本文關(guān)鍵詞：miR-29a在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中的作用及其分子機(jī)制

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【摘要】：動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是一種全身性的、彌漫的慢性發(fā)展過程，是導(dǎo)致冠心病的主要病理基礎(chǔ)。大量研究發(fā)現(xiàn)，炎癥和代謝異常與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，而其中脂質(zhì)代謝作為冠心病獨(dú)立的危險(xiǎn)因素在動(dòng)脈硬化發(fā)生過程中起著至關(guān)重要的作用。動(dòng)脈粥樣硬化的病理過程大概分為血管內(nèi)皮功能受損、血管內(nèi)膜增厚和斑塊形成三個(gè)階段。其中以血管平滑肌細(xì)胞增殖和脂質(zhì)沉積為主要特征的血管內(nèi)膜增厚階段是動(dòng)脈硬化形成的主要環(huán)節(jié)，因此對(duì)于這部分的研究一直是熱點(diǎn)問題。 MicroRNA（miRNA）是一種由非編碼區(qū)域轉(zhuǎn)錄的小片段RNA，廣泛的參與細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、發(fā)育等生理病理過程。隨著對(duì)miRNA認(rèn)識(shí)的不斷深入，研究者們發(fā)現(xiàn)miRNA在心血管疾病中起到了極其重要的作用，不僅參與心血管疾病的發(fā)生過程，其表達(dá)變化還與疾病的診斷和預(yù)后密切相關(guān)。MicroRNA-29a(miR-29a)是新近發(fā)現(xiàn)的一個(gè)與細(xì)胞增殖緊密相關(guān)的小分子RNA家族，參與多種疾病，如肝纖維化，腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程等。本實(shí)驗(yàn)將探討miR-29a在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、斑塊穩(wěn)定方面的作用及其分子機(jī)制。 方法： 1動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型的復(fù)制及分組 本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為五組，分別為C57BL/6J對(duì)照組(B6, n=3)、ApoE敲除小鼠正常飲食組(AD, n=3)、ApoE敲除小鼠高脂飲食組(AG, n=3)、ApoE敲除小鼠尾靜脈注射pAd-GFP病毒高脂飲食組(AP, n=3)、以及ApoE敲除小鼠尾靜脈注射pAd-miR-29a病毒高脂飲食組(AM, n=3)。C57BL/6J及AD組，正常飲食。AG、AP、AM組，高脂飲食。AP組分別于高脂飲食第1、7、14天尾靜脈注射pAd-GFP病毒（1×109pfu）。AM組分別于高脂飲食第1、7、14天尾靜脈注射miR-29a病毒（1×109pfu） 2miR-29a轉(zhuǎn)染不影響動(dòng)脈粥樣硬化小鼠的血脂水平 與B6組和AD組小鼠相比，AG組、AP組和AM組（血脂各項(xiàng)指標(biāo)比較除HDL以外均有顯著性差異，其中TC和LDL-C升高最為顯著，6周末升高了3到5倍。但三組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，以上結(jié)果提示，，血脂增高在AS斑塊形成過程中發(fā)揮了重要的作用，但轉(zhuǎn)染miR-29a對(duì)血脂水平無影響。 3miR-29a對(duì)脂質(zhì)斑塊形成的影響 高分辨力超聲檢查:高脂飼養(yǎng)6周末B6組、AD組小鼠主動(dòng)動(dòng)脈弓內(nèi)膜光滑完整，連續(xù)，內(nèi)膜不厚，彩色充盈佳。ApoE敲除小鼠高脂飲食6周后，AG、AP和AM組小鼠主動(dòng)動(dòng)脈弓內(nèi)膜漸粗糙不完整，回聲有間斷，內(nèi)膜增厚厚，彩色充盈尚可，可見低回聲脂質(zhì)斑塊。 4miR-29a轉(zhuǎn)染促進(jìn)斑塊組織中平滑肌細(xì)胞的增殖 各組小鼠取胸腹主動(dòng)脈，經(jīng)HE染色后，光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，B6組和AD組小鼠血管內(nèi)膜光滑，彈力層完整，中膜未變化；AG組、AP組、AM組均見內(nèi)膜增厚，有較大斑塊形成；AG組和AP組沒有明顯區(qū)別；AM組可見增殖內(nèi)膜中新增血管平滑肌細(xì)胞數(shù)量明顯增多，提示，miR-29a轉(zhuǎn)染可能通過促進(jìn)平滑肌細(xì)胞的增殖而促進(jìn)斑塊的形成。 5miR-29a不影響斑塊組織中脂質(zhì)的沉積 油紅O染色顯示飼喂高脂飼料各組老鼠斑塊的泡沫細(xì)胞內(nèi)含有大量聚集的脂肪呈鮮紅色。AG組、AP組和AM組均可以看到紅染脂質(zhì)浸潤(rùn)、斑塊形成及血栓脫落；三組之間無明顯差異。提示，miR-29a轉(zhuǎn)染不影響斑塊組織的脂質(zhì)沉積。 6miR-29a促進(jìn)斑塊組織中膠原的合成 天狼猩紅（膠原）與油紅O（脂質(zhì)）復(fù)合染色可見，與B6組及AD組相比，AG組、AP組、AM組膠原合成明顯增多，其中以AM組增加最為明顯。上述結(jié)果提示miR-29a可以促進(jìn)斑塊組織內(nèi)膠原的合成。 7miR-29a不影響斑塊組織中巨噬細(xì)胞的侵潤(rùn) 我們用免疫組化檢測(cè)巨噬細(xì)胞標(biāo)志物F4/80在各組斑塊中的表達(dá)與分布，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在B6組和AD組血管壁中，偶見F4/80陽性的細(xì)胞；而AG組、AP組和AM組中，F(xiàn)4/80陽性細(xì)胞數(shù)及單細(xì)胞染色強(qiáng)度均較B6組和AD組明顯增高，而且主要分布在中膜層和新生內(nèi)膜層；AG組、AP組和AM組之間未見顯著差別。提示，動(dòng)脈斑塊形成伴隨炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，而過表達(dá)miR-29a并不促進(jìn)巨噬細(xì)胞的聚集和侵潤(rùn)。 8miR-29a促進(jìn)斑塊組織中平滑肌細(xì)胞的增殖 免疫組化的方法檢測(cè)了各組斑塊內(nèi)PCNA的表達(dá)，結(jié)果顯示，B6組和AD組血管壁中偶見PCNA陽性的細(xì)胞，AG、AP和AM組PCNA陽性細(xì)胞數(shù)及單細(xì)胞染色強(qiáng)度均較B6組和AD組增高，且主要分布在新生內(nèi)膜層，其中以AM組PCNA陽性細(xì)胞數(shù)最多，為對(duì)照組的5倍，說明，miR-29a可以促進(jìn)平滑肌細(xì)胞的增殖。 9miR-29a促進(jìn)斑塊組織中平滑肌細(xì)胞KLF5的表達(dá) 為了進(jìn)一步明確miR-29a促進(jìn)斑塊內(nèi)平滑肌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制，我們用免疫組化和RT-PCR的方法，檢測(cè)了斑塊組織內(nèi)KLF5表達(dá)及其分布，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，KLF5陽性的細(xì)胞在AM組較B6和AD組，增加了近5倍。提示，miR-29a促進(jìn)了斑塊內(nèi)血管平滑肌細(xì)胞的增殖的分子機(jī)制可能與上調(diào)增殖相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子KLF5的表達(dá)有關(guān)。 結(jié)果: 1動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型的復(fù)制及分組。 2miR-29a轉(zhuǎn)染不影響動(dòng)脈粥樣硬化小鼠的血脂水平。 3miR-29a對(duì)脂質(zhì)斑塊形成的影響。 4miR-29a轉(zhuǎn)染促進(jìn)斑塊組織中平滑肌細(xì)胞的增殖。 5miR-29a不影響斑塊組織中脂質(zhì)的沉積。 6miR-29a促進(jìn)斑塊組織中膠原的合成。 7miR-29a不影響斑塊組織中巨噬細(xì)胞的侵潤(rùn)。 8miR-29a促進(jìn)斑塊組織中平滑肌細(xì)胞的增殖。 9miR-29a促進(jìn)斑塊組織中平滑肌細(xì)胞KLF5的表達(dá)。 結(jié)論： 1miR-29a轉(zhuǎn)染可以促進(jìn)斑塊內(nèi)平滑肌細(xì)胞的增殖。 2miR-29a轉(zhuǎn)染不影響斑塊組織的脂質(zhì)沉積和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)。 3miR-29a可以促進(jìn)斑塊組織內(nèi)膠原的合成。 4miR-29a促進(jìn)了斑塊內(nèi)血管平滑肌細(xì)胞的增殖的分子機(jī)制可能與上調(diào)。增殖相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子KLF5的表達(dá)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：miR-29a 血管平滑肌細(xì)胞 增殖 動(dòng)脈粥樣硬化
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R543.5
【目錄】：

• 目錄3-4
• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 前言11
• 材料與方法11-19
• 結(jié)果19-22
• 附圖22-30
• 討論30-32
• 結(jié)論32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 綜述 miR-155 的研究進(jìn)展35-46
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 致謝46-47
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷47

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 余紹蘭;馬躍榮;;實(shí)驗(yàn)用小鼠尾靜脈穿刺的幾點(diǎn)體會(huì)[J];瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2007年04期

2 陳育堯;黃雪玲;;小鼠尾靜脈注射法[J];毒理學(xué)雜志;2008年04期

3 蔣蘭蘭,馮俊濤,羅百靈,顧其華;硝酸甘油干預(yù)法對(duì)小鼠尾靜脈穿刺效果的影響[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)工程;2004年04期

本文編號(hào)：921215