本文關鍵詞：經(jīng)血管周圍移植骨髓間充質(zhì)干細胞抑制腹主動脈瘤發(fā)展的實驗研究

  更多相關文章： 腹主動脈瘤 間充質(zhì)干細胞 Pluronic F-127 血管平滑肌細胞 MMP

【摘要】：目的：腹主動脈瘤(Abdominal aortic aneurysm,AAA)是一種好發(fā)于老年男性的血管退行性疾病,一旦破裂,死亡率極高。腹主動脈瘤的形成包含了一個極為復雜的動脈壁病理性重建過程,其典型特征是細胞外基質(zhì)(Extracellular matrix,ECM),尤其是彈性蛋白(Elastin, ELN)的合成和降解失調(diào),以及血管平滑肌細胞(Vascular smooth muscle cell,VSMC)的減少。這些結締組織的完整性受到破壞,導致動脈壁的強度減弱并發(fā)生擴張。本實驗利用Pluronic F-127作為載體,將骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)移植于腹主動脈周圍,研究其對腹主動脈瘤發(fā)展的影響。方法：本課題組采取全骨髓貼壁的方法分離骨髓間充質(zhì)干細胞,并進行體外擴增、純化,采取流式細胞術和三系分化對細胞進行鑒定。將實驗動物分為三組：假手術組(SHAM)、對照組(CG)、實驗組(EG),對照組和實驗組均通過胰彈性蛋白酶灌注的方法建立大鼠腹主動脈瘤模型,用Ⅰ型豬胰彈力蛋白酶持續(xù)加壓灌注腎下腹主動脈,保持灌注時間30mmin。實驗組在造模后將外源性BMSC和Pluronic F-127凝膠混合,均勻外敷于腹主動脈周圍。4周后獲取組織樣本,通過大體觀察和測量血管直徑觀察大鼠組織結構的變化；通過間苯二酚染色觀察各組大鼠彈力纖維的形態(tài)；通過平滑肌肌動蛋白(Alpha smooth muscle actin,α-SMA)免疫組織化學染色法確定主動脈壁內(nèi)血管平滑肌細胞的存留情況；通過real-time PCR分析各組大鼠動脈壁內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶-9(Matrix metalloproteinases,MMP-9)和金屬蛋白酶組織抑制劑-1(Tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP-1)的表達情況。結果：體外培養(yǎng)的細胞陽性表達CD29、90,而陰性表達CD45、34,且經(jīng)成骨、成脂和成軟骨誘導后,茜素紅、油紅、阿辛藍染色均呈陽性,從而證實實驗細胞為骨髓間充質(zhì)干細胞。采用胰酶灌注法進行造模后,腹主動脈的直徑較原來增加超過50%,符合腹主動脈瘤的診斷標準。4周后進行各項檢測結果表明,經(jīng)過BMSC治療的實驗組與對照組相比,動脈瘤的擴張率明顯減輕(53.13+30.83% VS 139.37+27.45%,P0.01),提示實驗組動脈瘤的發(fā)展受到明顯的抑制；MMP-9的mRNA相對表達水平降低(1.34±0.14 VS 2.4±0.14,P0.01),而TIMP-1的mRNA相對表達水平升高(0.76±0.18 VS 0.48±0.17,P0.01),提示實驗組動脈瘤體中MMP的活性受到明顯抑制,而其組織抑制劑的活性增強；存留的血管平滑肌細胞數(shù)量明顯增多(88.1±8.63 VS 48.43+9.03個/高倍鏡,P0.01)，，提示實驗組血管壁中較少的平滑肌細胞發(fā)生凋亡。結論：采用胰彈性蛋白酶灌注法可以建立穩(wěn)定的大鼠腹主動脈瘤模型。本課題組證明了以Pluronic F-127為載體,將BMSC移植于腹主動脈瘤周圍,可以通過降低血管壁中MMP的活性,使彈性蛋白降解減少,且能使較多的血管平滑肌細胞得到留存,從而成功延緩了腹主動脈瘤的發(fā)展。本實驗為如何抑制腹主動脈瘤的發(fā)展提供了新的思路,并為腹主動脈瘤的進一步治療提供了理論依據(jù)。
【關鍵詞】：腹主動脈瘤 間充質(zhì)干細胞 Pluronic F-127 血管平滑肌細胞 MMP
【學位授予單位】：東南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R543.16
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-11
• 中英文縮略詞表11-12
• 前言12-14
• 綜述：腹主動脈瘤的研究進展14-21
• 第一章：材料和方法21-30
• 1. BMSC的體外培養(yǎng)和鑒定21-23
• 1.1 實驗材料和儀器21
• 1.2 細胞制備及培養(yǎng)21-22
• 1.3 流式細胞術鑒定表面抗原22
• 1.4 BMSC的三系分化22-23
• 2. 彈性蛋白酶誘導大鼠腎下型腹主動脈瘤模型的建立23-24
• 2.1 實驗材料23-24
• 2.2 實驗方法24
• 2.3 評價標準24
• 3. BMSC對腹主動脈瘤的影響24-29
• 3.1 實驗分組24-25
• 3.2 標本采集25-29
• 3.2.1 實驗器材25
• 3.2.2 實驗試劑25
• 3.2.3 標本采集25-26
• 3.2.4 石蠟包埋26
• 3.2.5 間苯二酚染色26
• 3.2.6 石蠟切片免疫組化染色26-27
• 3.2.7 Real-time PCR檢測27-29
• 4. 統(tǒng)計學分析29-30
• 第二章：實驗結果30-36
• 2.1 BMSCs的免疫表型鑒定30-31
• 2.2 成骨、成脂、成軟骨分化31-32
• 2.3 腹主動脈瘤形態(tài)學觀察32-33
• 2.4 動脈彈力纖維染色33-34
• 2.5 MMP-9、TIMP-1的基因表達34-35
• 2.6 血管平滑肌細胞的數(shù)量35-36
• 第三章：討論36-42
• 第四章：結論42-43
• 致謝43-44
• 參考文獻44-51
• 作者簡介51

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 許鎖春,耿希剛,王海晨,劉建林;腹主動脈瘤外科治療1例報告[J];西安醫(yī)科大學學報;2002年01期

2 張強;炎性腹主動脈瘤的診斷及外科治療[J];中國實用外科雜志;2002年03期

3 田成武,朱華文,曲明,姜田軍,張衛(wèi)國,杜英東;腹主動脈瘤13例臨床分析[J];臨床軍醫(yī)雜志;2002年01期

4 田成武,朱華文,曲明,姜田軍,張衛(wèi)國,杜英東;腹主動脈瘤破裂大出血救治成功1例[J];實用醫(yī)藥雜志;2002年10期

5 肖康雅;巨大腹主動脈瘤破裂1例[J];中華超聲影像學雜志;2002年08期

6 潘要干;腹主動脈瘤腔內(nèi)修補后的監(jiān)控[J];中國介入心臟病學雜志;2002年01期

7 連福珍;腹主動脈瘤10例診治體會[J];廣東醫(yī)學;2003年02期

8 劉威,張克政;腹主動脈瘤的診斷與外科治療[J];實用診斷與治療雜志;2003年05期

9 楊培紅,白峰;腹主動脈瘤破裂1例[J];罕少疾病雜志;2003年06期

10 徐斌,周穎奇,何天霖,梅舉,許華,錢寶華,曹貴松,景在平;多學科聯(lián)合治療破裂性腹主動脈瘤[J];中華急診醫(yī)學雜志;2003年08期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 潘松齡;;腹主動脈瘤若干問題探討[A];浙江省中西醫(yī)結合學會周圍血管疾病專業(yè)委員會第一次學術年會暨省級繼續(xù)教育學習班資料匯編[C];2005年

2 秋陽;李治安;孫琳;孟冷;;超聲診斷腹主動脈瘤破裂的臨床應用研究[A];中華醫(yī)學會第十次全國超聲醫(yī)學學術會議論文匯編[C];2009年

3 賴梅芳;范文丹;;彩超對腹主動脈瘤的診斷價值[A];中國超聲醫(yī)學工程學會第八屆全國腹部超聲學術會議論文匯編[C];2010年

4 張生奕;;腹主動脈瘤破裂1例報告[A];中華醫(yī)學會急診醫(yī)學分會第十三次全國急診醫(yī)學學術年會大會論文集[C];2010年

5 楊顯紅;;腹主動脈瘤病人的健康教育[A];全國神經(jīng)內(nèi)外科�？谱o理學術交流暨專題講座會議論文匯編[C];2004年

6 ;腹主動脈瘤的診斷與急救處理[A];第十一次全國急診醫(yī)學學術會議暨中華醫(yī)學會急診醫(yī)學分會成立二十周年慶典論文匯編[C];2006年

7 汪翠萍;李志娟;李紅光;;手術治療腹主動脈瘤36例護理體會[A];全國外科護理學術交流暨專題講座會議論文匯編[C];2008年

8 馬旭;呂忠;程云霄;;腎下腹主動脈瘤外科治療[A];2008年浙江省血管外科年會論文匯編[C];2008年

9 陳花;;腹主動脈瘤的超聲研究進展[A];中國超聲醫(yī)學工程學會第九屆全國腹部超聲醫(yī)學學術會議論文匯編[C];2012年

10 郝滬明;;腹主動脈瘤膜支架放置術后的彩超隨訪掃查[A];中國超聲醫(yī)學工程學會第九屆全國腹部超聲醫(yī)學學術會議論文匯編[C];2012年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 吳美華;對腹主動脈瘤應積極進行藥物治療[N];中國醫(yī)藥報;2008年

2 北京協(xié)和醫(yī)院血管外科中心 劉昌偉邋陳躍鑫;腹主動脈瘤 難辨的兇手[N];健康報;2008年

3 程懷孟;直徑小于5厘米腹主動脈瘤可保守治療[N];衛(wèi)生與生活報;2009年

4 記者 朱國旺;腹主動脈瘤一旦發(fā)現(xiàn)應立即治療[N];中國醫(yī)藥報;2010年

5 程智;兇險的腹主動脈瘤[N];大眾衛(wèi)生報;2004年

6 本報記者 張磊;80%腹主動脈瘤患者為男性[N];健康報;2013年

7 陳祖亮邋記者 胡德榮;巨大腹主動脈瘤破裂患者獲救[N];健康報;2007年

8 上海長海醫(yī)院血管外科 張雷邋景在平;腹主動脈瘤需手術[N];健康報;2007年

9 上海交通大學醫(yī)學院附屬第九人民醫(yī)院血管外科主任醫(yī)師 黃新天;人體“定時炸彈”——腹主動脈瘤[N];上�？萍紙�;2008年

10 健康時報記者 趙晴晴;血管超聲查腹主動脈瘤[N];健康時報;2010年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 左尚維;細胞外基質(zhì)降解通路相關基因多態(tài)性和血清MMP-2蛋白水平與腹主動脈瘤的關聯(lián)[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2015年

2 魏戰(zhàn)杰;地高辛拮抗RORγt活性減緩實驗性腹主動脈瘤進展的研究[D];華中科技大學;2015年

3 劉琮琳;哮喘在人和小鼠腹主動脈瘤發(fā)病中的作用及機制研究[D];鄭州大學;2016年

4 聶皓;趨化因子受體CXCR2促進腹主動脈瘤發(fā)生的作用機制研究及血管生成素相關生長因子在腹主動脈瘤血漿中的變化[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2016年

5 辛群;超聲技術在腹主動脈瘤瘤壁運動和組織特性研究中的應用[D];第二軍醫(yī)大學;2008年

6 符洋;貝納普利抑制家兔腎下腹主動脈瘤形成的研究[D];中南大學;2009年

7 馮翔;細胞外基質(zhì)代謝在腹主動脈瘤發(fā)病中的作用[D];第二軍醫(yī)大學;2001年

8 熊江;壁應力分布個體化預測腹主動脈瘤破裂的初步研究[D];第二軍醫(yī)大學;2005年

9 吳曉飛;雌激素在腹主動脈瘤形成中的作用[D];中國醫(yī)科大學;2007年

10 陳泉;彩色室壁運動和背向散射積分技術在腹主動脈瘤破裂風險預測中應用的初步研究[D];第二軍醫(yī)大學;2007年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王建國;影響腹主動脈瘤延展及預后相關因素的臨床研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2012年

2 吳s

本文編號：516247