本文關(guān)鍵詞：SRB1、ITGB2基因單核苷酸多態(tài)性與冠心病的相關(guān)性研究

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【摘要】：背景：冠心病是一種由環(huán)境因素和遺傳因素共同作用導(dǎo)致的復(fù)雜疾病,是世界范圍內(nèi)死亡和致殘的首要原因之一。脂代謝異常和炎癥是冠心病發(fā)生、發(fā)展的兩大機(jī)制,也是近年來冠心病研究的熱點(diǎn)。B類1型清道夫受體(scavenger receptor class B type1,SRB1)是最主要的高密度脂蛋白(HDL)受體,既能介導(dǎo)肝臟對(duì)高密度脂蛋白中膽固醇脂的選擇性攝取,又能促進(jìn)外周組織細(xì)胞內(nèi)游離膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)至HDL,從而保持膽固醇代謝的平衡并防止游離膽固醇在動(dòng)脈壁中堆積。SRB2的缺失可導(dǎo)致動(dòng)脈壁內(nèi)膽固醇平衡紊亂以及脂質(zhì)在動(dòng)脈壁大量沉積和動(dòng)脈硬化癥的發(fā)生。炎癥是動(dòng)脈粥樣硬化性疾病發(fā)病的另一重要機(jī)制,炎癥反應(yīng)中白細(xì)胞的粘附、趨化等過程的基礎(chǔ)是細(xì)胞黏附和黏附分子的作用。整合素β2 (ITGB2, integrin beta 2),即CD18,是黏附分子中整合素家族的重要成員。在前期的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究中,我們發(fā)現(xiàn),冠心病患者心外膜脂肪組織中ITGB2在表達(dá)水平較非冠心病患者明顯上調(diào)(1.6倍),而在相應(yīng)的皮下脂肪組織中的表達(dá)水平確明顯下調(diào)(0.1倍)。提示ITGB2可能通過參與炎癥細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞之間的粘附、炎癥細(xì)胞趨化等過程,從而在動(dòng)脈粥樣硬化形成的起始階段發(fā)揮作用。冠心病是一種復(fù)雜的多基因遺傳病,從遺傳學(xué)的角度研究冠心病的發(fā)病機(jī)制,可能為冠心病提供一種新的診療手段。目的：本研究的目的在于,對(duì)中國(guó)北方漢族人群SRB1和ITGB2基因的單核苷酸多態(tài)性(SNP)進(jìn)行分析,探討這兩個(gè)基因SNPs位點(diǎn)的等位基因頻率、基因型頻率與冠心病發(fā)病的相關(guān)性；同時(shí)探索SNPs位點(diǎn)與研究對(duì)象的糖、脂代謝指標(biāo)的相關(guān)性。為闡明冠心病的遺傳機(jī)制、評(píng)估冠心病的病變程度和預(yù)后提供新的指標(biāo)。方法：1、研究對(duì)象研究對(duì)象來自北京協(xié)和醫(yī)院心內(nèi)科冠心病研究數(shù)據(jù)庫(kù),所有研究對(duì)象均于我院行冠狀動(dòng)脈造影檢查,并進(jìn)行了詳細(xì)的病史采集和血生化指標(biāo)收集。根據(jù)我院冠狀動(dòng)脈造影檢查結(jié)果進(jìn)行診斷,左主干、右冠、左前降支、左回旋支中有一支以上狹窄≥50%診斷為冠心病。根據(jù)冠脈造影結(jié)果進(jìn)行分組,冠狀動(dòng)脈造影結(jié)果證實(shí)本研究入選以上血管狹窄≥75%患者為冠心病組,冠狀動(dòng)脈造影結(jié)果未見異�；颡M窄25%作為非冠心病組。從冠心病研究數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選出性別、年齡、BMI、糖尿病患者比例、血脂異�；颊弑壤軌蚱ヅ涞幕颊咦鳛檠芯繉�(duì)象。2、篩選SNPs位點(diǎn)(1)在haploview中挑選基因的標(biāo)簽SNP,選擇其中位于基因功能區(qū)(如啟動(dòng)子區(qū)、外顯子區(qū)、3'UTR或5'UTR)的SNPs位點(diǎn),之后在Hapmap中查找目標(biāo)SNP在中國(guó)人群中的MAF值(最小等位基因頻率),以MAF大于0.05為原則；(2)依據(jù)全基因組關(guān)聯(lián)研究(GWAS)結(jié)果及國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道,篩選曾經(jīng)報(bào)道過陽性結(jié)果或趨勢(shì)的SNPs位點(diǎn)。3、SNP檢測(cè)方法使用oMEGA公司提供的全血基因組DNA提取試劑盒提取DNA,通過瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行DNA質(zhì)檢,之后利用Sequenom MassARRAY SNP檢測(cè)平臺(tái)進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)過程主要包括引物設(shè)計(jì)及合成、PCR擴(kuò)增反應(yīng)、SAP純化反應(yīng)、單堿基延伸反應(yīng)、質(zhì)譜檢測(cè)(基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時(shí)間質(zhì)譜)分析,檢測(cè)結(jié)果使用TYPER 4.0軟件(sequenom)分型并輸出結(jié)果。4、統(tǒng)計(jì)分析方法基因型頻率分布的Hardy. Weinberg平衡(HWE)檢驗(yàn)、最小等位基因頻率(Minor allele frequency, MAF)、 "病例-對(duì)照”關(guān)聯(lián)研究數(shù)據(jù)分析應(yīng)用Plink軟件；不同基因型間計(jì)量數(shù)據(jù)的比較應(yīng)用SPSS17.0,其中連續(xù)變量使用單因素方差分析,分類變量使用卡方分析；單體型分析應(yīng)用Haploview 4.0軟件,P0.05認(rèn)為統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異。結(jié)果：1、一般臨床資料冠心病組496例,其中男性256人,女性244人,平均年齡為60.19±9.8歲。正常對(duì)照組367例,其中男性181人,女性186人,平均年齡為59.39±11.00歲。兩組之間性別、年齡、BMI、糖尿病患者比例、血脂異�；颊弑壤裏o顯著性差異。2、Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)SRB1基因的三個(gè)SNP位點(diǎn) rs838880、rs5888、rs5889和ITGB2基因的三個(gè)SNP位點(diǎn)rs235326、rs2070947、rs2070946均符合Hardy-Weinberg平衡,樣本具有較好的代表性。3、SNPs位點(diǎn)的“病例-對(duì)照”關(guān)聯(lián)分析分別對(duì)SRB1基因的三個(gè)SNP位點(diǎn)rs838880、rs5888、rs5889 和 ITGB2基因的三個(gè)SNP位點(diǎn)rs235326、rs2070947、rs2070946的等位基因頻率、基因型頻率在冠心病組和非冠心病組進(jìn)行差異性檢驗(yàn),并通過基因模型模擬進(jìn)行分析。SRB1基因rs838880位點(diǎn)(C/T)等位基因頻率和基因型頻率在兩組間統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異,P值分別為0.017、0.0028。通過基因模型模擬,當(dāng)?shù)任换駽為隱性遺傳時(shí),即基因型為CC型時(shí),與另外兩種基因型(CT型+∏型)相比,兩組之間的基因型頻率統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異,P值為0.000672。在冠心病組與非冠心病組間SNPs位點(diǎn)隱性模型的關(guān)聯(lián)分析中,ITGB2基因的rs2070947位點(diǎn)(GG vs CA+AA)在兩組間統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異(p=0.03),基因型為GG型的人群冠心病的發(fā)生率為73%,而基因型為GA或AA時(shí),冠心病的發(fā)生率為56%。4、不同基因型間計(jì)量和計(jì)數(shù)資料的比較對(duì)上述SNPs位點(diǎn)三個(gè)基因型間臨床及血清代謝指標(biāo)進(jìn)行比較,SRB1基因rs5888位點(diǎn)三個(gè)基因型(AA型、AG型、GG型)間,血脂異常病史、LPA差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均為0.03),三種基因型中,AA型有高脂血癥病史的人數(shù)明顯少于另外兩種基因型,AA型LPA水平明顯低于另外兩種基因型。ITGB2基因rs235236位點(diǎn)三個(gè)基因型(AA型、AG型、GG型)間,高血壓病史、HDL、APOA1統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異,AA型HDL水平高于另外兩種基因型,AG型APOA1水平低于另外兩種基因型。ITGB2基因rs2070947位點(diǎn)三個(gè)基因型(GG型、GA型、AA型)間,TG統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異(P=0.01),GA型TG水平明顯高于另外兩組。rs2070946位點(diǎn)三個(gè)基因型(CC型、CT型、TT型)間,APOA1、hsCR P統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異(P值分別為0.01、0.02)。CT型APOA1及hsCRP的水平均明顯高于另外兩個(gè)基因型的人群。結(jié)論：SRB1基因的rs838880位點(diǎn)(C/T)與冠心病的發(fā)生有相關(guān)性,基因型為CC型的人群相對(duì)于具有其他兩種基因型的人群,其冠心病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)明顯降低,C等位基因可能對(duì)冠心病的發(fā)病起保護(hù)作用。SRB1基因rs5888位點(diǎn)與脂質(zhì)代謝有關(guān),A等位基因可能對(duì)脂代謝異常起保護(hù)作用。ITGB2基因的rs2070947位點(diǎn),基因型為GG型的人群冠心病的發(fā)生率為(73%)明顯高于基因型為GA或AA型(56%)GG基因型可能是冠心病發(fā)病的危險(xiǎn)因素。ITGB2基因rs2070946位點(diǎn)基因型為CT型的人群hsCRP水平升高,CT基因型可能為冠心病炎癥反應(yīng)的危險(xiǎn)因素。
【關(guān)鍵詞】：SRB1基因 ITGB2基因 冠心病 單核苷酸多態(tài)性 關(guān)聯(lián)分析
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R541.4
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 縮略詞表10-12
• 前言12-14
• 研究對(duì)象與方法14-33
• 一、研究對(duì)象14-15
• 二、試驗(yàn)與材料15-17
• 三、試驗(yàn)方法17-33
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-48
• 一、研究納入人群特點(diǎn)33-34
• 二、各SNPs位點(diǎn)Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)34
• 三、SRB1、ITGB2基因上各SNPs位點(diǎn)的“病例-對(duì)照”關(guān)聯(lián)分析34-48
• 討論48-52
• 一、單核苷酸多態(tài)性概述48
• 二、研究對(duì)象的選取48-49
• 三、SNPs研究的技術(shù)方法和統(tǒng)計(jì)方法49
• 四、SRB1基因SNPs與冠心病的相關(guān)性49-50
• 五、ITGB2基因SNPs與冠心病的相關(guān)性50-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 文獻(xiàn)綜述57-67
• 參考文獻(xiàn)62-67
• 致謝67

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 張海澄,郭繼鴻;冠心病流行病學(xué)與一級(jí)預(yù)防[J];中國(guó)實(shí)用內(nèi)科雜志;2002年08期

2 袁瑾,朱健華,潘閩,陳風(fēng),龔亞馳,崔之礎(chǔ),魏福祥;血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1基因Leu125Val分子變異與冠心病相關(guān)性[J];天津醫(yī)藥;2004年12期

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本文編號(hào)：716773