本文關(guān)鍵詞：異甘草素對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠腦基底動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞大電導(dǎo)鈣激活鉀通道的作用

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【摘要】：目的:研究異甘草素(Isoliquiritigenin,ISL)對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠(Spontaneously hypertension rats,SHR)腦基底動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞(Vascular smooth muscle cell,VSMC)大電導(dǎo)鈣激活鉀通道(Large conductance Ca-activated K 2++channel,BKCa)的調(diào)節(jié)作用。方法:在使用異甘草素干預(yù)處理前后,用尾動(dòng)脈測(cè)壓儀觀(guān)察SHR血壓變化;依次用10-5mol/L苯腎上腺素(phenylephrine,PE)、10-5 mol/L苯腎上腺素和10-4 mol/L異甘草素、10-5mol/L苯腎上腺素分別對(duì)SHR腦基底動(dòng)脈灌流后,腦基底動(dòng)脈的直徑應(yīng)用壓力型小動(dòng)脈儀進(jìn)行測(cè)量;用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)研究SHR腦基底動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(VSMC)BKCa通道電流的變化;用ELISA技術(shù)觀(guān)察SHR腦基底動(dòng)脈內(nèi)c GMP水平變化。結(jié)果:(1)ISL干預(yù)前SHR血壓是(218.3±1.6)mm Hg,與WKY血壓(119±2.1)mm Hg相比,兩者具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.01,n=6)。與ISL干預(yù)前相比,ISL灌胃(12mg/kg.d)14天后SHR血壓降至(119.2±1.9)mm Hg(p0.01,n=6),但與WKY血壓沒(méi)有明顯差異;(2)含有PE(10-5 mol/L)的PSS液體在壓力型小動(dòng)脈測(cè)量?jī)x水浴槽內(nèi)持續(xù)對(duì)血管段進(jìn)行灌流,待血管段收縮狀態(tài)穩(wěn)定后,再用含有ISL(10-4 mol/L)和PE(10-5 mol/L)的PSS液體持續(xù)灌流沖洗,血管舒張達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)后,給予含PE(10-5 mol/L)的PSS液體再次持續(xù)灌流沖洗,記錄血管直徑分別為:(235.6±26)μm、(309.2±25)μm和(241.1±27)μm,提示ISL舒張SHR腦基底動(dòng)脈(n=6,p0.01);(3)單個(gè)腦基底動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞鉗制電壓在-40 m V,外向電流在刺激電壓-40~-20 m V區(qū)間內(nèi)無(wú)顯著變化,10-4 mol/L ISL在0-60 m V區(qū)間內(nèi)可以呈電壓依賴(lài)性增強(qiáng)腦基底動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞外向電流(n=6,p0.05);(4)在0、10-7、10-6、10-5、10-4和3×10-4 mol/L異甘草素作用下,平滑肌細(xì)胞+60m V時(shí)的外向電流分別是(144±25)p A、(156±24)p A、(173±24)p A、(211±21)p A、(252±21)p A和(262±20)p A。除10-7 mol/L異甘草素組和對(duì)照組沒(méi)有明顯差異外,其余各組均呈濃度依賴(lài)性增強(qiáng)外向電流,提示ISL呈濃度依賴(lài)性增強(qiáng)腦基底動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞外向電流(n=6,p0.05),且增強(qiáng)平滑肌細(xì)胞外向電流的EC50為9.5μmol/L;(5)異甘草素干預(yù)后的SHR平滑肌細(xì)胞外向電流(+60m V)從(212.1±32)p A增加到(283.2±28)p A(p0.01,n=6),用10-3 mol/L四乙胺(TEA,BKCa通道阻斷劑)灌流3min后,SHR平滑肌細(xì)胞在+60m V時(shí)的外向電流減小到(143.4±21)p A(p0.05,n=6)。該結(jié)果提示異甘草素增強(qiáng)的平滑肌細(xì)胞外向電流由BKCa通道介導(dǎo);(6)預(yù)灌流10-5 mol/L亞甲藍(lán)(MB,可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶阻斷劑)3min后,異甘草素增強(qiáng)的平滑肌細(xì)胞外向電流(+60m V)從(324.3±74)p A減小到(171.9±42)p A(p0.05,n=6),與對(duì)照組(163.9±43)p A相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。該結(jié)果提示異甘草素增強(qiáng)的外向電流主要由可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶(Soluble Guanylyl Cyclase,s GC)介導(dǎo);(7)在正常電極內(nèi)液下,給予10-4 mol/L ISL預(yù)灌流3 min后,腦基底動(dòng)脈VSMC的外向電流(+60m V)由(191.1±31)p A增加至(381±35)p A(n=6,p0.01)。在電極內(nèi)液中加入20μmol/L BAPTA-AM(選擇性鈣離子螯合劑),再給予10-4 mol/L ISL預(yù)灌流3 min后,腦基底動(dòng)脈VSMC的外向電流(+60m V)由(76.7±18)p A增加至(151.4±19)p A(n=6,p0.01)。該結(jié)果提示BAPTA-AM可以明顯抑制各組平滑肌細(xì)胞的生理外向電流,但對(duì)異甘草素增強(qiáng)腦基底動(dòng)脈VSMC外向電流的比率無(wú)顯著影響;(8)異甘草素干預(yù)14d后,SHR腦基底動(dòng)脈內(nèi)c GMP水平由(31.4±3.8)pmol/mg protein增加至(78.7±12.7)pmol/mg protein(p0.05,n=6),與WKY(66.0±7.4)pmol/mg protein相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。該結(jié)果提示異甘草素可明顯增加SHR腦基底動(dòng)脈內(nèi)c GMP含量。結(jié)論:異甘草素可能通過(guò)增加SHR腦基底動(dòng)脈內(nèi)c GMP含量,增強(qiáng)平滑肌細(xì)胞BKCa電流,血管平滑肌細(xì)胞發(fā)生超極化,舒張腦基底動(dòng)脈,使SHR血壓降低。
【關(guān)鍵詞】：腦基底動(dòng)脈 異甘草素 平滑肌細(xì)胞 大電導(dǎo)鈣激活鉀通道 環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷 膜片鉗 ELISA
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R544.1
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-11
• 縮略詞表11-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-22
• 1 材料14-16
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物14
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器14-15
• 1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑、耗材15-16
• 2 方法16-21
• 2.1 大鼠尾動(dòng)脈血壓測(cè)定16
• 2.2 溶液及主要實(shí)驗(yàn)藥品的配制16-17
• 2.3 標(biāo)本制備17-18
• 2.4 異甘草素對(duì)SHR模型的干預(yù)18-19
• 2.5 玻璃微電極的制備19
• 2.6 全細(xì)胞膜片鉗記錄方法19
• 2.7 壓力型小動(dòng)脈測(cè)量?jī)x技術(shù)19
• 2.8 ELISA技術(shù)19-21
• 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理21-22
• 結(jié)果22-31
• 1. 異甘草素降低SHR血壓22
• 2. 異甘草素舒張SHR腦基底動(dòng)脈22-23
• 3. 異甘草素增強(qiáng)腦基底動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞外向電流具有電壓依賴(lài)性23-25
• 4. 異甘草素增強(qiáng)腦基底動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞外向電流具有濃度依賴(lài)性25-26
• 5 異甘草素增強(qiáng)的腦基底動(dòng)脈VSMC外向電流可能由BKCa通道介導(dǎo)26-27
• 6. 異甘草素增強(qiáng)腦基底動(dòng)脈VSMC外向電流由sGC介導(dǎo)27-28
• 7. BAPTA-AM抑制各組平滑肌細(xì)胞的生理外向電流，，但對(duì)異甘草素誘導(dǎo)增強(qiáng)的外向電流比率無(wú)顯著影響28-30
• 8. 異甘草素增加腦基底動(dòng)脈血管內(nèi)cGMP含量30-31
• 討論31-35
• 結(jié)論35-36
• 展望36-37
• 參考文獻(xiàn)37-41
• 文獻(xiàn)綜述41-49
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 致謝49-50
• 作者簡(jiǎn)歷50-51
• 導(dǎo)師評(píng)閱表51

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：732492