本文關(guān)鍵詞：翼狀胬肉進(jìn)行期與靜止期MMP-9和VEGF的表達(dá)及其相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

        研究背景翼狀胬肉是一種慢性炎癥性病變,為瞼裂部球結(jié)膜纖維血管組織呈三角形增生而侵犯角膜的一種疾病,因形狀狀似昆蟲翅膀而得名。翼狀胬肉是臨床上最常見的眼科疾病之一,發(fā)病率高,術(shù)后復(fù)發(fā)率也高,在其發(fā)生及發(fā)展中不僅引起眼部刺激癥狀、影響美觀,還可影響視力；如翼狀胬肉較大時(shí),還可限制眼球運(yùn)動(dòng)。翼狀胬肉發(fā)生后可分為進(jìn)行期和靜止期,二者的生物學(xué)行為差別較大。在翼狀胬肉發(fā)生后胬肉組織可長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)處于類似休眠狀態(tài)的靜止期,不發(fā)展,胬肉菲薄、血管組織少、頭端無浸潤(rùn)帶,部分患者此其可長(zhǎng)達(dá)10余年而很少出現(xiàn)眼部刺激癥狀及視力下降；而一旦某些促發(fā)因素影響,胬肉進(jìn)入進(jìn)行期,胬肉組織則進(jìn)展快速,胬肉充血、肥厚某些,大量纖維血管組織增生,頭端可見浸潤(rùn)帶,此期對(duì)角膜破壞迅速、視功能受到嚴(yán)重的威脅及損害。翼狀胬肉的進(jìn)行期及靜止期可以交替出現(xiàn),相互轉(zhuǎn)化。翼狀胬肉一旦發(fā)生即不會(huì)自行消退,只會(huì)在進(jìn)行期和靜止期之間互相轉(zhuǎn)化,但對(duì)于翼狀胬肉在進(jìn)行期和靜止期如何轉(zhuǎn)化及具體機(jī)制目前在國內(nèi)仍很少人研究,在國外研究也較少,目前國內(nèi)外研究主要集中在探討翼狀胬肉發(fā)病機(jī)制方面。在組織學(xué)上,翼狀胬肉是由萎縮的結(jié)膜上皮和增生肥大的血管化組織及彈性退變結(jié)締組織構(gòu)成。近年來的研究表明,翼狀胬肉更趨向是一種組織增生性疾病,并可能與細(xì)胞的增殖和凋亡有關(guān)。翼狀胬肉組織的超微結(jié)構(gòu)研究表明,彈性纖維和膠原纖維的增生和變性是翼狀胬肉較為突出的病理改變,臨床表現(xiàn)為新生組織的不斷生長(zhǎng)、增厚,并逐漸侵入角膜,手術(shù)切除后容易復(fù)發(fā),此特點(diǎn)與腫瘤組織相似,即翼狀胬肉具有腫瘤樣的生物學(xué)特性,而腫瘤的發(fā)生及發(fā)展的重要原因是細(xì)胞異常增殖和凋亡失衡。腫瘤血管的生成在腫瘤生長(zhǎng)和演進(jìn)過程中至關(guān)重要,若沒有新生血管長(zhǎng)入,一個(gè)腫瘤克隆灶不會(huì)超過2mmm3。微血管的生成和腫瘤樣組織的持續(xù)性生長(zhǎng)及侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān),受到一些基質(zhì)水解酶的影響,病變組織除分泌相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶降解基底膜外還通過分泌促血管生成因子、激活VEGF。同時(shí),大量國內(nèi)外研究也發(fā)現(xiàn)翼狀胬肉組織存在基質(zhì)金屬蛋白酶和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)率均較正常結(jié)膜組織的表達(dá)率要明顯增高、細(xì)胞異常增殖且凋亡失衡等改變�；|(zhì)金屬蛋白酶(MMP)是一類含鋅的中性內(nèi)肽酶,能修建或降解細(xì)胞外基質(zhì)的酶家族,在胚胎發(fā)育、組織重建、傷口愈合、血管生成、腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移等多種生理病理過程中發(fā)揮著重要作用。在體內(nèi),MMP的活性受到a2-巨球蛋白、金屬蛋白酶抑制劑等內(nèi)源性抑制因子的嚴(yán)密調(diào)節(jié)。MMP與金屬蛋白酶抑制劑之間的平衡狀態(tài)的維持對(duì)于組織結(jié)構(gòu)連接的降解和重塑程度具有重要作用。到目前為止,相關(guān)研究已發(fā)現(xiàn)20多種人基質(zhì)金屬蛋白酶。根據(jù)其結(jié)構(gòu)和特異性底物分為以下幾類：膠原酶類、明膠酶類、基質(zhì)水解酶類、膜型基質(zhì)金屬蛋白酶類等。其中MMP1屬于膠原酶類,MMP9屬于明膠酶類。大量研究發(fā)現(xiàn),MMP在胬肉組織中的表達(dá)強(qiáng)于正常結(jié)膜組織,這提示胬肉組織中成纖維細(xì)胞的異常增生及新生血管生成過程中,涉及到細(xì)胞外基質(zhì)的降解和重建可能是MMP所致,MMP1僅僅只破壞1型膠原,而MMP9不僅可以破壞2型膠原,還可以破壞突變的膠原,最終可以導(dǎo)致膠原的完全破壞和成纖維細(xì)胞侵入。VEGF是調(diào)控血管生成的關(guān)鍵因子,分子量為34-45KD,其序列高度保守,廣泛分布于人和動(dòng)物體內(nèi)的大腦、腎臟、肝臟、脾臟、胰腺和骨骼等組織中。它是最直接的血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂素,并且作為血管生成旁分泌刺激因子而被分泌。VEGF是目前研究發(fā)現(xiàn)的功能最強(qiáng)的血管形成促進(jìn)因子。它可以特異性地刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的有絲分裂、促進(jìn)血管形成、抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞的遷移,促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞的合成和分泌基質(zhì)金屬蛋白酶、家屬基質(zhì)降解及趨發(fā)炎癥細(xì)胞。同時(shí),它還可以增強(qiáng)微血管的通透性,促使血管內(nèi)大分子物質(zhì)溢出,從而有利于血管外基質(zhì)的形成,為血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移及血管形成提供物質(zhì)支架,并最終促使新毛細(xì)血管生成并促進(jìn)其功能的成熟。有研究表明,血管的生長(zhǎng)和成熟是高度復(fù)雜和協(xié)調(diào)的過程。在正常生理性血管生長(zhǎng)的過程中,如胚胎形成、骨骼生長(zhǎng)等,VEGF信號(hào)代表重要的限制酶。在病理情況下,可出現(xiàn)VEGF的異常表達(dá)。在紫外線照射下,VEGF表達(dá)上調(diào),通過對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞強(qiáng)烈的有絲分裂作用,促進(jìn)新生血管形成,尤其是微血管的通透性,引起血漿蛋白的滲漏到細(xì)胞外基質(zhì),在細(xì)胞外沉積,為成纖維細(xì)胞核血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷入提供條件基質(zhì),為翼狀胬肉細(xì)胞的生長(zhǎng)和新生毛細(xì)血管網(wǎng)的建立提供營(yíng)養(yǎng)。然而,MMP-9與VEGF也存在密切聯(lián)系。目前認(rèn)為MMP-9與VEGF在腫瘤組織血管發(fā)生中是最重要的促進(jìn)因子,二者的過度表達(dá)可作為腫瘤血管發(fā)生的指標(biāo)。Riedel F.等認(rèn)為MMP-9與VEGF在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮了協(xié)同作用。而Poyer F.等發(fā)現(xiàn)MMP-9與VEGF間存在著一個(gè)自分泌系統(tǒng),二者互相調(diào)節(jié)促進(jìn)對(duì)方的分泌。目的分析翼狀胬肉進(jìn)展過程的相關(guān)因子的表達(dá)差異了解其中的機(jī)制,為治療提供理論基礎(chǔ)。方法本研究收集2011年4至7月期間在我院診斷為原發(fā)性翼狀胬肉,并行翼狀胬肉切除+球結(jié)膜覆蓋術(shù)的翼狀胬肉標(biāo)本20例(進(jìn)展期)及20例(靜止期),將標(biāo)本石蠟固定、切片,采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)MMP-9和VEGF在翼狀胬肉進(jìn)展期與靜止期中的表達(dá)。結(jié)果翼狀胬肉組織中MMP-9陽性表達(dá)呈棕黃色顆粒,主要定位于翼狀胬肉組織的細(xì)胞核膜上,細(xì)胞質(zhì)也有染色,進(jìn)展期棕黃色顆粒分布于整個(gè)胞質(zhì)及核膜周邊。翼狀胬肉組MMP-9平均秩次為28.50,正常結(jié)膜組MMP-9平均秩次為13.50,提示翼狀胬肉組MMP-9表達(dá)的強(qiáng)度高于正常結(jié)膜組具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.001)。翼狀胬肉在進(jìn)展期組MMP-9平均秩次為12.29,靜止期組MMP-9平均秩次為5.50,提示翼狀胬肉進(jìn)展期MMP-9陽性表達(dá)率強(qiáng)于靜止期具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.033)。VEGF在翼狀胬肉組織中表達(dá),亦呈棕黃色顆粒,位于翼狀胬肉的上皮層、間質(zhì)內(nèi)皮細(xì)胞及血管壁上,在進(jìn)展期與靜止期的上皮層表達(dá)均呈陽性。翼狀胬肉組VEGF平均秩次為28.61,正常結(jié)膜組VEGF平均秩次為13.05,提示翼狀胬肉組VEGF的表達(dá)高于正常結(jié)膜組具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.001)。翼狀胬肉進(jìn)展期組VEGF平均秩次為14.93,靜止期組VEGF平均秩次為7.50,提示翼狀胬肉組進(jìn)展期VEGF的陽性表達(dá)率高于靜止期組具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.037)。MMP-9與VEGF對(duì)于翼狀胬肉進(jìn)展期診斷無顯著性差異(P=0.727), kappa=0.436, P=0.010,提示MMP-9與VEGF在翼狀胬肉組織中表達(dá)呈正相關(guān)性。結(jié)論MMP-9及VEGF的高表達(dá)與翼狀胬肉具有一定關(guān)系,并且MMP-9和VEGF在翼狀胬肉進(jìn)展期中表達(dá)呈正相關(guān)性。

    Objective:To study on the expression of matrix metalloproteinases (MMP-9) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in pterygium, discus the correlation of them, and to study the function of MMP-9and VEGF in the progress of pterygium.Methods:Using the technique of immuno-histochemistry, we compared the different expression of MMP-9and VEGF between the aggressive and quiescent period of human pterygium.Results:The positive expression of MMP-9in Pterygium tissue was brown yellow particles, mainly located in pterygium tissue cell membrane,cytoplasm also had dyeing, advanced brown granules were distributed throughout the cytoplasm and nuclear membrane surrounding.The mean rank of MMP-9in the Pterygium group was28.50, the mean rank of MMP-9in the normal conjunctival group was13.50, which indicated the MMP-9expression in the pterygium group was intensity higher than in the normal conjunctival group(P=0.001). The mean rank of MMP-9in the pterygium progressive stage was12.29, and in the quiescent period group was5.50, which indicated the MMP-9expression in the pterygium progressive stage was higher than in the quiescent period group(P=0.033).The positive expression of VEGF in Pterygium tissue was also with a brown granules, located in pterygium epithelial, interstitial endothelial cells and vascular wall in advance, and the quiescent period of cortical expression of positive. The mean rank of VEGF in the pterygium group was28.61, the mean rank of VEGF in the normal conjunctival group was13.05, which indicated that the VEGF expression in the pterygium group was intensity higher than in the normal conjunctival group(P=0.001). The mean rank of VEGF in the pterygium progressive stage was14.93, and in the quiescent period group was7.50, which indicated the VEGF expression in the pterygium progressive stage was higher than in the quiescent period group (P=0.037).There were no significant difference between MMP-9and VEGF for the diagnosis of pterygium (P=0.727), kappa=0.436, P=0.010,which indicated that MMP-9and VEGF has much certain positive correlation.Conclusions:VEGF and MMP-9were closely linked and play an very important role in the occurrence and development of pterygium.

        翼狀胬肉進(jìn)行期與靜止期MMP-9和VEGF的表達(dá)及其相關(guān)性研究

摘要3-7ABSTRACT7-8前言10-121 材料和方法12-142 結(jié)果14-173 討論17-244 參考文獻(xiàn)24-27全文總結(jié)與展望27-28綜述28-36    參考文獻(xiàn)33-36附錄二 中英文對(duì)照縮略詞表36-37攻讀碩士期間發(fā)表論文及成果37-38致謝38-40統(tǒng)計(jì)學(xué)審稿證明40

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