本文關(guān)鍵詞：過表達(dá)NRF-1基因?qū)θ毖鯎p傷大鼠心肌細(xì)胞H9c2作用的研究

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【摘要】：目的:為了研究心力衰竭的發(fā)病機(jī)制,建立了心肌細(xì)胞缺氧模型,探討過表達(dá)NRF-1基因是否能改善心肌缺氧造成的病理損傷,并為尋找一種新的心力衰竭治療的靶基因奠定基礎(chǔ)。方法:1.利用慢病毒載體建立NRF-1基因過表達(dá)細(xì)胞株和空病毒對照細(xì)胞株。2.兩組細(xì)胞通過氯化鈷誘導(dǎo)處理建立缺氧模型,并通過CCk-8法測定兩組細(xì)胞在缺氧狀態(tài)下細(xì)胞活力水平變化。3.檢測細(xì)胞缺氧下的各種指標(biāo)變化情況:⑴應(yīng)用線粒體特異性的熒光染料JC-1,利用流式細(xì)胞術(shù)測定各組細(xì)胞在缺氧處理后線粒體膜電位的變化。⑵利用Hoechst 33342法測定不同組細(xì)胞在缺氧狀態(tài)下細(xì)胞凋亡的比率。⑶應(yīng)用熒光定量PCR的方法檢測了NRF-1過表達(dá)細(xì)胞在缺氧和正常狀態(tài)下,下游相關(guān)的靶基因(mt TFA、mt SSB、ATPδ、Cyt c),共激活因子(NRF-2),和缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1α)的表達(dá)水平,以及細(xì)胞凋亡相關(guān)因子(Bax、Bcl-2、Caspase-3)表達(dá)水平。結(jié)果:1.構(gòu)建的過表達(dá)細(xì)胞株中NRF-1基因表達(dá)水平高于空病毒組,且經(jīng)過抗生素篩選獲得了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株NRF-H9c2和p Lenti-H9c2。2.成功建立氯化鈷誘導(dǎo)的細(xì)胞缺氧模型,兩組細(xì)胞經(jīng)過氯化鈷誘導(dǎo)后細(xì)胞活力水平明顯降低。3.正常狀態(tài)下過表達(dá)組細(xì)胞和空病毒對照組細(xì)胞的線粒體去極化水平相當(dāng),分別為2.54%和2.60%。當(dāng)用200μM氯化鈷處理兩組細(xì)胞24小時(shí)后,細(xì)胞去極化水平變?yōu)?.72%和9.6%。隨著濃度的進(jìn)一步增高到400μM時(shí),兩組細(xì)胞去極化水平分別提高到了9.34%和16.08%。提示過表達(dá)NRF-1基因可以降低氯化鈷造成的線粒體損傷。4.空病毒組細(xì)胞經(jīng)氯化鈷缺氧處理24h,細(xì)胞凋亡率為(15.9±3.4)%,與未經(jīng)氯化鈷處理組相比,凋亡比率有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。過表達(dá)NRF-1組的細(xì)胞用氯化鈷缺氧處理24h,其細(xì)胞凋亡率為(8.1±0.3)%,與空病毒處理組相比,凋亡率下降,其結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。5.過表達(dá)NRF-1基因提高了下游靶基因mt TFA基因和mt SSB基因的表達(dá)水平,同時(shí)也提高了其共轉(zhuǎn)錄激活因子NRF-2基因的水平,但是NRF-1基因并未帶來Cyt c基因和ATPδ基因的表達(dá)的升高。另外,NRF-1基因過表達(dá)提高了抗凋亡因子Bcl-2的表達(dá)且抑制了Bax的表達(dá),同時(shí)也降低了Caspase3的表達(dá)。結(jié)論:1.缺氧條件下,NRF-1基因的過表達(dá)有利于細(xì)胞的存活。2.NRF-1基因改善細(xì)胞缺氧狀態(tài),可能是通過提高細(xì)胞活力,降低細(xì)胞線粒體去極化水平,增高抗凋亡基因表達(dá)水平和抑制促凋亡基因的水平達(dá)到降低凋亡率的發(fā)揮作用。3.初步證實(shí)了NRF-1基因有望作為一種心力衰竭基因治療的候選分子。
【關(guān)鍵詞】：NRF-1基因 H9c2細(xì)胞 缺氧損傷
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R541.6
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 中英文縮略詞9-12
• 前言12-18
• 實(shí)驗(yàn)材料及方法18-32
• 結(jié)果32-43
• 討論43-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-56
• 綜述56-65
• 參考文獻(xiàn)60-65
• 致謝65-66
• 讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文66-67
• 個(gè)人簡歷67

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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本文編號：902661