本文關鍵詞：MGB Taqman探針法定量檢測415例骨髓增殖性腫瘤患者JAK2 V617F突變負荷及其臨床相關性研究

  更多相關文章： 基因 JAK2 基因突變 定量檢測 骨髓增殖性腫瘤

【摘要】：[背景]骨髓增殖性腫瘤(myeloproliferative neoplasm, MPN)根據(jù)分子生物學特性分為BCR-ABL陽性和BCR-ABL陰性兩類疾病。BCR-ABL陽性MPN主要為慢性粒細胞白血病(chronic myeloid leukemia, CML),經(jīng)典BCR-ABL陰性MPN主要包括真性紅細胞增多癥(polycythemia vera,PV)、原發(fā)性血小板增多癥(essential thrombocythemia,ET)、原發(fā)性骨髓纖維化(primary myelofibrosis, PMF)等。JAK2V617F突變在MPN的診斷及鑒別診斷中具有重要意義,自2005年至今,國內外已有不少研究組對JAK2 V617F突變做了相關研究,但多數(shù)為定性研究,僅有少數(shù)研究組對其轉錄本水平、突變負荷、突變比例做過相關研究,但此類研究大都病種單一、樣本量偏少、定量方法敏感性不高,因而結果差別較大[1-3]。[目的]為了更好地揭示JAK2 V617F突變的內在機制及其與MPN患者實驗室及臨床特征之間的關系,本研究對415例MPN患者,采用更加敏感的MGB (Minor groove binder) Taqman雙熒光探針法,對JAK2 V617F突變進行定量檢測,試圖通過本研究為MPN的診斷分型、臨床治療、疾病進展、相互轉化及預后判斷提供更多的幫助。[方法]選取2011年9月至2014年5月山東大學齊魯醫(yī)院門診及住院MPN患者及查體正常個體(JAK2 V617F突變負荷為0%)作為研究對象,收集外周靜脈血或者骨髓液。分別裂解紅細胞、提取基因組DNA、PCR擴增,50℃2分鐘,95℃10分鐘預變性；95℃15秒,62℃1分鐘,進行45個PCR循環(huán),在PCR循環(huán)第二步60℃時收集熒光信號。分別檢測病例組與對照組各病例中JAK2V617F突變發(fā)生情況,并根據(jù)公式計算出所有研究對象的突變負荷。然后,根據(jù)JAK2V617F的突變負荷情況,再將BCR/ABL陰性的MPN分為JAK2 V617F高突變組、低突變組和陰性組,比較各組間患者的臨床特征、實驗室指標以及治療效果與JAK2 V617F突變負荷的關系。[結果]415例MPN患者共檢出JAK2 V617F(+)患者236例(56.9%),其中109例真性紅細胞增多癥(PV)檢出91例(83.5%),143例原發(fā)性血小板增多癥(ET)檢出80例(55.9%),74例原發(fā)性骨髓纖維化(PMF)檢出31例(41.9%),51例MPN不能分類(MPN-U)檢出33例(64.7%),1例慢性中性粒細胞白血病(CNL)為純合突變,4例高嗜酸粒細胞增多癥(HES)和33例慢性粒細胞白血病(CML)未發(fā)現(xiàn)存在突變。236例JAK2 V617F(+)患者中12例為純合突變(其中PV、MPN-U各4例,PMF 2例,ET、CNL各1例)。JAK2 V617F突變以低突變負荷(突變負荷50%)為主(68.8%),突變負荷以PV組最大,PMF次之,ET最小。PV患者年齡、白細胞計數(shù)與突變負荷呈明顯正相關性；ET患者白細胞計數(shù)與突變負荷呈明顯正相關性；PMF患者白細胞計數(shù)、血紅蛋白水平及血小板計數(shù)與突變負荷均呈明顯正相關性。突變負荷與MPN其它臨床參數(shù)無明顯相關性。[結論]JAK2 V617F突變負荷從高到低依次為PV、PMF和ET,突變狀態(tài)以雜合突變?yōu)橹?隨著患者年齡、血紅蛋白水平、白細胞及血小板計數(shù)升高,突變負荷增加。
【關鍵詞】：基因 JAK2 基因突變 定量檢測 骨髓增殖性腫瘤
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R733
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 符號說明11-12
• 前言12-14
• 資料與方法14-20
• 結果20-23
• 討論23-26
• 結論26-27
• 附表與附圖27-30
• 參考文獻30-32
• 綜述32-45
• 參考文獻40-45
• 致謝45-46
• 攻讀學位期間發(fā)表的論文46-47
• 學位論文評閱及答辯情況表47

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 趙聲明,顧惜春,常乃柏,Tim Clackson,C Anthony Blau;JAK2轉基因骨髓造血干/祖細胞體外長期擴增調控及定向分化的研究[J];中華血液學雜志;2004年02期

2 胡欣,萬大方;JAK/STAT信號轉導途徑研究進展及其與腫瘤的關系[J];腫瘤;2005年04期

，

本文編號：521175