本文關(guān)鍵詞：脂聯(lián)素及其受體對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合酶活性差異調(diào)節(jié)的分子機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 脂聯(lián)素受體 Caveolin-1 eNOS 磷酸化 內(nèi)皮功能

【摘要】：目的:隨著心血管疾病所導(dǎo)致的病死率不斷增加,心血管系統(tǒng)疾病已經(jīng)成為全球威脅人類健康的“全民公敵”。血管內(nèi)皮具有內(nèi)分泌和代謝功能,大量的研究證明,許多心血管疾病都有危險(xiǎn)因子作用于血管內(nèi)皮,進(jìn)一步研究表明,內(nèi)皮功能紊亂可由一氧化氮(NO)釋放減少或破壞增多等其他原因造成,其原因可能是精氨酸(Arg)缺乏、一氧化氮合酶(NOS)生成或磷酸化異常。內(nèi)皮的正常功能破壞,可使血管收縮舒張調(diào)節(jié)介質(zhì)、凝血系統(tǒng)因子、促生長(zhǎng)介質(zhì)之間的功能紊亂,因此成為了心血管系統(tǒng)疾病一致的發(fā)生發(fā)展基礎(chǔ)[1]。脂聯(lián)素(Adiponectin,APN)作為一種脂肪細(xì)胞因子,研究證明脂聯(lián)素具有加速脂肪酸氧化,促進(jìn)糖轉(zhuǎn)運(yùn)及降低肝糖輸出,對(duì)抗血管內(nèi)皮炎癥反應(yīng),改善內(nèi)皮依賴性血管舒張功能等作用[2]。此外,在冠心病及其他大血管病變中發(fā)現(xiàn)血漿脂聯(lián)素水平明顯降低,這提示脂聯(lián)素與心血管病變密切相關(guān)。大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明,APN基因敲除(APN-/-)小鼠可導(dǎo)致嚴(yán)重的血管功能失調(diào)[3],如對(duì)乙酰膽堿的反應(yīng)性舒張存在嚴(yán)重敏感性降低、血管內(nèi)膜增厚等,這些癥狀給予APN之后可顯著改觀。但是,脂聯(lián)素對(duì)內(nèi)皮舒張反應(yīng)性調(diào)節(jié)的具體機(jī)制并不清楚;并且脂聯(lián)素及其受體如何調(diào)節(jié)其下游信號(hào)通路及機(jī)制也需進(jìn)一步的研究證實(shí)。與此同時(shí),有研究表明,窖蛋白1(Caveolin-1)存在腳手架結(jié)構(gòu),可與e NOS相互作用,從而改變NO的釋放,影響血管舒張功能。但是,脂聯(lián)素對(duì)血管舒張功能的調(diào)節(jié)與Caveolin-1是否有關(guān),尚無定論。為此本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)如下:(1)應(yīng)用脂聯(lián)素及其受體基因敲除小鼠模型,觀察生理量脂聯(lián)素對(duì)其血管舒張功能的影響,以明確生理量APN對(duì)血管內(nèi)皮功能的調(diào)節(jié)作用。(2)應(yīng)用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)觀察脂聯(lián)素如何通過脂聯(lián)素受體影響內(nèi)皮功能。(3)探討脂聯(lián)素對(duì)其受體后信號(hào)NO生成及內(nèi)皮一氧化氮合酶(e NOS)活性影響,進(jìn)而解釋脂聯(lián)素對(duì)血管張力影響的機(jī)理。因而,本實(shí)驗(yàn)的研究目的為:1、明確APN對(duì)小鼠血管內(nèi)皮功能的改善效應(yīng)和對(duì)NO產(chǎn)生的影響;2、探索APN對(duì)HUVEC中e NOS的影響,進(jìn)而揭示脂聯(lián)素I型和II型受體在e NOS活性調(diào)節(jié)中的作用;3、探討Caveolin-1是否參與脂聯(lián)素受體誘導(dǎo)e NOS磷酸化過程,從而改善主動(dòng)脈內(nèi)皮功能。方法:1、選用6-8周齡正常C57BL野生型小鼠(WT),Adipo R1基因敲除小鼠(AdipoR1KO),Adipo R2基因敲除小鼠(Adipo R2KO),Cav-1基因敲除小鼠(Cav-1KO),取其主動(dòng)脈,以生理量脂聯(lián)素(5μg/ml)孵育15 min,觀測(cè)脂聯(lián)素對(duì)內(nèi)皮舒張功能,NO生成的影響;2、原代培養(yǎng)HUVEC,并將培養(yǎng)的HUVEC分為5組:(1)對(duì)照組;(2)脂聯(lián)素組:脂聯(lián)素(終濃度為0,5,10和15μg/ml)作用0,15,30和60min;(3)脂聯(lián)素+Adipo R1 si RNA組:Adipo R1si RNA終濃度50n M,5μg/ml脂聯(lián)素作用15min;(4)脂聯(lián)素+Adipo R2 si RNA組:Adipo R2 si RNA終濃度50n M,5μg/ml脂聯(lián)素作用15min;(5)脂聯(lián)素+Cav-1 si RNA組:Cav-1 si RNA終濃度50n M,5μg/ml脂聯(lián)素作用15min;3、Western Blot技術(shù)測(cè)定各組HUVEC中e NOS和p-e NOS的蛋白表達(dá)量;4、應(yīng)用基因沉默技術(shù)分別將HUVECs中Adipo R1、Adipo R2及Cav-1基因沉默;5、提取50μl細(xì)胞上清直接上NO檢測(cè)儀,以Na NO2為標(biāo)準(zhǔn)品作標(biāo)準(zhǔn)曲線,化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)總NOx含量。結(jié)果:1、生理量脂聯(lián)素能增加小鼠血管的內(nèi)皮依賴性舒張效應(yīng),顯著改善血管內(nèi)皮功能并且這種效應(yīng)依賴于NO;2、脂聯(lián)素處理Adipo R1基因敲除小鼠,主動(dòng)脈對(duì)ACh的舒張反應(yīng)顯著降低,脂聯(lián)素處理Adipo R2基因敲除小鼠,主動(dòng)脈對(duì)ACh的舒張反應(yīng)無明顯影響;3、脂聯(lián)素對(duì)Cav-1KO小鼠的血管舒張反應(yīng)降低;4、不同濃度及時(shí)間脂聯(lián)素對(duì)HUVECs一氧化氮合酶磷酸化(p-e NOS)的影響,5μg/ml脂聯(lián)素干預(yù)內(nèi)皮細(xì)胞,e NOS磷酸化程度在15min時(shí)表達(dá)最高,NO生成水平也最高;5、si RNA抑制Adipo R1的表達(dá)后,與Adipo R1未抑制組相比,脂聯(lián)素(5μg/ml)調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞e NOS的磷酸化水平程度明顯降低,然而,Adipo R2 KD后,與Adipo R2未沉默組相比,脂聯(lián)素對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞e NOS的磷酸化程度無明顯變化;6、Caveolin-1 KD,顯著阻斷了脂聯(lián)素(5μg/ml)誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞e NOS的磷酸化和NO的產(chǎn)生。結(jié)論:1、生理量APN通過增加NO的產(chǎn)生從而對(duì)小鼠血管內(nèi)皮功能具有改善效應(yīng);2、APN通過脂聯(lián)素I型受體增加e NOS的磷酸化水平及NO的分泌,而II型受體對(duì)脂聯(lián)素誘導(dǎo)e NOS及NO生成影響不顯著。在內(nèi)皮細(xì)胞,I型II型受體在對(duì)脂聯(lián)素誘導(dǎo)的e NOS表達(dá)及活性調(diào)節(jié)中體現(xiàn)明顯的差異性;3、Caveolin-1與脂聯(lián)素I型受體相互作用共同調(diào)節(jié)e NOS磷酸化及NO的分泌,從而對(duì)血管內(nèi)皮產(chǎn)生保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：脂聯(lián)素受體 Caveolin-1 eNOS 磷酸化 內(nèi)皮功能
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R54
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 常用縮寫詞中英文對(duì)照表13-14
• 前言14-16
• 第一部分 脂聯(lián)素對(duì)小鼠血管內(nèi)皮舒張功能的調(diào)節(jié)作用及對(duì)NO生成的影響16-25
• 1 材料與方法16-20
• 1.1 實(shí)驗(yàn)試劑16-17
• 1.2 實(shí)驗(yàn)儀器17
• 1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物17
• 1.4 實(shí)驗(yàn)用液配制17-18
• 1.5 小鼠胸主動(dòng)脈環(huán)的制備18
• 1.6 主動(dòng)脈血管內(nèi)皮活性檢測(cè)18-19
• 1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法19-20
• 2 結(jié)果20-23
• 2.1 生理量脂聯(lián)素能顯著提高內(nèi)皮依賴性血管舒張反應(yīng)并且依賴于NO20
• 2.2 脂聯(lián)素受體1和 2 對(duì)小鼠血管舒張反應(yīng)的影響20-22
• 2.3 脂聯(lián)素對(duì)Cav-1KO小鼠的血管舒張反應(yīng)降低22-23
• 3 討論23-24
• 4 結(jié)論24-25
• 第二部分 脂聯(lián)素通過脂聯(lián)素受體 1/Caveolin-1 誘導(dǎo)eNOS磷酸化作用可改善主動(dòng)脈內(nèi)皮功能25-42
• 1 材料與方法25-34
• 1.1 實(shí)驗(yàn)試劑25-26
• 1.2 實(shí)驗(yàn)儀器26-27
• 1.3 實(shí)驗(yàn)分組27
• 1.4 實(shí)驗(yàn)用液配制27-28
• 1.5 細(xì)胞培養(yǎng)28
• 1.6 siRNA基因沉默28-29
• 1.7 BCA測(cè)定蛋白濃度29-30
• 1.8 Western Blot30-32
• 1.9 NO含量測(cè)定32-33
• 1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法33-34
• 2 結(jié)果34-39
• 2.1 不同濃度脂聯(lián)素對(duì)HUVEC一氧化氮合酶磷酸化（p-eNOS）的影響34
• 2.2 脂聯(lián)素處理HUVEC不同時(shí)間后，，eNOS磷酸化水平的變化34-35
• 2.3 脂聯(lián)素對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞eNOS磷酸化的作用以及NO的產(chǎn)生主要是通過脂聯(lián)素I型受體，而脂聯(lián)素II型受體對(duì)其無顯著作用35-37
• 2.4 脂聯(lián)素通過脂聯(lián)素I型受體對(duì)主動(dòng)脈內(nèi)皮功能的改善效應(yīng)需要Caveolin-1 的 參與37-39
• 3 討論39-41
• 4 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 綜述45-57
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 致謝57-58
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果58-59
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷59

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 臧傳欣;冠心病患者血清脂聯(lián)素水平及其臨床意義[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

本文編號(hào)：681234