發(fā)布時(shí)間：2017-08-12 02:19

  本文關(guān)鍵詞：丹參酮ⅡA對(duì)慢性間歇性低氧所致高血壓大鼠心肌ET-1及其受體的影響

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【摘要】：阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征(Obstructive Sleep Apnea Syndrome,OSAS)是一種常見的睡眠呼吸障礙性疾病,其臨床主要特征為夜間打鼾并伴有呼吸暫停,從而導(dǎo)致患者睡眠結(jié)構(gòu)出現(xiàn)紊亂、長(zhǎng)期動(dòng)脈血氧飽和度的波動(dòng),進(jìn)而出現(xiàn)慢性間歇性低氧(Chronic Intermittent Hypoxia,CIH),最終引起身體的多個(gè)系統(tǒng)產(chǎn)生綜合性損傷。OSAS患者一般采用藥物干預(yù)治療、口腔矯治器治療、呼吸機(jī)持續(xù)氣道正壓通氣(CPAP)治療以及外科手術(shù)治療等,但到目前為止,在臨床上還缺乏一種有效的治療方法可以治愈該疾病。丹參酮IIA(Tanshinone IIA,Tan IIA)是一種從丹參中分離的二萜醌類化合物。它是一種有效的脂溶性單體,具有縮小心肌梗死面積及抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用,從而降低心肌耗氧量。此外,Tan IIA對(duì)血小板的聚集和血液凝固有抑制作用,可擴(kuò)大冠狀動(dòng)脈、增加血流量,改善缺氧誘導(dǎo)的心肌代謝紊亂及心功能,從而改善心肌缺氧的耐受性。另外,Tan IIA還具有抗炎抗氧化的作用。另外,OSAS患者血壓升高與內(nèi)皮素-1(Endothelin-1,ET-1)水平升高密切相關(guān)。ET-1是由內(nèi)皮細(xì)胞上合成一種強(qiáng)力的血管收縮肽,需與ETA或ETB受體結(jié)合后才能發(fā)揮作用。近來動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)了Tan IIA對(duì)ET-1的合成有抑制作用,并在某種程度上表現(xiàn)出了ET-1受體拮抗劑的效果,從而改善血管內(nèi)皮功能障礙。此外,Tan IIA可以通過調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞凋亡的基因表達(dá)從而抑制左心室肥厚的發(fā)生這對(duì)心臟有一定的保護(hù)作用。雖然,目前關(guān)于Tan IIA在保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞功能和心功能方面研究眾多,但是在保護(hù)由CIH引起的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷以及心功能損傷的分子機(jī)制至今尚未十分清楚,也并未發(fā)現(xiàn)有關(guān)Tan IIA對(duì)CIH介導(dǎo)的ET-1及其受體的表達(dá)的信號(hào)通路方面的研究報(bào)道。本研究就是探討Tan IIA對(duì)CIH大鼠心肌ET-1及其受體的影響,進(jìn)一步探討taniia在治療osas患者過程中的作用機(jī)制。目的:本課題擬從研究與cih相關(guān)et-1及其受體拮抗劑的熱點(diǎn)問題著手,探討taniia對(duì)cih誘導(dǎo)的高血壓大鼠心功能的調(diào)節(jié)作用和心肌損傷的保護(hù)作用,以期明確taniia調(diào)節(jié)cih的相關(guān)性作用機(jī)制。方法:雄性sd(sprague~dawley)大鼠(體重為180~220g,由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供),隨機(jī)分成3組:常氧組(n=16):暴露于常氧環(huán)境中飼養(yǎng);cih組(n=16):暴露于cih環(huán)境中飼養(yǎng);cih+taniia組(n=16):暴露于cih環(huán)境中同時(shí)腹腔注射丹參酮iia磺酸鈉(20mg/kg)進(jìn)行干預(yù)。將cih組和cih+taniia組大鼠暴露于慢性間歇性低氧倉內(nèi),并將系統(tǒng)設(shè)定為每一次低氧及復(fù)氧的循環(huán)時(shí)間為3min,前1.5min充入n2使倉內(nèi)氧濃度降至9%,后1.5min充入純o2使倉內(nèi)氧濃度恢復(fù)到21%。每天暴露8h共3周。造模結(jié)束后,將大鼠隨機(jī)用于實(shí)驗(yàn)的不同部分。在造模前一天17時(shí)進(jìn)行大鼠尾動(dòng)脈無創(chuàng)血壓測(cè)量,待造模以后對(duì)每組大鼠進(jìn)行血壓測(cè)量,記錄每只大鼠尾動(dòng)脈收縮壓。在造模結(jié)束斷水?dāng)嗉Z12h后,利用目?jī)?nèi)眥取血,用于血液各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)。隨后給予烏拉坦(5mg/kg)腹腔注射麻醉,分離右頸總動(dòng)脈,將提前準(zhǔn)備好的靜脈套管針(內(nèi)徑0.8mm)中充入用生理鹽水配制的0.3%的肝素,并且與壓力換能器和多道生理信號(hào)采集系統(tǒng)連接,小心地插入動(dòng)脈內(nèi),在此過程中將采集到的數(shù)據(jù)錄入計(jì)算機(jī)。然后緩慢沿頸動(dòng)脈繼續(xù)插管入左心室,當(dāng)采集系統(tǒng)顯示出左室波型后即停止繼續(xù)推入,待波形穩(wěn)定20min后記錄的心率hr(heartrate)、左室收縮內(nèi)壓lvsp(leftventricularsystolicpressure)、左心室舒張末壓lvedp(leftventricularenddiastolicpressure)、左心室最大收縮和舒張速率lv±dp/dtmax(maximumascendinganddescendingrateofleftventricularpressure)。記錄上述指標(biāo)之后,對(duì)常氧組大鼠和cih組大鼠(n=8)再次進(jìn)行股靜脈穿刺給藥et-1(0.03nmol/kg),記錄lvsp的最大值;當(dāng)lvsp值恢復(fù)到給藥前水平10min后,對(duì)兩組給予丹參酮iia(10mg/kg)作用20min后,再次給藥et-1(0.03nmol/kg),讀取lvsp的最大值,并計(jì)算出給藥前后et-1誘導(dǎo)收縮的最大變化率,進(jìn)而對(duì)左心室功能進(jìn)行評(píng)價(jià)。此外,對(duì)大鼠進(jìn)行解剖,稱量左心室重量,計(jì)算得出左心室重量指數(shù)lvwi(leftventricularweightindex)。同時(shí),一部分用多聚甲醛固定,一部分放入~80°c冰箱凍存,備用。本研究中利用蘇木精~伊紅染色法(hematoxylin~eosinstaining,he染色)觀察心臟的損傷程度以及給予taniia干預(yù)后心臟組織的變化,同時(shí)采用免疫組化和蛋白質(zhì)印跡法(westernblot)檢測(cè)et-1以及其受體的蛋白表達(dá),另外,還觀察taniia對(duì)cih引起的一氧化氮(nitricoxide,no)釋放的調(diào)節(jié)以及內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelialnitricoxidesynthase,enos)蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果:1丹參酮iia對(duì)cih大鼠尾動(dòng)脈壓的影響造模3周后,與常氧組比較,cih組大鼠尾動(dòng)脈壓(149±4mmhg)明顯升高(p0.05);與cih組比較,cih+taniia組大鼠尾動(dòng)脈壓(119±3mmhg)明顯降低(p0.05)。2丹參酮iia對(duì)cih大鼠體重bw及心臟重量指數(shù)hwi、左心室重量指數(shù)lvwi的影響與常氧組比較,cih組大鼠體重(313±10g)明顯降低(p0.05);與cih組比較,cih+taniia組大鼠體重(331±8g)未見差異。常氧組、cih組、cih+taniia組大鼠的hwi(3.14±0.05,3.08±0.07,3.06±0.08mg/g)和lvwi(2.06±0.09,1.98±0.08,2.08±0.11mg/g)未見差異。3丹參酮iia對(duì)cih大鼠血流動(dòng)力學(xué)的影響與常氧組相比,cih組大鼠的lvsp、±dp/dtmax均明顯升高(p0.05);與cih組比較,cih+taniia組大鼠lvsp、±dp/dtmax均明顯降低(p0.05)。4et-1和丹參酮iia對(duì)cih大鼠lvsp的影響采用股靜脈注射給予et-1后,常氧組和cih組大鼠lvsp均顯著升高(p0.05);與常氧組比較,cih組大鼠的lvsp變化率明顯增高(p0.05);經(jīng)丹參酮iia干預(yù)后再次注射et-1,兩組大鼠lvsp均顯著降低(p0.05),與常氧組相比,cih大鼠lvsp變化率顯著增加(p0.01)。5丹參酮IIA對(duì)CIH大鼠心肌組織形態(tài)學(xué)改變的影響通過HE染色可觀察到,常氧組心肌細(xì)胞排列整齊且紋理清晰,心肌細(xì)胞呈桿狀排列,核染色質(zhì)分布均勻;CIH組心肌細(xì)胞排列紊亂,心肌細(xì)胞核收縮變性,心肌細(xì)胞間有結(jié)締組織增生,成纖維細(xì)胞增多,可見充血現(xiàn)象。CIH+Tan IIA組心肌細(xì)胞排列較CIH組整齊,心肌細(xì)胞呈桿狀,核染色質(zhì)分布較CIH組均勻,著色淺,成纖維細(xì)胞減少。6丹參酮IIA對(duì)CIH大鼠血漿ET-1、血清NO含量的影響較常氧組相比,CIH組大鼠的血漿ET-1含量明顯升高,而血清中NO含量明顯降低(P0.05);與CIH組比較,CIH+Tan IIA組大鼠血漿ET-1含量明顯降低,血清中NO含量顯著升高(P0.05)。7免疫組化觀察丹參酮IIA對(duì)CIH大鼠心肌ET-1、ETA和ETB受體的表達(dá)影響較常氧組相比,CIH組的ET-1表達(dá)明顯升高,ETA受體表達(dá)增加,而CIH+Tan IIA組的ET-1和ETA受體的表達(dá)明顯降低。與常氧組比較,CIH組中ETB受體明顯降低,而CIH+Tan IIA組的ETB受體高于CIH組。8 Western blot檢測(cè)丹參酮IIA對(duì)CIH大鼠心肌eNOS蛋白表達(dá)和ET-1及其受體蛋白表達(dá)的影響較常氧組相比,CIH組的ET-1蛋白表達(dá)量明顯增加,ETA受體的蛋白表達(dá)量增加,而CIH+Tan IIA組的ET-1和ETA受體的蛋白表達(dá)量明顯減少。與常氧組比較,CIH組中ETB受體明顯減少,而CIH+Tan IIA組的ETB受體卻高于CIH組。CIH組eNOS的蛋白表達(dá)量較常氧組減少,而CIH+Tan IIA組的eNOS的蛋白表達(dá)量高于CIH組。結(jié)論:丹參酮IIA可降低CIH引起的高血壓,并且通過抑制CIH誘導(dǎo)的ET-1的表達(dá),促進(jìn)了NO的合成,從而改善心功能紊亂,對(duì)心肌損傷也有一定的保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：慢性間歇性低氧 丹參酮IIA 內(nèi)皮素-1 內(nèi)皮素受體 血流動(dòng)力學(xué)
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R766;R544.1
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14-16
• 材料與方法16-26
• 結(jié)果26-28
• 附圖28-34
• 附表34-35
• 討論35-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 綜述 慢性間歇性低氧對(duì)相關(guān)心血管疾病發(fā)生的影響43-59
• 參考文獻(xiàn)50-59
• 致謝59-60
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷60

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：659316