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  本文關(guān)鍵詞：環(huán)孢霉素A對人晶狀體上皮細(xì)胞抑制的體外研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《天津醫(yī)科大學(xué)》 2013年

環(huán)孢霉素A對人晶狀體上皮細(xì)胞抑制的體外研究

苗青  

【摘要】：目的 體外研究環(huán)孢霉素A(CsA)對人晶狀體上皮細(xì)胞(HLEB-3)抑制,計(jì)算CsA對人晶狀體上皮細(xì)胞的半數(shù)有效抑制濃度；定量測定PCNA基因在無CsA處理的對照組與CsA處理的實(shí)驗(yàn)組中的表達(dá),進(jìn)一步探討CsA抑制人晶狀體上皮細(xì)胞增殖的分子作用機(jī)制,驗(yàn)證CsA與PCNA陽性細(xì)胞表達(dá)量的關(guān)系,為CsA修飾的IOL體內(nèi)實(shí)驗(yàn)提供依據(jù)。 方法 體外培養(yǎng)來源于廣州中山醫(yī)科大學(xué)眼科中心的人晶狀體上皮細(xì)胞株HLE B-3細(xì)胞。(1)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)的測定觀察細(xì)胞增殖狀態(tài),實(shí)驗(yàn)設(shè)置10個細(xì)胞濃度梯度(0.125×104個/ml、0.25×104個/ml、0.5×104個/ml、1.0×104個/ml、1.5×104個/ml、2.0×104個/ml、2.5x104個/ml、3.0×104個/ml、3.5x104個/ml、4.0×104個/ml)。以2×104個/ml細(xì)胞密度種植96孔板,設(shè)置實(shí)驗(yàn)組與對照組,實(shí)驗(yàn)組給予CsA刺激,濃度為1ug/ml、2ug/ml、4ug/ml、8ug/ml、16ug/ml,作用時(shí)間24h、48h、72h,對照組無CsA刺激,作用時(shí)間24h、48h、72h。每組設(shè)2個平行復(fù)孔,重復(fù)3次。 (2)PCNA基因的表達(dá)測定以1×105個/ml的細(xì)胞密度接種于24孔板,實(shí)驗(yàn)組給予CsA刺激,濃度lug/ml,作用24h、48h,對照組無CsA刺激,應(yīng)用RT-PCR檢測PCNA基因的復(fù)制；應(yīng)用組織免疫學(xué)方法檢測PCNA陽性細(xì)胞的表達(dá)。每組設(shè)2個平行復(fù)孔,重復(fù)3次。 (3)RT-PCR結(jié)果應(yīng)用2-△△CT統(tǒng)計(jì)量進(jìn)行分析,免疫組織化學(xué)結(jié)果分別應(yīng)用PI及IPP.5.0圖像分析法。所有統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù),應(yīng)用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05。 結(jié)果 (1)在低濃度時(shí)(1ug/m1)CsA作用24h對人晶狀體上皮細(xì)胞的增殖抑制實(shí)驗(yàn)組與對照組差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),作用48h對細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)組與對照組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。CsA作用24h,IC50=71.010±1.851μg/ml,Probit=-2.964+1.601x; CsA作用48h, IC50=25.529±1.407μg/ml,Probit=-1.363+1.969x; CsA作用72h, IC50=17.881±1.252μg/ml,Probit=-5.915+4.723x。CsA對HLEB-3細(xì)胞的抑制呈時(shí)間依賴性及濃度依賴性。 (2) RT-PCR測定,CsA lug/ml作用24hPCNA表達(dá)量實(shí)驗(yàn)組與對照組差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),作用48hPCNA表達(dá)量實(shí)驗(yàn)組與對照組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P,0.05)。 (3)免疫組織化學(xué)測定,CsA lug/ml作用24h、48hPCNA陽性細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)組與對照組中,作用24h差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；作用48h差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 (1) CsA1ug/ml作用24h,不能對HLE-B3增殖的抑制產(chǎn)生有效作用；在持續(xù)作用至48h時(shí),CsA能夠有效抑制HLEB-3細(xì)胞的增殖。CsA對HLEB-3細(xì)胞抑制呈時(shí)間依賴性；在有效抑制濃度(1ug/m1)下,CsA對HLEB-3的抑制呈濃度依賴性,其半數(shù)抑制率提高。 (2) CsA能夠抑制PCNA基因的表達(dá),且呈時(shí)間依賴性。環(huán)孢霉素A能夠抑制PCNA蛋白的表達(dá),且呈時(shí)間依賴性。 (3) CsA通過抑制抑制PCNA基因表達(dá)抑制HLEB-3細(xì)胞增殖。綜上,CsA lug/ml持續(xù)作用至48h,能有效抑制HLE B-3細(xì)胞的增殖,干預(yù)后發(fā)性白內(nèi)障的形成,為防治后發(fā)性白內(nèi)障的可行性藥物。此結(jié)果將為CsA修飾的載藥性人工晶狀體的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)提供依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R776.1
【目錄】：

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3 馮希敏;LY294002對bFGF誘導(dǎo)的兔眼晶狀體上皮細(xì)胞增殖的影響[D];鄭州大學(xué);2010年

4 金海鷹;晶狀體上皮細(xì)胞端粒酶活性及衰老、凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[D];暨南大學(xué);2003年

5 李丹;PI3K抑制劑LY294002對人晶狀體上皮細(xì)胞增殖的影響[D];中國醫(yī)科大學(xué);2010年

6 李姍姍;七葉皂苷鈉體外對大鼠紫外線所致晶狀體上皮細(xì)胞NF-κB表達(dá)的影響[D];蘭州大學(xué);2011年

7 趙瑞苓;外源表達(dá)人激活要素受體ⅡA對人晶狀體上皮細(xì)胞增殖的影響[D];吉林大學(xué);2012年

8 劉亞會;人晶狀體上皮細(xì)胞中bax的表達(dá)與白內(nèi)障形成的相關(guān)性研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2010年

9 趙穎;人參皂苷Rg3對人晶狀體上皮細(xì)胞生長的抑制作用[D];遼寧醫(yī)學(xué)院;2011年

10 魏遠(yuǎn)建;晶狀體上皮細(xì)胞內(nèi)Ca~(2+)濃度變化對AQP1表達(dá)及細(xì)胞活性的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

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