本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用微陣列芯片分析糖尿病大鼠下肢動(dòng)脈硬化microRNAs差異表達(dá)譜

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【摘要】：臨床中我們發(fā)現(xiàn),越來(lái)越多的糖尿病病人患上了下肢動(dòng)脈硬化,臨床表現(xiàn)特點(diǎn)有間歇性跛行、靜息痛、缺血性壞疽。迄今動(dòng)脈硬化具體詳細(xì)的發(fā)病機(jī)制還未闡明,目前較為普遍認(rèn)同“損傷應(yīng)激學(xué)說(shuō)”對(duì)其發(fā)病機(jī)制的表述,但是卻未涉及基因調(diào)控。由于發(fā)病機(jī)制在基因調(diào)控領(lǐng)域中的空白,不能確定相關(guān)基因的干預(yù)靶點(diǎn),影響到了對(duì)糖尿病下肢動(dòng)脈硬化的有效預(yù)防和治療。最近十年microRNAs成為基因研究領(lǐng)域中最熱門的一環(huán),預(yù)計(jì)約30%的人類基因都會(huì)受microRNAs調(diào)控,一個(gè)microRNA家族可能與多達(dá)200個(gè)靶基因結(jié)合,相比大量的靶基因,起調(diào)控作用的microRNAs數(shù)量要少的多,所以使得我們通過(guò)microRNAs研究糖尿病下肢動(dòng)脈硬化的發(fā)病機(jī)制更容易進(jìn)行,同時(shí)這也是運(yùn)用microRNAs研究基因表達(dá)調(diào)控的巨大優(yōu)勢(shì)。所以本項(xiàng)研究首先通過(guò)建立大鼠模型,探究microRNAs在糖尿病下肢動(dòng)脈硬化中的表達(dá)情況,為后續(xù)探究人類患有糖尿病與下肢動(dòng)脈硬化的發(fā)病機(jī)制打下動(dòng)物模型理論實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。目的：建立大鼠模型,檢測(cè)糖尿病大鼠下肢動(dòng)脈硬化(糖硬)與糖尿病大鼠下肢非動(dòng)脈硬化(糖非)的下肢動(dòng)脈組織中microRNAs的差異表達(dá)情況,探究異常表達(dá)的microRNAs參與糖尿病大鼠下肢動(dòng)脈粥樣硬化的可能的分子機(jī)制。方法：選取動(dòng)物建模成功的患有糖尿病下肢動(dòng)脈硬化和患有糖尿病非下肢動(dòng)脈硬化的大鼠,取出下肢動(dòng)脈血管組織,分別提取總的microRNAs,用microRNAs微陣列芯片中進(jìn)行雜交檢測(cè),經(jīng)過(guò)芯片掃描和數(shù)據(jù)分析,然后通過(guò)RT-qPCR驗(yàn)證芯片的掃描分析結(jié)果,最終獲得糖尿病大鼠下肢動(dòng)脈硬化的microRNAs差異表達(dá)譜。結(jié)果：篩選出10個(gè)與糖尿病大鼠患有下肢動(dòng)脈硬化有關(guān)的microRNAs,即rno-miR-206-3p、rno-miR-133a-5p、rno-miR-133b-3p、rno-miR-133a-3p、 rno-miR-325-5p、rno-miR-675-3p、rno-miR-411-5p、rno-miR-329-3p、rno-miR-335、 rno-miR-126a-3p,10個(gè)異常表達(dá)的microRNA都上調(diào)。RT-qPCR證實(shí),其中9個(gè)microRNA與芯片檢查結(jié)果一致,僅僅rno-miR-335的PCR檢測(cè)結(jié)果與基因芯片檢測(cè)結(jié)果相反,為表達(dá)下調(diào)。芯片顯示糖尿病下肢動(dòng)脈硬化上調(diào)明顯的rno-miR-206-3p、rno-miR-133a-5p、rno-miR-675-3p,分別達(dá)到了99倍,39倍,18倍,且P0.05,實(shí)時(shí)定量也顯示相似的表達(dá)倍數(shù)。依據(jù)數(shù)據(jù),值得關(guān)注這三種microRNAs,作為后續(xù)有關(guān)功能實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵microRNAs結(jié)論：有一群microRNAs在糖尿病大鼠下肢動(dòng)脈硬化中扮演著重要作用,其表達(dá)過(guò)程很可能影響著血管動(dòng)脈硬化的進(jìn)程。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病 下肢動(dòng)脈硬化 microRNAs 微陣列
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.2;R543.5
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-12
• 縮略詞表12-13
• 第一章 緒言13-28
• 1.1 糖尿病以及并發(fā)癥13-15
• 1.2 糖尿病血管病變相關(guān)分子機(jī)制15-17
• 1.3 MicroRNAs的發(fā)現(xiàn)與發(fā)展17-18
• 1.4 MicroRNAs在生物中的發(fā)生和表達(dá)18-19
• 1.5 MicroRNAs的特點(diǎn)和研究領(lǐng)域19-23
• 1.6 MicroRNAs與糖尿病23-24
• 1.7 MicroRNAs與動(dòng)脈硬化24-25
• 1.8 聯(lián)想推測(cè)microRNAs可能參與糖尿病下肢動(dòng)脈硬化的發(fā)生發(fā)展25
• 1.9 基因表達(dá)分析解決方案25-28
• 第二章 實(shí)驗(yàn)分析28-80
• 2.1 前言28
• 2.2 材料和方法28-41
• 2.2.1 材料28-31
• 2.2.2 方法31-41
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法41
• 2.4 結(jié)果41-80
• 2.4.1 糖尿病大鼠下肢動(dòng)脈硬化建模及診斷結(jié)果41-46
• 2.4.2 樣本total RNA提取質(zhì)檢結(jié)果46-47
• 2.4.3 MicroRNAs數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估47-53
• 2.4.4 片樣品雜交信號(hào)相關(guān)性53-55
• 2.4.5 MicroRNAs芯片雜交信號(hào)原始掃描結(jié)果55-56
• 2.4.6 MicroRNAs芯片篩查結(jié)果56-63
• 2.4.7 差異表達(dá)microRNAs聚類分析63-64
• 2.4.8 篩選的差異表達(dá)microRNAs實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證結(jié)果64-67
• 2.4.9 MicroRNAs芯片結(jié)果與實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果比較67-69
• 2.4.10 MicroRNAs與mRNA靶向關(guān)系分析69-80
• 第三章 討論和結(jié)論80-86
• 3.1 討論80-84
• 3.2 結(jié)論84-86
• 致謝86-87
• 參考文獻(xiàn)87-92
• 附錄A 攻讀碩士期間發(fā)表論文目錄92-93
• 附錄B 其他需要說(shuō)明內(nèi)容93

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本文編號(hào)：929053