SS抑制激素作用更強大、作用時間持久、分泌之活力更強,且無SS停用后的激素反跳現(xiàn)象。目前,研究表明,奧曲肽可以減少缺血導致的視網(wǎng)膜細胞凋亡數(shù),可以減少視網(wǎng)膜缺血再灌注引起的水腫(視網(wǎng)膜厚度增加)、白細胞浸潤和MDA含量。但是奧曲肽在視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷中發(fā)揮保護作用還缺乏系統(tǒng)全面的報道。目的:建立眼高壓誘導的小鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷模型;觀察奧曲肽對視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷的保護作用;探討奧曲肽在視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷中的保護機制。方法:1、小鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷模型建立及實驗分組模型建立:小鼠麻醉后,用30號無菌針頭水平放入眼前房內(nèi),針頭連接無菌生理II鹽水袋,升高鹽水袋高度使眼房內(nèi)壓力達到110mmHg。觀察鞏膜變白,以判斷缺血是否成功。維持60min后拔出針頭,眼球表面涂眼藥膏預防感染,待小鼠醒后放入籠中飼養(yǎng)。實驗分組:(1)缺血再灌注組(I/R),42只小鼠右眼。(2) 奧曲肽干預組(OCT+I/R),42只小鼠右眼。(3) 對照組(Control)小鼠左眼。給藥方法:分別于造模前15min,I/R造模后6h、12h、18h、24h經(jīng)腹腔注射給藥一次,總計注射劑量50μg/kg,在最后一次給藥3h到4h內(nèi)取出眼球或視網(wǎng)膜。如果需要3天或者7天標本是,在完成上述步驟之后皮下注射奧曲肽50μg/kg,相同時間點每天一次。I/R組以無菌生理鹽水代替OCT。2、組織學形態(tài)觀察小鼠眼球固定后石蠟切片,HE染色觀察視網(wǎng)膜損傷組織學變化;采用免疫熒光染色觀察神經(jīng)節(jié)細胞缺失程度和視網(wǎng)膜厚度變化;TUNNEL 染色觀察視網(wǎng)膜凋亡情況;免疫組化染色觀察視網(wǎng)膜ICAM-1蛋白表達情況;制備視網(wǎng)膜鋪片檢測GAFP表達。3、ROS及MDA測定制作小鼠眼球冰凍切片,采用ROS熒光探針-DHE法檢測小鼠視網(wǎng)膜氧自由基改變,利用MDA測定,評估脂質(zhì)過氧化程度4、炎癥因子檢測利用ELISA方法檢測視網(wǎng)膜組織勻漿液中的TNF-α、IL-6、MCP-1、IL-10的含量。RT-PCR檢測提取視網(wǎng)膜總的RNA,用RT-PCR進行檢測TNF-α、IL-6、MCP-1、IL-10、ICAM-1、VEGFR mRNA的基因表達情況。5、WesternBlot 檢測Western Blot檢測視網(wǎng)膜組織中NF-κB亞基p65和磷酸化的p65,以及ICAM-1、VEGFR、GAFP等蛋白的表達水平6、白細胞粘附功能測定小鼠深度麻醉后,打開胸腔,用靜脈留置針行主動脈插管,PBS沖洗后,灌注FITC-ConA,解剖視網(wǎng)膜,進行鋪片,熒光顯微鏡觀察。結果:1、奧曲肽減輕視網(wǎng)膜病理損傷,減少視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失,增加視網(wǎng)膜內(nèi)膜厚III度在視網(wǎng)膜缺血再灌注早期,視網(wǎng)膜內(nèi)層出現(xiàn)嚴重水腫,細胞出現(xiàn)空泡化;晚期水腫消退,視網(wǎng)膜萎縮變薄,視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)目減少缺失。奧曲肽干預后可減輕上述改變。I/R后7d,對照組、I/R組和OCT+I/R組神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)分別為:每

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