本文選題：光動(dòng)力療法　切入點(diǎn)：癌光啉　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2013年碩士論文

【摘要】：目的： 喉癌(Laryngeal Carcinoma)是來(lái)源于喉粘膜上皮組織的惡性腫瘤,雖然近幾十年來(lái)傳統(tǒng)的治療方式如手術(shù)、放療和化療等有了很大的改進(jìn),但手術(shù)對(duì)喉功能的破壞以及放、化療的嚴(yán)重副作用使以上治療方式受到極大限制。對(duì)于晚期和復(fù)發(fā)喉癌,國(guó)內(nèi)外都相繼開(kāi)展了多種多樣的生物治療,希望能夠減輕患者痛苦。 光動(dòng)力療法(Photodynamic Therapy, PDT)是一種激光醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的新方法,已被多個(gè)國(guó)家批準(zhǔn)可用于某些腫瘤的治療。影響PDT效果的關(guān)鍵因素不僅體現(xiàn)在光敏劑在腫瘤組織或細(xì)胞的選擇性積聚和特定光照波長(zhǎng)及強(qiáng)度的選擇上,而且還與光敏劑進(jìn)入的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)和積聚程度有關(guān)。因此探索PDT治療的合適條件,能相對(duì)特異性地殺傷腫瘤細(xì)胞、減少對(duì)健康組織的損害、降低并發(fā)癥以及毒副反應(yīng)等,使其成為一項(xiàng)非常有前途的腫瘤治療方法。本文將通過(guò)研究癌光啉(PsD007)誘導(dǎo)的光動(dòng)力療法在體內(nèi)外對(duì)人喉癌細(xì)胞Hep2的殺傷作用,初步探索其殺傷機(jī)制。 方法： 1、體外實(shí)驗(yàn) 體外培養(yǎng)Hep2細(xì)胞,觀察不同時(shí)間光敏劑在腫瘤細(xì)胞中的孵育特性；MTT法測(cè)定在不同光敏劑濃度(3.125-100μg/mL)、光照劑量(1.2-4.8J/cm2)以及三種抗氧化劑的作用下PDT殺傷效果；共聚焦顯微鏡觀察光敏劑的亞細(xì)胞定位；Annexin V/PI雙染法檢測(cè)不同劑量PDT處理后細(xì)胞凋亡率；DCFH-DA探針檢測(cè)PDT處理后2H內(nèi)細(xì)胞的活性氧(ROS)產(chǎn)量。 2、在體實(shí)驗(yàn) 建立Balb/c裸鼠喉癌模型,腫瘤組織長(zhǎng)至0.5-1cm3時(shí)進(jìn)行PDT處理。其中PsD007的濃度為10mg/kg,光源為635nm的半導(dǎo)體激光器,激光功率密度分別為100、200和400mW/cm2。動(dòng)物隨機(jī)分為對(duì)照組(空白對(duì)照組、單純光敏劑組、單純照光組)和光動(dòng)力作用組(30J/cm2組、60J/cm2組、120J/cm2組、240J/cm2組和480J/cm2組)。PDT后觀察并記錄腫瘤生長(zhǎng)情況,畫(huà)出腫瘤生長(zhǎng)曲線和體重變化曲線,第50天處死裸鼠取腫瘤組織,HE切片觀察；取PDT作用后1、24和48h的腫瘤組織,HE染色觀察其形態(tài)。 結(jié)果： 1、PDT對(duì)人喉癌細(xì)胞的殺傷作用高于對(duì)照組(P0.05),MTT結(jié)果顯示PDT對(duì)Hep2的殺傷效果可高達(dá)85.4%,光敏劑濃度和光照能量密度都與細(xì)胞死亡率呈正相關(guān),在一定范圍內(nèi),隨著光敏劑濃度的增加和光照能量的增大,光動(dòng)力作用對(duì)細(xì)胞的相對(duì)抑制率逐漸增大,調(diào)整光敏劑濃度和光照能量密度,可以優(yōu)化光動(dòng)力處理效果:PDT4h后凋亡率可達(dá)49.5%(能量密度為1.2J/cm2)和70.2%(能量密度為4.8J/cm2);三種抗氧化劑均能不同程度拮抗PDT對(duì)細(xì)胞的殺傷效應(yīng),以疊氮鈉效果最好(P0.05)；光敏劑在細(xì)胞內(nèi)主要定位在線粒體；PDT組細(xì)胞內(nèi)ROS含量顯著提高,是單純對(duì)照組的2.08倍,PDT后2h更是升至對(duì)照組的2.71倍。 2、在體實(shí)驗(yàn)中,PDT組裸鼠的腫瘤生長(zhǎng)緩慢,且120J/cm2組和480J/cm2組荷瘤裸鼠在治療16天后全部治愈；PDT組裸鼠的體重明顯比對(duì)照組重(P0.05),生存質(zhì)量高。HE切片結(jié)果顯示PDT作用后腫瘤組織發(fā)生明顯的壞死、血管水腫、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和纖維組織增生等急性損傷的特征。 結(jié)論： 體外和在體實(shí)驗(yàn)均顯示PsD007-PDT對(duì)Hep2細(xì)胞有明顯的抑制作用。其對(duì)細(xì)胞的抑制率與光敏劑濃度、激光能量密度、激光功率密度和抗氧化劑有密切關(guān)系。其誘導(dǎo)的凋亡機(jī)制以線粒體凋亡為主,凋亡發(fā)生可能是通過(guò)產(chǎn)生活性氧誘發(fā)線粒體凋亡途徑引起的,同時(shí)也伴隨著其他死亡方式。體外實(shí)驗(yàn)的幾組治療參數(shù)中,以PDT120J/cm2組(激光功率密度=100mW/cm2,能量密度=120J/cm2)實(shí)驗(yàn)效果最好。本實(shí)驗(yàn)初步證實(shí)了PDT在喉癌治療中的可行性以及PDT用于體內(nèi)治療的相對(duì)安全性,為光動(dòng)力療法的臨床研究提供了新的科學(xué)依據(jù)和理論基礎(chǔ),將有助于拓展PDT在臨床治療領(lǐng)域中的應(yīng)用。
[Abstract]:Objective:
Laryngeal cancer (Laryngeal Carcinoma) is derived from the laryngeal mucosa tissues of malignant tumors, although in recent decades traditional therapies such as surgery, radiotherapy and chemotherapy have improved greatly, but the failure of surgery of laryngeal function and chemotherapy, the severe side effects of above treatment for advanced and is greatly limited. The recurrence of laryngeal cancer, both at home and abroad have carried out a variety of biological treatment, hoping to alleviate the suffering of patients.
Photodynamic therapy (Photodynamic Therapy PDT) is a new method for laser medical field, has been a number of countries approved for the treatment of certain tumors. The key factors influencing the effect of PDT is not only reflected in the selective accumulation of a photosensitizer in tumor tissues or cells and specific light wavelength and intensity of selection, but also related to subcellular structures and the degree of accumulation of the photosensitizer into. Therefore, exploring the appropriate conditions of PDT treatment, can kill tumor cells relative specificity to minimize damage to healthy tissue, reduce the complications and adverse reaction, make it become a very promising approach to cancer therapy. This paper will research photocarcinorin (PsD007) the killing effect of photodynamic therapy on human laryngeal carcinoma cells induced by Hep2 in vitro and in vivo, and explore the mechanism of killing.
Method錛，

本文編號(hào)：1722062