本文關(guān)鍵詞：缺氧對(duì)視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞中谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體及未折疊蛋白相關(guān)因子XBP1、CHOP表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《第四軍醫(yī)大學(xué)》 2012年

缺氧對(duì)視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞中谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體及未折疊蛋白相關(guān)因子XBP1、CHOP表達(dá)的影響

孫麗娟  

【摘要】：青光眼、年齡相關(guān)性黃斑病變、視網(wǎng)膜色素變性、視神經(jīng)外傷等眼科主要致盲疾病，共同的病理特點(diǎn)均為視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（retinal ganglion cells,RGCs）及其纖維漸進(jìn)性死亡。由于其為中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一部分，損傷后不可再生，此類疾病尚無有效治療方法。缺血缺氧是視網(wǎng)膜疾病的共同病理特點(diǎn)之一。視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞是視網(wǎng)膜內(nèi)最主要的膠質(zhì)細(xì)胞，依靠其胞內(nèi)高親合力L-谷氨酸/L-天門冬氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體（glutamate-aspartate transporters, GLAST）維持RGCs胞外谷氨酸（glutamate, Glu）濃度，保護(hù)RGCs免受谷氨酸興奮性毒作用。未折疊蛋白反應(yīng)（unfolded protein reaction, UPR）是細(xì)胞在感染、炎癥、細(xì)胞因子、外傷等刺激下，，初期表現(xiàn)為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)大量非折疊蛋白蓄積，進(jìn)而觸發(fā)的一系列反應(yīng)。在中樞神經(jīng)退行性疾病、糖尿病、癌癥等疾病中均被證實(shí)。近來研究表明，UPR也可能是視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞及其纖維漸進(jìn)性死亡的首發(fā)病理機(jī)制。 目的： 1.原代培養(yǎng)視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞； 2.研究體外缺氧刺激后視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞是否存在未折疊蛋白反應(yīng)； 3.研究未折疊蛋白反應(yīng)與L-谷氨酸/L-天門冬氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體GLAST的關(guān)系。 方法： 1.出生3～7d大鼠視網(wǎng)膜組織采用胰酶消化法培養(yǎng)視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞； 2.氯化鈷（Cocl2）200μmol·L~(–1)對(duì)視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞進(jìn)行體外缺氧干預(yù)，干預(yù)時(shí)間為3h、6h、12h、24h、48、72h；UPR誘導(dǎo)劑二硫蘇糖醇（DTT）2mmol·L~(–1)刺激視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞為陽性對(duì)照，干預(yù)時(shí)間為3h、6h、12h、24h、48h、72h；空白對(duì)照：不加任何干預(yù)，繼續(xù)用含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)； 3.利用實(shí)時(shí)定量PCR、Western-blot技術(shù)檢測(cè)GLAST與UPR相關(guān)因子XBP1、CHOP的表達(dá)及相關(guān)性。 結(jié)果： 1.視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞鑒定：免疫熒光染色示90％以上細(xì)胞GS、GLAST表達(dá)陽性；流式細(xì)胞技術(shù)Müller細(xì)胞的GLAST表達(dá)陽性率為（84.66±3.51）％； 2.實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果：缺氧刺激后,GLAST與XBP1、CHOP在Müller細(xì)胞上均有表達(dá)，缺氧早期呈上升趨勢(shì)，干預(yù)后24h表達(dá)最強(qiáng)，后呈下降趨勢(shì)。與DTT組表達(dá)趨勢(shì)一致； 3. Western-blot結(jié)果：缺氧刺激后，GLAST與XBP1在Müller細(xì)胞上均表達(dá)，期呈上升趨勢(shì)，干預(yù)后24小時(shí)表達(dá)最強(qiáng)，后呈下降趨勢(shì)。 結(jié)論： 1.體外缺氧刺激后視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞存在UPR； 2.未折疊蛋白相關(guān)因子的變化與GLAST的變化趨勢(shì)一致。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R774.1;R587.2
【目錄】：

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