本文關(guān)鍵詞：氧化應(yīng)激和EndMT參與心房纖維化致心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 心房顫動(dòng) 結(jié)構(gòu)重構(gòu) 心房纖維化 氧化應(yīng)激 End MT

【摘要】：背景及目的:心房纖顫(atrial fibrillation)在臨床上較為普遍,隨全社會(huì)老齡化進(jìn)程逐日加劇,其發(fā)病率節(jié)節(jié)攀升,嚴(yán)重阻礙了人類健康的發(fā)展。究其關(guān)鍵點(diǎn)對(duì)是房顫發(fā)生和維持的分子機(jī)制研究不夠透徹。目前,房顫基礎(chǔ)研究所涉及的主要分子機(jī)制包括電重構(gòu)、結(jié)構(gòu)重構(gòu)、自主神經(jīng)功能異常以及離子通道改變等。近幾年,結(jié)構(gòu)重構(gòu)領(lǐng)域得到了更多的關(guān)注,尤其是氧化應(yīng)激和纖維化的相關(guān)機(jī)制。機(jī)體在正常狀態(tài)下能夠產(chǎn)生抗氧化酶如SOD、MDA等來(lái)清除多余的ROS,使體內(nèi)自由基的含量處于一個(gè)穩(wěn)態(tài)。氧化應(yīng)激發(fā)生時(shí),機(jī)體內(nèi)過度氧化導(dǎo)致細(xì)胞損傷,產(chǎn)生過量的ROS,致肌漿網(wǎng)膜受損,使胞漿鈣濃度升高,心房肌纖維溶解,導(dǎo)致結(jié)構(gòu)重構(gòu),其細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)表現(xiàn)為心肌纖維化。無(wú)論是動(dòng)物模型、臨床標(biāo)本還是細(xì)胞水平,均證實(shí)導(dǎo)致房顫治療后復(fù)發(fā)的重要原因之一是心肌纖維化改變,而成纖維細(xì)胞是纖維化發(fā)生的主要效應(yīng)器細(xì)胞,而心肌成纖維細(xì)胞來(lái)源不明確,以及多種病理?xiàng)l件下不同來(lái)源成纖維細(xì)胞組成的變化尚不清楚,故明確其來(lái)源,阻斷心房纖維化進(jìn)程是近年來(lái)房顫基礎(chǔ)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)科學(xué)問題。近來(lái)發(fā)現(xiàn)通過心內(nèi)膜和微血管內(nèi)皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化(End MT)可能是心肌中成纖維細(xì)胞的重要來(lái)源,即內(nèi)皮細(xì)胞在刺激因素如壓力負(fù)荷、炎癥介質(zhì)等作用下難以維持細(xì)胞外基質(zhì)的穩(wěn)定結(jié)構(gòu),向間質(zhì)轉(zhuǎn)變、增生為成纖維細(xì)胞的過程。且病理狀態(tài)下,成纖維細(xì)胞具有更強(qiáng)的促纖維化能力,加快了心房肌纖維化進(jìn)程,參與心臟重構(gòu)的過程。本研究擬通過觀察氧化應(yīng)激標(biāo)志物在兩組患者右房組織及血清中的表達(dá)來(lái)探討氧化應(yīng)激在房顫心房重構(gòu)中的作用和意義,并在患者的心房肌組織中檢測(cè)α-SMA、S100A4、CD31m RNA和蛋白的表達(dá)變化來(lái)驗(yàn)證End MT參與心房纖維化以及其在心房重構(gòu)中的作用,研究結(jié)果期望為房顫的臨床干預(yù)提供新的干預(yù)靶標(biāo)。第一部分:氧化應(yīng)激標(biāo)志物在房顫患者心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)中的變化和意義研究對(duì)象:回顧性分析新橋醫(yī)院心血管外科2014年2月至5月入院,經(jīng)常規(guī)心臟超聲檢查診斷為單純二尖瓣病變的風(fēng)濕性心臟病患者44例,根據(jù)病史及術(shù)前心電圖記錄分為2組。持續(xù)房顫組(AF組)26例,定義為房顫發(fā)作48h以上不能自動(dòng)轉(zhuǎn)復(fù),需藥物等其他手段干預(yù),持續(xù)時(shí)間≥6月,平均年齡(53.30±8.81)歲;竇性心律組(SR組)18例,定義為從未發(fā)生過房顫,平均年齡(50.37±13.03)歲。排除標(biāo)準(zhǔn):①合并冠心病、糖尿病、肝腎功能不全、甲功亢進(jìn)或甲狀腺功能減低、惡性腫瘤、心肌病等;②術(shù)前6月內(nèi)服用過任何類型的ACEI和ARB類藥物;③三尖瓣返流中度及以上(定義為三尖瓣返流面積≥3cm2);④房顫持續(xù)時(shí)間小于6個(gè)月;⑤年齡小于18歲或大于80歲;組織標(biāo)本采集:在體外循環(huán)轉(zhuǎn)流開始前,切取部分右心耳組織,剪去多余的脂肪組織后置入-80℃冰箱待測(cè);另于每組標(biāo)本中隨機(jī)抽取5例置于4%多聚甲醛溶液中固定24-36h,常規(guī)石蠟包埋,連續(xù)切片(6-8張,片厚5μm),用于Masson染色及免疫組化染色、免疫熒光染色。觀察心房纖維化情況,以及NOX2蛋白在右房組織的表達(dá)。血液標(biāo)本采集:手術(shù)前一天抽取患者靜脈血3ml,于室溫放置2小時(shí)待上下分層后于4°C 1000 x g離心15分鐘,小心吸取上清液,仔細(xì)標(biāo)記并分裝于2個(gè)EP管中,于-80°冰箱中保存,取出使用時(shí)需要再次離心。Masson染色:檢測(cè)心房纖維化。免疫組化和免疫熒光染色:檢測(cè)兩組患者心房組織內(nèi)NOX2蛋白的表達(dá)變化。ELISA法:對(duì)右心耳組織及血清中氧化應(yīng)激水平進(jìn)行測(cè)定。第二部分:End MT參與心房纖維化在風(fēng)濕性心臟病合并AF患者心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)中的意義研究對(duì)象:選取2014年7月份至10月份,在新橋醫(yī)院心外科入院的42例接受單純二尖瓣置換術(shù)的風(fēng)濕性心臟病患者,納入和排除標(biāo)準(zhǔn)同第一部分,根據(jù)病史和術(shù)前24小時(shí)心電圖記錄分為2組:慢性房顫組(AF組)22例,竇性心律組(SR組)20例,分組標(biāo)準(zhǔn)同第一部分。術(shù)前行心臟多功能彩超測(cè)定各心腔大小及評(píng)價(jià)心功能。標(biāo)本采集:在開胸手術(shù)體外循環(huán)轉(zhuǎn)流前,切取右心耳組織約200mg,剪去多余的脂肪組織后,將同一標(biāo)本分成三部分;一部分用4%多聚甲醛溶液固定24-36h后常規(guī)石蠟包埋,連續(xù)切片5-6張(片厚約6um);一部分迅速置入-80°C冰箱,以備提取組織總RNA和蛋白;一部分用OCT劑包埋,置入-80°C冰箱,或立即行冰凍切片,用于免疫熒光雙標(biāo)染色。研究方法:Masson及Sirius-Red:觀察兩組患者心房纖維化程度。RT-q PCR:檢測(cè)兩組患者心房組織中α-SMA、CD31、S100A4 m RNA含量變化。Western blot:檢測(cè)兩組患者心房組織中α-SMA、S100A4蛋白的差異性表達(dá)。免疫組化、免疫熒光雙標(biāo)染色:檢測(cè)兩組標(biāo)本中α-SMA、CD31、S100A4蛋白表達(dá)差異的情況。研究結(jié)果:1.第一部分氧化應(yīng)激和心房重構(gòu)的相關(guān)結(jié)果:(1)基線特征比較:AF組:男性7/26例,女性19/26例,SR組:6/18例,女性12/18例,AF組患者左房?jī)?nèi)徑(LADd)明顯大于SR組[(55.57+10.76)vs(43.94+6.21),P0.05],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;AF組左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)顯著低于SR組[(63.12+7.66)vs(67.83+4.62),P0.05],AF組左房血栓和腦梗的發(fā)生率明顯高于SR組[11%vs 6%;2%vs 0%,P0.05]。(2)兩組患者的免疫組化結(jié)果:AF組NOX2陽(yáng)性細(xì)胞面積area明顯高于SR組[(32005.72+8885.11)vs(6438.32+2849.63),P0.05],AF組積分光密度值高于SR組[(4705559+1225040)vs(1213255+421952),P0.05],相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(3)兩組患者ELISA結(jié)果:AF組右心耳組織內(nèi)ROS[(18.53+3.47)vs f(13.65+3.69),P0.01],SOD[(13.32+1.25)vs(10.65+1.15),P0.05]、MDA[(15.41+1.69)vs(11.46+1.83),P0.01]AOPP[(29.69+2.09)vs(21.94+1.94),P0.01]的表達(dá)明顯高于SR組。AF組血清中ROS含量[(34.6+2.61)vs(17.8+1.03),P0.05]明顯高于SR組,AOPP含量[(13.64+2.56)vs(13.27+3.38),P0.05]與SR組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.第二部分End MT參與房顫心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)的相關(guān)結(jié)果(1)心肌間質(zhì)纖維化的觀察:masson染色和苦味酸天狼星紅染色發(fā)現(xiàn):AF組與SR組相比,右房組織膠原纖維增生明顯,特別是I型膠原纖維,CVF顯著增高(P0.05);(2)免疫熒光雙標(biāo)染色:通過激光共聚焦技術(shù)檢測(cè)AF組患者可見心肌間質(zhì)微血管內(nèi)皮有S100A4、CD31兩種蛋白熒光強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),而SR組只有CD31表達(dá),S100A4蛋白表達(dá)較弱或沒有表達(dá)。(3)免疫組化染色:兩組患者右房心肌組織中均有S100A4、α-SMA、Vi蛋白表達(dá),AF組呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),SR表達(dá)較弱。(4)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè):AF組患者右心房組織中S100A4、α-SMA m RNA表達(dá)均顯著高于SR組(P0.05),而AF組心房組織中CD31m RNA表達(dá)低于SR組(P0.05);(5)免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè):AF組患者右心房組織中S100A4、α-SMA蛋白表達(dá)顯著高于SR組(P0.05);結(jié)論:1.房顫時(shí)左房?jī)?nèi)徑增大更明顯,射血分?jǐn)?shù)減低,左房血栓及腦栓塞發(fā)生率明顯增高,而且發(fā)生了以心房纖維化為主的結(jié)構(gòu)重構(gòu)。2.氧化應(yīng)激分子標(biāo)志物表達(dá)升高,以心房組織顯著,表明氧化應(yīng)激和心房纖維化密切相關(guān),提示可能存在NADPH氧化酶/NOX2↑一體內(nèi)氧化應(yīng)激/炎癥介質(zhì)增加一纖維化改變-結(jié)構(gòu)重構(gòu)一房顫易感性增強(qiáng)這一鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。3.End MT參與了心房結(jié)構(gòu)重構(gòu),心房肌組織中內(nèi)皮細(xì)胞可轉(zhuǎn)為化成纖維細(xì)胞參與心房纖維化,表現(xiàn)為成纖維細(xì)胞特異性標(biāo)志物α-SMA和FSP-1(又稱S100A4)、vimentin m RNA和蛋白表達(dá)在右房組織中顯著升高,而內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物CD31 m RNA和蛋白表達(dá)在右房組織中明顯降低。
【關(guān)鍵詞】：心房顫動(dòng) 結(jié)構(gòu)重構(gòu) 心房纖維化 氧化應(yīng)激 End MT
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R541.75
【目錄】：

• 英文縮寫一覽表4-6
• 英文摘要6-11
• 中文摘要11-15
• 第一章 前言15-18
• 第二章 氧化應(yīng)激標(biāo)志物在房顫患者心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)中的變化及意義18-28
• 2.1 材料與方法18-22
• 2.2 結(jié)果22-26
• 2.3 討論26-27
• 2.4 結(jié)論27-28
• 第三章 End MT參與心房纖維化在瓣膜合并房顫患者心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)中的意義28-46
• 3.1 材料和方法28-36
• 3.2 結(jié)果36-44
• 3.3 討論44-45
• 3.4 結(jié)論45-46
• 全文結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 文獻(xiàn)綜述 心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)作用機(jī)制的研究進(jìn)展50-58
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 研究生在讀期間發(fā)表論文情況58-59
• 致謝59

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 范文茂;徐新;袁書國(guó);張社兵;唐良秋;姜月平;陳勇;;MicroRNA-223及MMP-9在風(fēng)濕性心瓣膜病合并心房顫動(dòng)患者中的表達(dá)及臨床意義[J];嶺南心血管病雜志;2014年02期

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本文編號(hào)：717538