本文關(guān)鍵詞：螺旋藻激酶對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷保護(hù)作用的研究

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【摘要】：目的：采用過(guò)氧化氫(H202)誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激的方法,建立人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECS)氧化損傷模型,探討螺旋藻激酶(SPK)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)氧化還原體系的影響,及其對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的單層細(xì)胞通透性和細(xì)胞粘附性的影響,推測(cè)螺旋藻激酶與動(dòng)脈粥樣硬化之間的關(guān)系。方法：1.體外培養(yǎng)HUVECS,檢測(cè)不同濃度H202和SPK對(duì)HUVECS細(xì)胞活力的影響,確定過(guò)氧化損傷模型所需H202濃度和藥物干預(yù)所使用的SPK濃度；2.建立內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷模型并隨機(jī)分組,按添加藥物不同設(shè)計(jì)為6組：N,正常組；D,損傷組(2mmol.L-1H2O2)；E,陽(yáng)性組(10μg.ml-1VitE+2mmol.L-1H2O2);L,低劑量組(1mg.ml-1SPK+2mmol.L-1H2O2);M,中劑量組(2mg.ml-1 SPK+2mmol.L-1H2O2);H,高劑量組(3mg.ml-1SPK+2mmol.L-1H2O2)。3.測(cè)定單層細(xì)胞透過(guò)率T,得出H202及SPK對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞活力的影響及其對(duì)單層細(xì)胞通透性的影響,收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液,超聲破裂法獲得細(xì)胞裂解液,用各種呈色反應(yīng)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中一氧化氮體系里NO、NOS的含量,氧化還原體系中氧化還原酶SOD.GSH-PX的活性,細(xì)胞內(nèi)MDA、ATP含量,細(xì)胞外LDH滲出量,酶聯(lián)免疫法測(cè)各組細(xì)胞培養(yǎng)液中ICAM-1的含量。結(jié)果：1、不同濃度H202對(duì)HUVECS活力的影響與正常組相比,H202濃度為1mmol/L時(shí),對(duì)細(xì)胞活力的影響微弱并且不隨時(shí)間變化(P0.05)；H202濃度為2mmol/L時(shí),培養(yǎng)4小時(shí)后細(xì)胞抑制率超過(guò)40%,(P0.05)隨著時(shí)間延長(zhǎng)抑制率增強(qiáng),呈不可逆的損傷；H202濃度增大到4mmol/L.8mmol/L后,在最初的4小時(shí)抑制率即可達(dá)到60%以上(P0.01),可見(jiàn)細(xì)胞成片脫落,細(xì)胞破碎漂浮在培養(yǎng)基表面。2、SPK對(duì)HUVECS活性的影響隨著SPK濃度增大,其對(duì)細(xì)胞活力的影響從促進(jìn)轉(zhuǎn)為抑制。與正常組對(duì)比,在SPK濃度達(dá)到2mg/ml時(shí)細(xì)胞活力最大；SPK濃度≥6mg/ml后,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)呈抑制作用。對(duì)比損傷組,中劑量組和高劑量組細(xì)胞活力明顯上升。3、SPK對(duì)氧化損傷內(nèi)皮細(xì)胞的單層細(xì)胞通透性的影響與正常組相比,損傷組細(xì)胞的單層細(xì)胞通過(guò)率升高了6倍以上,(362.49 ±26.94 VS 54.81±12.46);而與損傷組比較,陽(yáng)性組則使通透率減弱了60%以上(133.52±36.61 VS 362.49±26.94),SPK各濃度組對(duì)氧化造成的細(xì)胞單層通透性增強(qiáng)也表現(xiàn)出明顯的抑制作用,且這種作用隨藥物濃度的增大而增強(qiáng),(275.13±20.46 VS 206.16±33.53 VS 118.41±24.16).4、SPK對(duì)氧化損傷內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液中NO、NOS含量的影響與正常組相比較,H202氧化損傷使內(nèi)皮細(xì)胞分泌NO量明顯降低,(P0.05)；與損傷組相比較,除低劑量組外,Vitamin E和SPK均能使NO分泌量增加,且Vitamin E使NO升高的作用更明顯。在NOS含量方面,各組間兩兩比較的數(shù)據(jù)差異均無(wú)顯著性,與正常組相比,損傷組的細(xì)胞培養(yǎng)液中NOS含量稍有升高(P0.05)；與損傷組對(duì)比,低中高濃度組細(xì)胞培養(yǎng)液中NOS含量呈下降趨勢(shì)(P0.05)。5、SPK對(duì)氧化損傷內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液中SOD、GSH-PX活性,細(xì)胞內(nèi)MDA含量的影響與正常組比較,損傷組中SOD、GSH-PH兩種氧化還原酶的活性均明顯下降,脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA含量明顯上升；與損傷組比較,陽(yáng)性組及SPK各濃度組對(duì)SOD及GSH-PX的活性均明顯上調(diào),而MDA含量則明顯下降；此種改變?cè)赟OD/MDA的比值上體現(xiàn)的更加明顯。6、SPK對(duì)氧化損傷內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)ATP含量及LDH滲出量的影響與正常組細(xì)胞相比,損傷組細(xì)胞的ATP含量明顯下降(P0.05),而細(xì)胞LDH滲出量明顯增加；對(duì)比損傷組,陽(yáng)性組和SPK各濃度組的ATP含量均明顯上升,細(xì)胞LDH滲出量均降低,且此趨勢(shì)與SPK的濃度呈劑量效應(yīng)關(guān)系。7、SPK對(duì)氧化損傷內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)上清液中ICAM-1含量的影響與正常組相比,H2O2氧化刺激可使內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1分泌量增多,達(dá)正常細(xì)胞的2.3倍,陽(yáng)性對(duì)照組和SPK組與H2O2損傷組比較,ICAM-1含量明顯下降,且高濃度的SPK效果強(qiáng)于VitE。結(jié)論：SPK可以拮抗H2O2誘發(fā)的HUVECS的氧化損傷,提高HUVEC細(xì)胞活力,對(duì)HUVEC具有一定的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)證明SPK可提高內(nèi)皮細(xì)胞抗氧化體系中SOD、GSH-PX的活力,增加NO含量,減少H2O2刺激下HUVECS分泌的MDA,降低單層細(xì)胞通透性,減少細(xì)胞外溢出的LDH和細(xì)胞分泌的ICAM-1,最終達(dá)到提高內(nèi)皮細(xì)胞抗氧化能力的效果,對(duì)抗氧化應(yīng)激造成的細(xì)胞損傷,推測(cè)其可能具有預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化形成的作用。
【關(guān)鍵詞】：人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECS) 螺旋藻激酶(SPK) 氧化損傷(Oxidative damage) 動(dòng)脈粥樣硬化(AS)
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R54
【目錄】：

• 個(gè)人簡(jiǎn)歷3-5
• 主要英漢縮略對(duì)照表5-7
• 摘要7-11
• ABSTRACT11-15
• 前言15-17
• 材料與方法17-27
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-42
• 討論42-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 綜述55-70
• 參考文獻(xiàn)65-70
• 致謝70
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的文章70-71
• 附件71-73

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 高瑩;扇貝裙邊糖胺聚糖對(duì)過(guò)氧化氫損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用的研究[D];青島大學(xué);2006年

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本文編號(hào)：733422