本文關(guān)鍵詞：螺旋藻激酶對血管內(nèi)皮細胞氧化損傷保護作用的研究

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【摘要】：目的：采用過氧化氫(H202)誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞發(fā)生氧化應(yīng)激的方法,建立人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECS)氧化損傷模型,探討螺旋藻激酶(SPK)對內(nèi)皮細胞內(nèi)氧化還原體系的影響,及其對內(nèi)皮細胞的單層細胞通透性和細胞粘附性的影響,推測螺旋藻激酶與動脈粥樣硬化之間的關(guān)系。方法：1.體外培養(yǎng)HUVECS,檢測不同濃度H202和SPK對HUVECS細胞活力的影響,確定過氧化損傷模型所需H202濃度和藥物干預(yù)所使用的SPK濃度；2.建立內(nèi)皮細胞氧化損傷模型并隨機分組,按添加藥物不同設(shè)計為6組：N,正常組；D,損傷組(2mmol.L-1H2O2)；E,陽性組(10μg.ml-1VitE+2mmol.L-1H2O2);L,低劑量組(1mg.ml-1SPK+2mmol.L-1H2O2);M,中劑量組(2mg.ml-1 SPK+2mmol.L-1H2O2);H,高劑量組(3mg.ml-1SPK+2mmol.L-1H2O2)。3.測定單層細胞透過率T,得出H202及SPK對內(nèi)皮細胞活力的影響及其對單層細胞通透性的影響,收集細胞培養(yǎng)上清液,超聲破裂法獲得細胞裂解液,用各種呈色反應(yīng)檢測細胞培養(yǎng)液中一氧化氮體系里NO、NOS的含量,氧化還原體系中氧化還原酶SOD.GSH-PX的活性,細胞內(nèi)MDA、ATP含量,細胞外LDH滲出量,酶聯(lián)免疫法測各組細胞培養(yǎng)液中ICAM-1的含量。結(jié)果：1、不同濃度H202對HUVECS活力的影響與正常組相比,H202濃度為1mmol/L時,對細胞活力的影響微弱并且不隨時間變化(P0.05)；H202濃度為2mmol/L時,培養(yǎng)4小時后細胞抑制率超過40%,(P0.05)隨著時間延長抑制率增強,呈不可逆的損傷；H202濃度增大到4mmol/L.8mmol/L后,在最初的4小時抑制率即可達到60%以上(P0.01),可見細胞成片脫落,細胞破碎漂浮在培養(yǎng)基表面。2、SPK對HUVECS活性的影響隨著SPK濃度增大,其對細胞活力的影響從促進轉(zhuǎn)為抑制。與正常組對比,在SPK濃度達到2mg/ml時細胞活力最大；SPK濃度≥6mg/ml后,對細胞生長呈抑制作用。對比損傷組,中劑量組和高劑量組細胞活力明顯上升。3、SPK對氧化損傷內(nèi)皮細胞的單層細胞通透性的影響與正常組相比,損傷組細胞的單層細胞通過率升高了6倍以上,(362.49 ±26.94 VS 54.81±12.46);而與損傷組比較,陽性組則使通透率減弱了60%以上(133.52±36.61 VS 362.49±26.94),SPK各濃度組對氧化造成的細胞單層通透性增強也表現(xiàn)出明顯的抑制作用,且這種作用隨藥物濃度的增大而增強,(275.13±20.46 VS 206.16±33.53 VS 118.41±24.16).4、SPK對氧化損傷內(nèi)皮細胞培養(yǎng)液中NO、NOS含量的影響與正常組相比較,H202氧化損傷使內(nèi)皮細胞分泌NO量明顯降低,(P0.05)；與損傷組相比較,除低劑量組外,Vitamin E和SPK均能使NO分泌量增加,且Vitamin E使NO升高的作用更明顯。在NOS含量方面,各組間兩兩比較的數(shù)據(jù)差異均無顯著性,與正常組相比,損傷組的細胞培養(yǎng)液中NOS含量稍有升高(P0.05)；與損傷組對比,低中高濃度組細胞培養(yǎng)液中NOS含量呈下降趨勢(P0.05)。5、SPK對氧化損傷內(nèi)皮細胞培養(yǎng)液中SOD、GSH-PX活性,細胞內(nèi)MDA含量的影響與正常組比較,損傷組中SOD、GSH-PH兩種氧化還原酶的活性均明顯下降,脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量明顯上升；與損傷組比較,陽性組及SPK各濃度組對SOD及GSH-PX的活性均明顯上調(diào),而MDA含量則明顯下降；此種改變在SOD/MDA的比值上體現(xiàn)的更加明顯。6、SPK對氧化損傷內(nèi)皮細胞內(nèi)ATP含量及LDH滲出量的影響與正常組細胞相比,損傷組細胞的ATP含量明顯下降(P0.05),而細胞LDH滲出量明顯增加；對比損傷組,陽性組和SPK各濃度組的ATP含量均明顯上升,細胞LDH滲出量均降低,且此趨勢與SPK的濃度呈劑量效應(yīng)關(guān)系。7、SPK對氧化損傷內(nèi)皮細胞培養(yǎng)上清液中ICAM-1含量的影響與正常組相比,H2O2氧化刺激可使內(nèi)皮細胞ICAM-1分泌量增多,達正常細胞的2.3倍,陽性對照組和SPK組與H2O2損傷組比較,ICAM-1含量明顯下降,且高濃度的SPK效果強于VitE。結(jié)論：SPK可以拮抗H2O2誘發(fā)的HUVECS的氧化損傷,提高HUVEC細胞活力,對HUVEC具有一定的保護作用。實驗證明SPK可提高內(nèi)皮細胞抗氧化體系中SOD、GSH-PX的活力,增加NO含量,減少H2O2刺激下HUVECS分泌的MDA,降低單層細胞通透性,減少細胞外溢出的LDH和細胞分泌的ICAM-1,最終達到提高內(nèi)皮細胞抗氧化能力的效果,對抗氧化應(yīng)激造成的細胞損傷,推測其可能具有預(yù)防動脈粥樣硬化形成的作用。
【關(guān)鍵詞】：人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECS) 螺旋藻激酶(SPK) 氧化損傷(Oxidative damage) 動脈粥樣硬化(AS)
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R54
【目錄】：

• 個人簡歷3-5
• 主要英漢縮略對照表5-7
• 摘要7-11
• ABSTRACT11-15
• 前言15-17
• 材料與方法17-27
• 實驗結(jié)果27-42
• 討論42-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻51-55
• 綜述55-70
• 參考文獻65-70
• 致謝70
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的文章70-71
• 附件71-73

【參考文獻】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 高瑩;扇貝裙邊糖胺聚糖對過氧化氫損傷的血管內(nèi)皮細胞保護作用的研究[D];青島大學(xué);2006年

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本文編號：733422