本文關鍵詞：外周血T淋巴細胞間縫隙連接在高血壓炎癥中的作用及機制研究

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【摘要】：目的:高血壓是一種多因素的慢性疾病,發(fā)病過程中伴隨低度炎癥性反應。有研究發(fā)現(xiàn),免疫細胞中存在縫隙連接通道,且在細胞增殖、活化及炎癥因子釋放過程中發(fā)揮重要作用,但縫隙連接是否參與高血壓炎癥反應目前尚不清楚。本研究以自發(fā)性高血壓大鼠和原發(fā)性高血壓患者外周血T淋巴細胞作為研究對象,探討縫隙連接在高血壓炎癥反應中的作用。方法:動物血樣實驗:應用流式細胞術檢測T淋巴細胞亞群變化及CD4+和CD8+T淋巴細胞Cx40和Cx43表達;應用ELISA檢測血清IL-2、IL-4、IL-6和IFN-γ表達;體外原代培養(yǎng)淋巴細胞,孵育縫隙連接阻斷劑Gap27,應用實時熒光定量PCR檢測大鼠淋巴細胞中炎癥因子IL-2和IL-6的表達。臨床血樣實驗:應用流式細胞術檢測T淋巴細胞亞群變化及CD4+和CD8+T淋巴細胞Cx40和Cx43表達;應用ELISA檢測血清炎癥因子IFN-γ和TNF-ɑ表達;體外原代培養(yǎng)淋巴細胞,縫隙連接阻斷劑Gap27干預處理,應用流式細胞術檢測CD4+和CD8+T淋巴細胞內IFN-γ和TNF-ɑ的表達以及應用ELISA技術檢測細胞上清液中炎癥因子IFN-γ和TNF-ɑ的表達。結果:動物血樣實驗:(1)SHR和WKY大鼠尾動脈血壓差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);(2)流式細胞術檢測發(fā)現(xiàn):SHR外周血CD4+/CD8+比值顯著高于對照組(P0.01);外周血CD4+和CD8+T淋巴細胞Cx40和Cx43表達顯著高于對照組(P0.05);(3)ELISA檢測發(fā)現(xiàn):SHR血清炎癥因子IL-2、IL-4和IL-6水平顯著上調(P0.05),且與Cx40和Cx43高表達呈顯著正相關(P0.05);(4)縫隙連接阻斷劑Gap27可顯著下調大鼠外周血淋巴細胞間IL-2和IL-6的表達(P0.05)。臨床血樣實驗:(1)原發(fā)性高血壓患者血壓顯著升高(P0.05);(2)流式細胞術檢測發(fā)現(xiàn):原發(fā)性高血壓患者外周血CD4+/CD8+比值顯著增加(P0.01);外周血CD4+和CD8+T淋巴細胞Cx40和Cx43表達顯著上調(P0.01);(3)ELISA檢測發(fā)現(xiàn):原發(fā)性高血壓患者血清炎癥因子IFN-γ和TNF-ɑ表達水平顯著上調(P0.05),且與Cx40和Cx43高表達呈顯著正相關(P0.05);(4)縫隙連接阻斷劑Gap27可顯著下調淋巴細胞內以及細胞上清中炎癥因子IFN-γ和TNF-ɑ表達(P0.05)。結論:本研究結果表明高血壓伴隨炎癥反應,機體外周血T淋巴細胞亞群紊亂,促炎因子釋放增多,同時伴隨著構成T淋巴細胞間縫隙連接通道的Cx40和Cx43表達顯著上調,應用縫隙連接阻斷劑阻斷淋巴細胞間信息通訊后促炎因子的釋放顯著下降。提示高血壓通過上調連接蛋白的表達,增強T淋巴細胞間縫隙連接通訊,炎癥因子的釋放增加�？p隙連接通道阻斷劑通過抑制縫隙連接通道信息傳遞作用,改變縫隙連接介導的T淋巴細胞增殖活化用,降低炎癥因子的釋放,提示縫隙連接參與調節(jié)高血壓炎癥反應。
【關鍵詞】：高血壓 T淋巴細胞 縫隙連接 炎癥反應
【學位授予單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R544.1
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-8
• 英文縮略語表8-9
• 前言9-12
• 材料與方法12-21
• 1 材料12-14
• 1.1 實驗動物和血樣采集12
• 1.2 主要試劑12-13
• 1.3 主要儀器13-14
• 2 方法14-21
• 2.1 血壓測定14
• 2.2 細胞培養(yǎng)14-15
• 2.3 流式細胞術檢測T淋巴細胞亞群和連接蛋白的表達15-16
• 2.4 ELISA檢測血清及細胞上清中炎癥因子表達16-17
• 2.5 CCK-8 檢測外周血淋巴細胞增殖反應17
• 2.6 MTT檢測外周血淋巴細胞增值活化反應17
• 2.7 實時熒光定量PCR檢測炎癥因子IL-2 和IL-6 表達17-20
• 2.8 統(tǒng)計學方法20-21
• 實驗結果21-35
• 1 動物實驗結果21-26
• 1.1 SHR和WKY大鼠尾動脈血壓比較21
• 1.2 SHR和WKY大鼠外周血T淋巴細胞亞群比較21
• 1.3 SHR和WKY大鼠血清炎癥因子比較21-23
• 1.4 SHR和WKY大鼠外周血CD4~＋和CD8~＋T淋巴細胞Cx40和Cx43比較23
• 1.5 SHR外周血CD4~＋和CD8~＋T淋巴細胞Cx40和Cx43和炎癥因子相關性分析23-24
• 1.6 縫隙連接阻斷劑Gap27對大鼠外周血淋巴細胞炎癥因子IL-2 和IL-6 影響24-26
• 2 臨床血樣實驗結果26-35
• 2.1 臨床資料分析顯示26-27
• 2.2 原發(fā)性高血壓患者和非高血壓健康者外周血T淋巴細胞亞群比較27-28
• 2.3 原發(fā)性高血壓患者和非高血壓健康者外周血CD4~＋和CD8~＋T淋巴細胞Cx40和Cx43表達28-29
• 2.4 原發(fā)性高血壓患者和非高血壓健康者血清炎癥因子比較29-30
• 2.5 EH患者外周血Cx40和Cx43和炎癥因子相關性分析30
• 2.6 縫隙連接阻斷劑Gap27對淋巴細胞間炎癥因子IFN-γ 和TNF-ɑ 的影響30-35
• 討論35-38
• 結論和展望38-39
• 參考文獻39-45
• 文獻綜述45-51
• 參考文獻48-51
• 致謝51-52
• 作者簡介52-53
• 導師評閱表53

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本文編號：530248