本文關(guān)鍵詞：心臟干細胞年齡、性別及部位分布特征研究

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【摘要】：背景:心肌梗死(myocardial infarction,MI)是由于為心臟供血的冠狀動脈堵塞,而導(dǎo)致心肌細胞缺血壞死的一種嚴重危害人類健康的高風(fēng)險、高死亡的疾病。目前針對心肌梗死的治療主要包括:藥物治療、介入治療以及外科冠狀動脈旁路搭橋術(shù),但是這些治療方法均僅僅能夠起到恢復(fù)局部心肌的血液供應(yīng),延緩心肌梗死后不利的心肌重塑的作用,而并不能從根本上解決心肌梗死后心肌數(shù)目減少、心臟功能進行性下降這一心肌梗死后的根本問題。我們及他人的研究表明,心臟中存在著心臟干細胞(cardiac stem cells,CSCs),它可以分化成心肌細胞、血管內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞等,并可以修復(fù)損傷的心肌組織。本研究擬從基礎(chǔ)性研究角度觀察小鼠心臟干細胞各亞群的年齡分布及性別分布情況,同時對各干細胞亞群在心臟不同部位中的分布情況進行初步檢測,為臨床干細胞治療心肌梗死尋找新的靶點。目的:本研究擬從基礎(chǔ)性研究角度觀察小鼠心臟干細胞各亞群的年齡分布及性別分布情況,同時對各干細胞亞群在心臟不同部位中的分布情況進行初步檢測,為臨床干細胞治療心肌梗死尋找新的靶點。方法:1、利用免疫磁珠活性分選法獲得的C57小鼠心臟干細胞,并利用流式細胞儀進行細胞純度鑒定;對分選的心臟干細胞行細胞培養(yǎng)并觀察其定向分化的能力。2、利用流式細胞技術(shù)分析4周齡青年C57小鼠與9月齡老年C57小鼠各9只心臟干細胞的含量;分析6月齡健康成年雌性、雄性各9只C57小鼠心臟干細胞的含量;分析9只6月齡健康成年C57小鼠心房、左心室、右心室以及室間隔的心臟干細胞含量。結(jié)果:1 C57小鼠心臟干細胞的活性分選及鑒定1.1磁珠分選法獲得的C57小鼠CD45-、Sca-1+干細胞流式細胞儀純度鑒定Lagendorff裝置灌流、消化酶解心肌細胞,經(jīng)30μm濾網(wǎng)過濾后的小細胞,經(jīng)Sca-1及CD45抗體孵育后,用流式細胞儀檢測CD45-、Sca-1+細胞百分比。經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn),純化后的CD45-、Sca-1+細胞百分比高達86.4%,細胞純化技術(shù)穩(wěn)定。1.2分離培養(yǎng)的心臟干細胞具有多向分化能力從正常6月齡成年雄性C57小鼠心臟中分離、提取心臟干細胞,培養(yǎng)基中培養(yǎng)14天,然后固定細胞進行免疫熒光染色,發(fā)現(xiàn):干細胞已向特定細胞類型開始分化。分別用肌鈣蛋白(troponin I,紅色)、α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA,紅色)、von Willebrand因子(v WF,綠色)作為心肌細胞、成纖維細胞及內(nèi)皮細胞的標記物(細胞核用DAPI標記為藍色),見圖。證明分離培養(yǎng)的心臟干細胞確實具有定向分化為心臟組織細胞的能力,即分離的心臟干細胞成功。2 C57小鼠心臟干細胞的年齡、性別及部位分布2.1 C57小鼠ckit+心臟干細胞與sca-1+心臟干細胞含量比較選擇6月齡成年雄性C57小鼠9只,分別使用流式細胞技術(shù)測定其心臟中ckit+心臟干細胞與sca-1+心臟干細胞含量(%)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)ckit+CSCs含量明顯少于sca-1+CSCS含量。(0.19±0.027 vs 21.37±3.378,P0.05)。2.2不同年齡C57小鼠ckit+、sca-1+心臟干細胞含量比較選擇4周齡和9月齡的雄性C57小鼠各9只,分別作為青年組和老年組,使用流式細胞技術(shù)測定其心臟中ckit+心臟干細胞與sca-1+心臟干細胞含量(%)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)青年組ckit+心臟干細胞含量(%)多于老年組(0.24±0.036 vs 0.16±0.057,P0.05);而老年組sca-1+心臟干細胞含量(%)明顯多于青年組(25.41±4.689 vs20.41±5.213,P0.05);由于sca-1+心臟干細胞含量明顯高于ckit+心臟干細胞,所以總體來說老年組心臟干細胞含量(%)明顯高于青年組(23.67±6.431 vs 20.21±3.452,P0.05)。2.3不同性別C57小鼠ckit+、sca-1+心臟干細胞含量比較選擇6月齡成年C57小鼠雌雄各9只,分別作為雌性組和雄性組,使用流式細胞技術(shù)測定其心臟中ckit+心臟干細胞與sca-1+心臟干細胞含量(%)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)雌性組ckit+心臟干細胞含量(%)與雄性組差別無統(tǒng)計學(xué)意義(0.19±0.034 vs 0.18±0.045,P0.05);同時雌性組sca-1+心臟干細胞含量(%)與雄性組差別亦無統(tǒng)計學(xué)意義(22.35±3.423 vs 21.90±4.322,P0.05);所以總體來說雌性組及雄性組心臟干細胞含量顯著差異(21.37±6.231 vs 20.21±2.322,P0.05)。2.3 C57小鼠心臟不同部位ckit+、sca-1+心臟干細胞含量比較選擇6月齡成年雄性C57小鼠9只,將其心臟分為心房,左心室,右心室,室間隔四個部分作為4組,分別使用流式細胞技術(shù)測定其心臟中ckit+心臟干細胞與sca-1+心臟干細胞含量(%)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)心房組、左心室組、右心室組以及室間隔組,各組間ckit+心臟干細胞含量(%)差別無統(tǒng)計學(xué)意義(0.19±0.034 vs 0.18±0.045 vs 0.19±0.028 vs 0.18±0.087,P0.05);同時心房組、左心室組、右心室組以及室間隔組,各組間sca-1+心臟干細胞含量(%)差別無統(tǒng)計學(xué)意義(23.25±5.313 vs 22.89±3.322 vs 21.98±4.577 vs 22.65±3.373,P0.05);所以,總體來說心房組、左心室組、右心室組以及室間隔組,各組間心臟干細胞含量(%)差別無統(tǒng)計學(xué)意義(22.95±1.364 vs 21.41±5.364 vs 22.58±6.132 vs 22.35±7.7313,P0.05)。結(jié)論:1.免疫磁珠分選法獲得的C57小鼠心臟干細胞具有多向分化為心肌細胞、成纖維細胞及內(nèi)皮細胞的的能力。2.C57小鼠ckit+心臟干細胞含量明顯少于sca-1+心臟干細胞。3.老年C57小鼠心臟干細胞含量明顯高于青年C57小鼠。4.不同性別C57小鼠ckit+、sca-1+心臟干細胞含量無明顯差異。5.C57小鼠心臟不同部位ckit+、sca-1+心臟干細胞含量無明顯差異。
【關(guān)鍵詞】：心臟干細胞 缺血性心臟病 衰老 心肌再生
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R542.22
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-14
• 1 材料及方法14-19
• 1.1 材料14-16
• 1.2 方法16-19
• 2 結(jié)果19-21
• 2.1 C57 小鼠心臟干細胞的活性分選及鑒定19
• 2.2 C57 小鼠心臟干細胞的年齡、性別及部位分布19-21
• 3 討論21-25
• 4 結(jié)論25-26
• 參考文獻26-31
• 附錄31-40
• 綜述40-52
• 參考文獻47-52
• 致謝52-53
• 在學(xué)期間承擔/參與的科研課題與研究成果53-54
• 個人簡歷54

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本文編號：728189