本文關(guān)鍵詞：木犀草素-7-0-葡萄糖苷對心肌細胞損傷的保護作用及機制研究

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【摘要】：心血管疾病是嚴重威脅人類健康的重大疾病,具有高發(fā)病率、高致殘率和高死亡率等特點,發(fā)病年齡有年輕化的趨勢。心肌損傷類型包括局部缺血性損傷、缺血再灌注損傷、缺氧損傷、心肌肥大、缺氧／復氧損傷、氧化應激損傷、高磷血癥引起的心肌損傷、癌癥患者化療藥物引起的損傷等。其中,癌癥治療的化學療法會導致短期或者長期的心臟血管的并發(fā)癥。在癌癥患者化學療法誘導的心肌毒性的藥物中,蒽環(huán)類抗生素是主要的毒性藥物,由此限制了它的臨床應用。而心肌細胞的營養(yǎng)缺乏在臨床上也是普遍發(fā)生的,它介導多種心臟局部缺血病理過程,比如冠心病和心力衰竭等,在此過程中會發(fā)生自噬的激活,最終心肌細胞存活或者死亡。從天然植物中尋找新型、高效的具有心肌保護作用的藥物仍是藥學研究的重點之一。中藥作用范圍廣,毒副作用少,能有效地清除氧自由基抗脂質(zhì)過氧化作用和調(diào)節(jié)鈣離子穩(wěn)定,從而保護心肌細胞損傷。青蘭屬植物為多年生草本植物,廣泛分布于我國西北地區(qū)。其地上全草所含總黃酮靜脈滴注可以有效緩解犬急性心肌缺血,縮小急性心肌梗死面積,冠脈流量明顯增加。為尋找對心肌細胞有保護作用的有效成分,開發(fā)利用該植物資源,我院天然藥化教研室對該植物地上全草進行了系統(tǒng)的化學成分研究,通過對已提取的化合物進行的藥理活性研究,發(fā)現(xiàn)木犀草素-7-O-葡萄糖苷(Luteolin-7-O-Glucoside, LUTG)對心肌損傷有一定保護作用。前期研究表明LUTG預處理對多柔比星誘導的心臟毒性有顯著的保護作用,且對多柔比星的抗腫瘤活性沒有影響。但其具體的對心肌保護的作用機制尚不明確。本課題主要通過體外實驗,研究LUTG對多柔比星或饑餓誘導的心肌細胞損傷的保護作用,并探討其作用機制,為開發(fā)具有我國自主知識產(chǎn)權(quán)的心血管藥物奠定基礎(chǔ)。LUTG對多柔比星誘導的心肌細胞損傷的保護作用：細胞形態(tài)學檢測結(jié)果顯示,LUTG明顯抑制多柔比星誘導的H9c2心肌細胞損傷；DAPI及吖啶橙染色結(jié)果顯示,LUTG逆轉(zhuǎn)多柔比星誘導的H9c2心肌細胞的凋亡；JC-1熒光探針檢測結(jié)果顯示,LUTG逆轉(zhuǎn)多柔比星誘導的H9c2心肌細胞線粒體膜電勢的去極化,逆轉(zhuǎn)線粒體的損傷；Western blotting結(jié)果顯示,多柔比星處理組p-PTEN的表達明顯下降,p-Akt, p-ERK, p-mTOR,以及p-GSK-3β的表達明顯增加；而預處理LUTG (20μM),明顯上調(diào)p-PTEN的表達,明顯下調(diào)p-Akt, p-ERK, p-mTOR,以及p-GSK-3β的表達。LUTG對饑餓誘導的心肌細胞損傷的保護作用：MTT檢測結(jié)果顯示,心肌細胞的活力隨饑餓時間依賴性的降低,自噬抑制劑3-MA降低正常條件及饑餓條件下心肌細胞的活力。流式和Western blotting結(jié)果顯示,饑餓會抑制心肌細胞的周期和細胞周期蛋白cyclinD1和p21的表達,并抑制p-Akt, p-mTOR的表達,而上調(diào)p-ERK的表達。LUTG預處理后,MTT結(jié)果顯示,LUTG (5,10,20μM)明顯保護饑餓誘導的心肌細胞的損傷,而自噬抑制劑3-MA可阻斷LUTG對饑餓誘導的心肌細胞損傷的保護作用。Western blotting結(jié)果顯示,LUTG可增強饑餓條件下心肌細胞的自噬,并下調(diào)p-ERK的表達。結(jié)論：LUTG對多柔比星或饑餓誘導的心肌細胞損傷都有明顯的保護作用,可能通過調(diào)節(jié)Akt/mTOR及ERK信號通路而發(fā)揮心肌保護作用。
【關(guān)鍵詞】：木犀草素-7-O-葡萄糖苷 心肌保護 Akt ERK mTOR
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R54
【目錄】：

• 中文摘要10-12
• ABSTRACT12-14
• 符號說明14-16
• 前言16-23
• 1. 心血管疾病的現(xiàn)狀16-21
• 2. 心肌保護的研究進展21-23
• 第一部分 木犀草素-7-O-葡萄糖苷對多柔比星誘導的心肌細胞損傷的保護作用研究23-35
• 1. 實驗材料23-24
• 1.1 化合物23
• 1.2 細胞株23
• 1.3 試劑23-24
• 1.4 儀器設備24
• 2. 實驗方法24-27
• 2.1 細胞培養(yǎng)及凍存24-25
• 2.2 LUTG對多柔比星誘導的心肌細胞損傷的影響25
• 2.3 LUTG對心肌細胞凋亡的影響25-26
• 2.3.1 DAPI染色檢測細胞凋亡25-26
• 2.3.2 AO染色檢測細胞凋亡26
• 2.4 LUT對線粒體膜電位的影響26-27
• 2.5 Western blotting檢測LUTG對相關(guān)蛋白表達的影響27
• 2.6 數(shù)據(jù)分析27
• 3. 試驗結(jié)果27-32
• 3.1 LUTG對多柔比星誘導的H9c2心肌損傷的影響27-28
• 3.2 LUTG對多柔比星誘導的H9c2心肌細胞的凋亡的影響28-29
• 3.3 LUTG對多柔比星誘導的H9c2心肌細胞線粒體膜電勢的去極化的影響29-30
• 3.4 LUTG對PTEN,Akt和ERK蛋白表達的影響30-32
• 4. 討論32-35
• 第二部分 木犀草素-7-O-葡萄糖苷對饑餓誘導的心肌細胞損傷的保護作用研究35-46
• 1. 實驗材料35-36
• 1.1 化合物35
• 1.2 細胞株35
• 1.3 試劑35-36
• 1.4 儀器設備36
• 2. 實驗方法36-37
• 2.1 細胞培養(yǎng)及凍存36
• 2.2 細胞活力的影響36
• 2.3 細胞周期的影響36-37
• 2.4 LUTG對細胞內(nèi)酸性磷酸酶活性的影響37
• 2.5 Western blotting檢測相關(guān)蛋白表達的影響37
• 2.6 數(shù)據(jù)分析37
• 3. 試驗結(jié)果37-44
• 3.1 饑餓對心肌細胞的活力的影響37-38
• 3.2 饑餓對心肌細胞的周期的影響38-39
• 3.2.1 饑餓對心肌細胞周期的影響38
• 3.2.2 饑餓對心肌細胞周期蛋白表達的影響38-39
• 3.3 饑餓對心肌細胞自噬相關(guān)蛋白表達的影響39-40
• 3.4 自噬抑制劑3-MA對正常及饑餓條件下心肌細胞活力的影響40
• 3.5 饑餓對Akt及ERK蛋白表達的影響40-41
• 3.6 LUTG對饑餓誘導的心肌細胞的損傷的影響41-42
• 3.7 LUTG對心肌細胞自噬的影響42-43
• 3.8 LUTG對溶酶體降解程度的影響43-44
• 3.9 LUTG對Akt,mTOR和ERK蛋白表達的影響44
• 4. 討論44-46
• 總討論46-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻49-57
• 致謝57-58
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文58-59
• 附件59-69
• 學位論文評閱及答辯情況表69

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李茜;連春微;方利群;劉斌;楊波;;氙氣預處理對未成熟心肌缺血/再灌注損傷及氧化應激的影響[J];四川大學學報(醫(yī)學版);2014年05期

2 Thekkuttuparambil Ananthanarayanan Ajith;Thankamani Gopinathan Jayakumar;;Mitochondria-targeted agents: Future perspectives of mitochondrial pharmaceutics in cardiovascular diseases[J];World Journal of Cardiology;2014年10期

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本文編號：891698