本文關(guān)鍵詞：兔自身免疫性干眼調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及細(xì)胞因子的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《天津醫(yī)科大學(xué)》 2013年

兔自身免疫性干眼調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及細(xì)胞因子的研究

邊領(lǐng)齋  

【摘要】：目的 干眼是眼科最常見(jiàn)疾病之一,而自身免疫性干眼如Sjogren's綜合征(Sjogren's syndrome, SS)相關(guān)干眼是淚液缺乏型干眼的主要原因。干燥綜合征的發(fā)病機(jī)制尚未明確,研究認(rèn)為免疫調(diào)節(jié)、激素、基因、病毒、神經(jīng)和環(huán)境改變等眾多因素均參與了SS的致病過(guò)程。近年研究指出,調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(CD4+CD25+Treg)功能異常促進(jìn)了干燥綜合征的發(fā)生發(fā)展。本文的研究目的是建立穩(wěn)定的兔自身免疫性干眼模型,結(jié)合臨床表現(xiàn)、組織病理,對(duì)淚液系統(tǒng)內(nèi)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)進(jìn)行分析,研究調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在自身免疫性干眼發(fā)病中所起作用。 方法 1.分離提純兔淚腺上皮細(xì)胞,對(duì)分離的原代細(xì)胞進(jìn)行活性鑒定并培養(yǎng)。 2.淚腺上皮細(xì)胞獨(dú)立培養(yǎng)2天后,分離自體外周血淋巴細(xì)胞,以1：1比例將二者混合培養(yǎng)。BrdU檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞的增殖比率。 3.誘導(dǎo)兔自身免疫性干眼：將激活的自體淋巴細(xì)胞經(jīng)耳緣靜脈回輸供體兔體內(nèi)。回輸細(xì)胞前及回輸后2周、4周、6周、8周分別觀察兔角膜染色、淚膜破裂時(shí)間、淚液分泌等臨床體征,回輸細(xì)胞4周后處死,收集雙側(cè)上淚腺、下淚腺及結(jié)膜進(jìn)行組織病理HE染色。 4.取淚腺組織提取總RNA, real-time PCR檢測(cè)細(xì)胞因子IL-6、IL-10、IL-17、TNF-a、TGF-β、IFN-γ的表達(dá)。 5.流式細(xì)胞儀檢測(cè)淚腺組織、脾臟中CD4+CD25+Treg比例變化。 6.免疫磁珠分選CD4+CD25+Treg,使其與淚腺上皮細(xì)胞及外周血T淋巴細(xì)胞混合共培養(yǎng),BrdU檢測(cè)CD4+CD25+Treg對(duì)效應(yīng)T細(xì)胞是否起到抑制作用。 結(jié)果 1.成功分離獲得純度較高的兔淚腺上皮細(xì)胞。 2.建立兔淚腺上皮細(xì)胞與自體外周血淋巴細(xì)胞的混合共培養(yǎng)體系,自體外周血淋巴細(xì)胞被淚腺上皮細(xì)胞激活,BrdU檢測(cè)增殖比率為3.71。 3.成功建立兔自身免疫性干眼模型：激活的淋巴細(xì)胞回輸回體內(nèi)可以誘導(dǎo)產(chǎn)生兔自身免疫性干眼。與正常組相比,干眼模型組淚液分泌顯著減少(P0.05),淚膜破裂時(shí)間縮短(P0.05),熒光素鈉染色顯示角膜彌漫點(diǎn)狀著色。靜脈注射激活的淋巴細(xì)胞4周后,淚腺和結(jié)膜組織HE染色均顯示淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。 4. real-time PCR結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,干眼模型組淚腺中炎性因子IL-6、IL-17、TNF-a、IFN-γ的表達(dá)呈不同程度增加,抑炎因子IL-10,TGF-p的表達(dá)明顯降低(P0.05)。 5.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,在兔干眼模型中,脾臟和淚腺組織中CD4+CD25+Treg細(xì)胞比例降低。 6. CD4+CD25+Treg可以抑制淚腺特異性效應(yīng)T細(xì)胞的增殖。 結(jié)論 經(jīng)自體淚腺細(xì)胞刺激激活的外周血淋巴細(xì)胞通過(guò)耳緣靜脈回輸后可誘導(dǎo)穩(wěn)定的兔干眼模型,在兔干眼發(fā)病過(guò)程中,CD4+CD25+Treg細(xì)胞免疫抑制作用減弱,Th17細(xì)胞功能亢進(jìn),細(xì)胞因子TNF-a、IFN-γ、IL-10、TGF-β、IL-6參與淚腺中炎癥反應(yīng)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R777.34
【目錄】：

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