本文關(guān)鍵詞：低壓低氧時(shí)細(xì)胞因子的變化特點(diǎn)及其與心肌纖維化的關(guān)系

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【摘要】：心肌纖維化是以過度的細(xì)胞外基質(zhì)沉積為特征,對(duì)組織進(jìn)行纖維性修復(fù),持續(xù)的心肌纖維化可導(dǎo)致心功能紊亂,是許多慢性心臟疾病的晚期共同病理過程。我國幅員遼闊的高原地區(qū)居住人群,常因長期吸入氣體低壓低氧導(dǎo)致肺動(dòng)脈高壓,引起右心室肥厚、心肌纖維化,并伴有炎癥反應(yīng)。慢性低壓低氧引起的肺動(dòng)脈壓增高,心肌嚴(yán)重纖維化,使心肌組織的氧供需矛盾更加突出。近年研究發(fā)現(xiàn),纖維細(xì)胞在組織纖維化發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。組織纖維化過程中有多種細(xì)胞因子的參與,轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β)以及它下游信號(hào)分子結(jié)締組織生長因子(CTGF)被認(rèn)為是兩個(gè)重要的促纖維化細(xì)胞因子。同時(shí),炎癥反應(yīng)所釋放的膜聯(lián)蛋白A1(AnxA1)、凱薩琳相關(guān)抗菌肽(CRAMP),在組織纖維化過程中發(fā)揮不同的作用。但是在低壓低氧過程中,心肌組織中纖維細(xì)胞的變化特點(diǎn)及其作用,TGF-β、CTGF、AnxA1、CRAMP的變化特點(diǎn)及其與心肌纖維化的關(guān)系,目前尚未見報(bào)道。目的:探討低壓低氧時(shí)纖維細(xì)胞以及細(xì)胞因子(tgf-β、ctgf、anxa1、cramp)的變化特點(diǎn)及其與心肌纖維化的關(guān)系。方法:將50只雄性sd大鼠隨機(jī)分為常壓常氧飼養(yǎng)組(對(duì)照組)與低壓低氧3、7、14和28d飼養(yǎng)組,每組10只大鼠。低壓低氧各組大鼠置于模擬海拔6000m的低壓艙內(nèi)飼養(yǎng)。于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)通過心導(dǎo)管檢測(cè)大鼠平均肺動(dòng)脈壓(mpap)、右室收縮壓(rvsp)、心肌收縮力指數(shù)(dp/dtmax);隨后分別分離其大鼠右心室、左心室及室間隔,并檢測(cè)其質(zhì)量,然后計(jì)算右心室肥厚指數(shù)(rvhi);通過he染色觀察大鼠右心室壁心肌結(jié)構(gòu)變化;通過masson染色觀察大鼠右心室壁組織膠原含量變化;用免疫熒光化學(xué)染色法觀察右心室心肌組織中cd45與Ⅰ型前膠原雙陽性的纖維細(xì)胞變化特點(diǎn);通過熒光定量pcr法(rt2-pcr)檢測(cè)右心室心肌組織中col-Ⅰ、fpr1、tgf-β和ctgf的mrna水平,并分析同組內(nèi)tgf-β、ctgfmrna水平與col-Ⅰmrna水平、右心室肥厚指數(shù)的相關(guān)性;通過免疫印跡(wb)法分別檢測(cè)右心室心肌組織中col-Ⅰ、anxa1、cramp、fpr、tgf-β和ctgf蛋白表達(dá)水平。h9c2心肌細(xì)胞置于常壓常氧培養(yǎng)(對(duì)照組)與常壓缺氧(1%,o2)培養(yǎng)6、12、24h,采用rt2-pcr檢測(cè)心肌細(xì)胞內(nèi)anxa1、tgf-β和ctgf的mrna表達(dá)水平。結(jié)果:1.低壓低氧對(duì)心臟血流動(dòng)力學(xué)特性的影響低壓低氧組隨時(shí)間延長,mpap逐漸增加,低壓低氧各組分別與對(duì)照組相比,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);與對(duì)照組相比,對(duì)低壓低氧時(shí)間延長,rvsp逐漸增加,在低壓低氧暴露3、7、14和28d組,顯著增加,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01);+dp/dtmax在低壓低氧14、28d增加顯著,與對(duì)照組相比,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。2.低壓低氧條件下右心室心肌組織結(jié)構(gòu)改變與對(duì)照組相比,隨低壓低氧時(shí)間延長,rvhi增加,在低壓低氧暴露7、14和28d組顯著增加,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);通過he染色觀察到,隨低壓低氧飼養(yǎng)時(shí)間延長,各組大鼠右室壁可見心肌細(xì)胞逐漸增粗,細(xì)胞排列較紊亂,尤其14d和28d組,細(xì)胞間纖維明顯增多。3.masson染色觀察大鼠右心室中膠原含量變化masson染色結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,低壓低氧各組心肌組織內(nèi)膠原沉積明顯增多,隨時(shí)間增加而增加,低壓低氧3d組即可見心肌組織內(nèi)膠原沉積增多,低壓低氧28d組增加最顯著。與對(duì)照組相比,col-Ⅰ蛋白水平隨低壓低氧時(shí)間延長表達(dá)量增加,且低壓低氧7、14、28d組顯著升高,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);col-Ⅰmrna水平隨低壓低氧時(shí)間延長表達(dá)量增加,且低壓低氧3、7、14、28d組顯著升高,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。4.免疫熒光化學(xué)染色觀察大鼠右心室中纖維細(xì)胞變化特點(diǎn)免疫熒光化學(xué)染色結(jié)果顯示,在常氧組心肌組織中未發(fā)現(xiàn)雙重染色的纖維細(xì)胞,在低壓低氧3d組心肌組織中雙重染色的纖維細(xì)胞明顯增多,在低壓低氧7、14和28d組未發(fā)現(xiàn)雙重染色的纖維細(xì)胞。5.低壓低氧條件下大鼠右心室心肌中細(xì)胞因子表達(dá)變化與對(duì)照組相比,低壓低氧3d組右心室心肌組織中tgf-β、ctgfmrna與蛋白表達(dá)量均顯著升高(p0.05),低壓低氧28d組右心室心肌組織中tgf-β、ctgf蛋白水平均顯著升高(p0.05),而低壓低氧7、14d組兩細(xì)胞因子表達(dá)量與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);與對(duì)照組相比,低壓低氧3、28d組右心室心肌組織中,fpr1mrna與fpr蛋白表達(dá)量均顯著升高(p0.05),而低壓低氧7、14d組表達(dá)量與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);與對(duì)照組相比,低壓低氧3、7和14danxa1蛋白含量均增加,且3d增加最顯著(p0.05),而低壓低氧28d表達(dá)量與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);與對(duì)照組相比,低壓低氧cramp蛋白含量隨低壓低氧時(shí)間增加,且7、14和28d組表達(dá)量顯著升高,與對(duì)照組相比其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。6.常壓缺氧對(duì)培養(yǎng)的h9c2心肌細(xì)胞中細(xì)胞因子表達(dá)的影響與對(duì)照組相比,tgf-β的mrna水平隨缺氧時(shí)間延長先增加后降低,且6h組增加最顯著,而缺氧6、12h組表達(dá)量與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);與對(duì)照組相比,ctgfmrna水平隨常壓缺氧時(shí)間延長而增加,且12、24h組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);與對(duì)照組相比,anxa1的mrna水平隨缺氧時(shí)間延長先增加后降低,缺氧6h組其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。7.tgf-β、ctgf與心肌重塑、心肌纖維化之間的相關(guān)關(guān)系對(duì)照組與低壓低氧0、3、7和14d組,col-Ⅰ與rvhi水平呈顯著正相關(guān)(p0.05),說明col-Ⅰ表達(dá)水平與右室肥大相關(guān)。以col-Ⅰ反映心肌纖維化程度,分析兩因子與纖維化的相關(guān)關(guān)系,發(fā)現(xiàn)低壓低氧0、3、7和14d組tgf-β與其呈顯著正相關(guān)(p0.05);低壓低氧3、7d組ctgf與其呈顯著正相關(guān)(p0.05)。分析與rvhi的相關(guān)性時(shí),發(fā)現(xiàn)低壓低氧0、3、7、14組tgf-β與其呈顯著正相關(guān)(p0.05),低壓低氧3、7、14和28d組與ctgf與其呈顯著正相關(guān)(p0.05)。結(jié)論:低壓低氧早期即可引起大鼠明顯的心肌纖維化以及纖維細(xì)胞的浸潤;隨時(shí)間延長,心肌纖維化加劇;低壓低氧早期促纖維化因子tgf-β與ctgf表達(dá)明顯上調(diào),隨后回降,ctgf于28天再次增加,anxa1在低壓低氧早期顯著增加,隨后回降;cramp隨著低壓低氧時(shí)間延長而逐漸增加。低壓低氧時(shí)心肌纖維化與TGF-β、CTGF有關(guān)。纖維細(xì)胞、TGF-β、CTGF有望成為缺氧心臟病診斷指標(biāo)以及防治的靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：低壓低氧 心肌纖維化 心肌細(xì)胞 纖維細(xì)胞 細(xì)胞因子
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R542.23
【目錄】：

• 符號(hào)說明5-7
• 摘要7-13
• ABSTRACT13-19
• 前言19-22
• 第一部分 低壓低氧引起右心室心肌纖維化以及纖維細(xì)胞浸潤的特點(diǎn)22-46
• 前言22
• 1 材料方法22-35
• 1.1 主要儀器22-24
• 1.2 主要試劑24-26
• 1.3 試劑的配制26-27
• 1.4 實(shí)驗(yàn)方法27-35
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-43
• 2.1 低壓低氧對(duì)肺動(dòng)脈壓的影響35
• 2.2 低壓低氧對(duì)心功能的影響35-36
• 2.3 低壓低氧對(duì)心臟組織結(jié)構(gòu)的影響36-38
• 2.4 低壓低氧時(shí)心肌纖維化的特點(diǎn)38-41
• 2.5 低壓低氧對(duì)心肌中纖維細(xì)胞的影響41-43
• 3 討論43-46
• 第二部分 低壓低氧對(duì)心肌CTGF和TGF-β 的影響及其與心肌纖維化的關(guān)系46-60
• 前言46-47
• 1 材料方法47-52
• 1.1 主要儀器47
• 1.2 主要試劑47-48
• 1.3 試劑的配制48
• 1.4 實(shí)驗(yàn)方法48-52
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果52-57
• 2.1 低壓低氧對(duì)右心室心肌組織中TGF-β 表達(dá)的影響52-54
• 2.2 低壓低氧對(duì)右心室心肌組織中CTGF表達(dá)的影響54-55
• 2.3 低壓低氧時(shí)TGF-β、CTGF與RVHI、COL-Ⅰ之間的相關(guān)關(guān)系55-56
• 2.4 常壓低氧對(duì)培養(yǎng)心肌細(xì)胞分泌TGF-β 及CTGF的影響56-57
• 3 討論57-60
• 第三部分 低壓低氧對(duì)心肌中甲酰肽受體激動(dòng)劑的影響及其與心肌纖維化的關(guān)系60-71
• 前言60-61
• 1 材料方法61-65
• 1.1 主要儀器61
• 1.2 主要試劑61
• 1.3 試劑的配制61
• 1.4 實(shí)驗(yàn)方法61-65
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果65-68
• 2.1 低壓低氧時(shí)右心室心肌組織中CRAMP蛋白表達(dá)變化65
• 2.2 低壓低氧時(shí)右心室心肌組織中Anx A1蛋白表達(dá)變化65-66
• 2.3 低壓低氧時(shí)右心室心肌組織中FPR表達(dá)變化66-67
• 2.4 常壓缺氧時(shí)心肌細(xì)胞分泌Anx A1的m RNA表達(dá)變化67-68
• 3 討論68-71
• 全文結(jié)論71-72
• 參考文獻(xiàn)72-86
• 文獻(xiàn)綜述86-96
• 參考文獻(xiàn)92-96
• 致謝96-97
• 碩士期間發(fā)表文章97

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本文編號(hào)：850265