本文關(guān)鍵詞：PR39與ADM共載體rAAV分泌表達后對心肌缺血再灌注損傷的保護性研究

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【摘要】：目的:探討共載體r AAV-PR39-ADM分泌表達促血管生成因子(PR39)和血管擴張因子(ADM)對SD大鼠心肌缺血再灌注損傷的作用。本實驗首先制備大鼠心肌缺血再灌注損傷模型,然后將共載體r AAV-PR39-ADM注射在缺血心肌區(qū)域,通過B超、血流動力學等檢測指標對缺血心肌功能進行評價,最后通過分子生物學手段檢測給藥區(qū)域心肌下游相關(guān)因子表達情況。方法:[1]實驗一:選健康成年雄性SD大鼠36只,體重范圍在280g±20g,隨機分為對照組(I/RSaline)、治療1(TR1)、治療2(TR2),每組各12只。實驗二:選健康成年雄性SD大鼠48只,體重范圍在280g±20g,隨機分為治療組1(TR1)、治療組2(TR2)、對照組1(CG1)、對照組2(CG2),每組各12只。[2]各組大鼠首先建立心肌缺血再灌注損傷模型。實驗一,對照組將0.3ml生理鹽水通過鼠尾靜脈注射;TR1組將0.3ml r AAV-PR39-ADM(3×109pfu)通過鼠尾靜脈注射;TR2組將r AAV-PR39-ADM 0.3ml(3×109pfu)注射在缺血再灌注損傷心肌局部。實驗二,TR1組,將共載體r AAV-PR39-ADM0.3ml(3×109pfu)注射在缺血再灌注損傷心肌局部;TR2組,將共載體r AAV-PR39 0.3ml(3×109pfu)注射在缺血再灌注損傷心肌局部;CG1組,將腺相關(guān)病毒(Adeno-associated virus,AAV)0.3ml(3×109pfu)注射在缺血再灌注損傷心肌局部;CG2組,將生理鹽水0.3ml注射在缺血再灌注損傷心肌局部。3.使用心電圖對模型進行監(jiān)測,術(shù)后7天分別使用TTC染色、心肌稱重實驗、血流動力學等手段評價模型及給藥方式;利用B超和血流動力學評價四組大鼠心功能,病理切片用masson染色對心肌梗死纖維化面積(MIA)評價分析。4.速取心肌組織進行研磨,提取蛋白,用western blot方法檢測相關(guān)因子表達。結(jié)果:[3]TTC染色大鼠心肌缺血再灌注損傷確切,證明模型制備成功。[4]心肌局部給藥優(yōu)于外周給藥。3.實驗2:各組大鼠術(shù)后7天行B超檢查,測量左室壁厚度及計算左心室射血分數(shù)(EF%);血流動力學檢測,左室收縮末壓(left ventricular systolic pressure,LVSP)、左室內(nèi)壓最大上升及下降速率(±LV dp/dt max),評價心臟功能;病理切片評價心肌梗死面積。TR1組EF%、LVSP、±LV dp/dt max各項指標明顯高于TR2、CG1、CG2組;TR2組EF%、LVSP、±dp/dt max高于CG1、CG2組;而CG1、CG2組EF%、LVSP、±LV dp/dt max無統(tǒng)計學差異。TR1、TR2組梗死面積小于CG1、CG2組;而TR1組梗死面積小于TR2組;CG1、CG2組梗死面積無差異。4.在缺血心肌蛋白中,成功檢測到下游低氧誘導因子(HIF-1α)、PR39標簽肽(6His)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和血管擴張因子(ADM)的表達,并對其含量進行分析,TR組高于CG組。結(jié)論:1.SD大鼠心肌缺血再灌注損傷模型復制成功。2.治療組缺血心肌功能得以提高,心肌收縮功能改善,梗死面積有所減小,共載體r AAV-PR39-ADM可能提高了大鼠缺血心肌的功能。3.心功能改善的機制可能與共載體r AAV-PR39-ADM高表達擴血管因子(ADM)和下游血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：血管生成因子(PR39) 血管擴張肽(ADM) 心肌缺血再灌注 基因治療
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R542.2
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-14
• 文獻回顧14-28
• 實驗一 SD大鼠心肌缺血再灌注損傷模型的制備及給藥28-40
• 1 材料28-29
• 2 實驗設(shè)計及目的29
• 3 實驗方法29-32
• 3.1 心肌缺血再灌注損傷模型的制備29-30
• 3.2 給藥實驗30
• 3.3 血流動力學實驗30-31
• 3.4 心肌稱重實驗31
• 3.5 2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色實驗31
• 3.6 統(tǒng)計分析31-32
• 4 實驗結(jié)果32-34
• 5 討論34-40
• 實驗二 評價共載體rAAV-PR39-ADM治療SD大鼠缺血心肌的療效40-60
• 1 材料40-45
• 2 實驗設(shè)計及目的45
• 3 實驗方法45-52
• 3.1 模型制備及給藥實驗45
• 3.2 B超檢測實驗45-46
• 3.3 血流動力學檢測實驗46
• 3.4 心肌病理切片染色實驗46
• 3.5 western blot方法檢測實驗46-52
• 3.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析52
• 4 實驗結(jié)果52-57
• 5 討論57-60
• 小結(jié)60-61
• 參考文獻61-71
• 附錄71-72
• 個人簡歷和研究成果72-73
• 致謝73-74

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 楊潔;杜德偉;李占亭;賈林濤;趙晶;許彥鳴;楊安鋼;孫脊峰;;HRE/CMV啟動子的克隆和缺氧調(diào)控活性的測定[J];中國病理生理雜志;2007年12期

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本文編號：531011