本文關鍵詞：過表達NRF-1基因對缺氧損傷大鼠心肌細胞H9c2作用的研究

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【摘要】：目的:為了研究心力衰竭的發(fā)病機制,建立了心肌細胞缺氧模型,探討過表達NRF-1基因是否能改善心肌缺氧造成的病理損傷,并為尋找一種新的心力衰竭治療的靶基因奠定基礎。方法:1.利用慢病毒載體建立NRF-1基因過表達細胞株和空病毒對照細胞株。2.兩組細胞通過氯化鈷誘導處理建立缺氧模型,并通過CCk-8法測定兩組細胞在缺氧狀態(tài)下細胞活力水平變化。3.檢測細胞缺氧下的各種指標變化情況:⑴應用線粒體特異性的熒光染料JC-1,利用流式細胞術測定各組細胞在缺氧處理后線粒體膜電位的變化。⑵利用Hoechst 33342法測定不同組細胞在缺氧狀態(tài)下細胞凋亡的比率。⑶應用熒光定量PCR的方法檢測了NRF-1過表達細胞在缺氧和正常狀態(tài)下,下游相關的靶基因(mt TFA、mt SSB、ATPδ、Cyt c),共激活因子(NRF-2),和缺氧誘導因子(HIF-1α)的表達水平,以及細胞凋亡相關因子(Bax、Bcl-2、Caspase-3)表達水平。結果:1.構建的過表達細胞株中NRF-1基因表達水平高于空病毒組,且經過抗生素篩選獲得了穩(wěn)定轉染的細胞株NRF-H9c2和p Lenti-H9c2。2.成功建立氯化鈷誘導的細胞缺氧模型,兩組細胞經過氯化鈷誘導后細胞活力水平明顯降低。3.正常狀態(tài)下過表達組細胞和空病毒對照組細胞的線粒體去極化水平相當,分別為2.54%和2.60%。當用200μM氯化鈷處理兩組細胞24小時后,細胞去極化水平變?yōu)?.72%和9.6%。隨著濃度的進一步增高到400μM時,兩組細胞去極化水平分別提高到了9.34%和16.08%。提示過表達NRF-1基因可以降低氯化鈷造成的線粒體損傷。4.空病毒組細胞經氯化鈷缺氧處理24h,細胞凋亡率為(15.9±3.4)%,與未經氯化鈷處理組相比,凋亡比率有統(tǒng)計學意義(p0.01)。過表達NRF-1組的細胞用氯化鈷缺氧處理24h,其細胞凋亡率為(8.1±0.3)%,與空病毒處理組相比,凋亡率下降,其結果有統(tǒng)計學意義(p0.01)。5.過表達NRF-1基因提高了下游靶基因mt TFA基因和mt SSB基因的表達水平,同時也提高了其共轉錄激活因子NRF-2基因的水平,但是NRF-1基因并未帶來Cyt c基因和ATPδ基因的表達的升高。另外,NRF-1基因過表達提高了抗凋亡因子Bcl-2的表達且抑制了Bax的表達,同時也降低了Caspase3的表達。結論:1.缺氧條件下,NRF-1基因的過表達有利于細胞的存活。2.NRF-1基因改善細胞缺氧狀態(tài),可能是通過提高細胞活力,降低細胞線粒體去極化水平,增高抗凋亡基因表達水平和抑制促凋亡基因的水平達到降低凋亡率的發(fā)揮作用。3.初步證實了NRF-1基因有望作為一種心力衰竭基因治療的候選分子。
【關鍵詞】：NRF-1基因 H9c2細胞 缺氧損傷
【學位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R541.6
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 中英文縮略詞9-12
• 前言12-18
• 實驗材料及方法18-32
• 結果32-43
• 討論43-47
• 結論47-48
• 參考文獻48-56
• 綜述56-65
• 參考文獻60-65
• 致謝65-66
• 讀學位期間發(fā)表的學術論文66-67
• 個人簡歷67

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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本文編號：902661