本文關(guān)鍵詞：低氧預(yù)處理MSCs通過(guò)Pim-1高表達(dá)抑制細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的:研究在低氧預(yù)處理的不同培養(yǎng)條件及不同處理時(shí)間的大鼠骨髓MSCs的Pim-1、Akt以及與之相關(guān)的凋亡蛋白(Bcl-2)、抗凋亡蛋白(Caspase-3、Bax)的表達(dá)量,并比較它們之間的變化趨勢(shì)。研究低氧預(yù)處理后MSCs的抗凋亡能力、移植后細(xì)胞的存活率及對(duì)心功能的影響。初步探討經(jīng)低氧預(yù)處理的MSCs抗凋亡的機(jī)制。方法:將第三代的MSCs置入直徑6cm的培養(yǎng)皿中,實(shí)驗(yàn)共分為六組:正常培養(yǎng)細(xì)胞組(對(duì)照組);低氧條件下用正常培養(yǎng)液孵育細(xì)胞6h(HPC6h);低氧條件下用正常培養(yǎng)液孵育細(xì)胞12h(HPC12h+FBS);低氧條件下用不含F(xiàn)BS的培養(yǎng)液孵育細(xì)胞12h(HPC12h);低氧條件下用正常培養(yǎng)液孵育細(xì)胞24h(HPC24h+FBS);低氧條件下用不含F(xiàn)BS的培養(yǎng)液孵育細(xì)胞24h(HPC24h)。低氧預(yù)處理后通過(guò)q-PCR法檢測(cè)每組Pim-1、Bcl-2、Caspase-3及Bax的表達(dá)量;用Western Bolt法檢測(cè)低氧預(yù)處理組及Pim-1抑制劑組在不同低氧時(shí)間(6h,12h,24h)Pim-1,t-Akt及p-Akt的表達(dá)情況;用流式細(xì)胞分析法測(cè)定低氧預(yù)處理組、Pim-1抑制劑組及對(duì)照組的細(xì)胞凋亡情況;用Transwell法測(cè)定低氧預(yù)處理組、Pim-1抑制劑組及對(duì)照組的細(xì)胞遷移能力;用JC-1試劑盒檢測(cè)低氧預(yù)處理組、Pim-1抑制劑組及對(duì)照組的細(xì)胞的線粒體膜電位。挑選約300-350g的雌性SD大鼠24只隨機(jī)分為三組(對(duì)照組、低氧預(yù)處理組及Pim-1抑制劑組)行前降支結(jié)扎術(shù)。術(shù)后一周開(kāi)胸在結(jié)扎線周邊區(qū)域注射經(jīng)Di I染色后的各組干細(xì)胞。細(xì)胞移植后一周每組隨機(jī)取三只處死,取出心臟行石蠟切片,計(jì)數(shù)在心梗區(qū)域存活的干細(xì)胞,并比較各組干細(xì)胞的存活情況。行心梗模型的SD大鼠,在術(shù)前、術(shù)后三天、細(xì)胞移植后一周以及移植后一個(gè)月(每組剩余五只)行超聲心動(dòng)圖檢測(cè),評(píng)估大鼠的心功能情況。結(jié)果:q-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示在無(wú)血清的培養(yǎng)液條件下低氧預(yù)處理12h,Pim-1蛋白激酶的表達(dá)量達(dá)到峰值,與其他各組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)�？沟蛲鲆蜃覤cl-2的變化與Pim-1的改變同步。凋亡因子Caspase-3及Bax的變化與Pim-1的改變相反(P0.05)。Western Bolt檢測(cè)結(jié)果顯示,t-Akt的濃度和低氧預(yù)處理的時(shí)間及培養(yǎng)液條件無(wú)關(guān),t-Akt的濃度保持恒定,而p-Akt的濃度隨著低氧預(yù)處理的時(shí)間及培養(yǎng)液的條件不同有所變化。Pim-1在低氧預(yù)處理12h時(shí)的濃度最高,在相同處理時(shí)間下,加入抑制劑組均較無(wú)抑制劑組的濃度低。而且p-Akt的表達(dá)與Pim-1的表達(dá)變化趨勢(shì)一致,Pim-1抑制劑亦可以部分抑制p-Akt(P0.05)。流式細(xì)胞分析細(xì)胞凋亡情況及Transwell法檢測(cè)細(xì)胞遷移能力的實(shí)驗(yàn)結(jié)果均顯示低氧預(yù)處理組的抗凋亡能力及遷移能力最強(qiáng)(P0.05)。JC-1試劑盒檢測(cè)結(jié)果顯示低氧預(yù)處理組細(xì)胞線粒體膜電位高于對(duì)照組及Pim-1抑制劑組。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示移植后一周低氧預(yù)處理組的干細(xì)胞存活率最高(P0.05)。心超檢查結(jié)果顯示術(shù)前,術(shù)后三天及細(xì)胞移植后一周大鼠心功能無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),細(xì)胞移植后一個(gè)月低氧預(yù)處理組的心功能(LVEF)較其他兩組有明顯提升,低氧預(yù)處理組和其他兩組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:低氧預(yù)處理MSCs通過(guò)激活A(yù)kt及上調(diào)Pim-1表達(dá)抑制細(xì)胞凋亡、增強(qiáng)細(xì)胞遷移能力;低氧預(yù)處理通過(guò)誘導(dǎo)Pim-1高表達(dá)減緩MSCs線粒體膜電位的下降;低氧預(yù)處理通過(guò)誘導(dǎo)Pim-1高表達(dá)增加MSCs細(xì)胞存活率,增加心肌缺血的治療效果,增強(qiáng)心功能。
【關(guān)鍵詞】：低氧預(yù)處理 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞遷移 心肌梗死
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R54
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-11
• 材料和方法11-24
• 結(jié)果24-36
• 討論36-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 綜述46-55
• 參考文獻(xiàn)52-55
• 中英文對(duì)照縮略詞表55-56
• 攻讀學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的論文56-57
• 致謝57-59

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 郭靜萱,張萍;心臟干細(xì)胞治療的選擇和存在的問(wèn)題[J];中國(guó)介入心臟病學(xué)雜志;2004年05期

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本文編號(hào)：852992