本文關鍵詞：DFMG調(diào)控氧化損傷VECs TLR4表達對VSMCs增殖與遷移的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:觀察一種活性新化學實體,7-二氟亞甲基-5,4-二甲氧基異黃素(7-difluoromethoxy-5,4’-dimethoxygenistein,DFMG)能否通過調(diào)控損傷內(nèi)皮細胞(vascular endothelial cells,VECs)TLR4表達干預共培養(yǎng)模型中平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的增殖和遷移。方法:(1)用Transwell法建立VECs-VSMCs共培養(yǎng)模型,用LPC誘導VECs的損傷。采用CCK-8法和Transwell遷移法測定不同濃度的LPC誘導的VECs的損傷對VSMCs的增殖和遷移的影響。應用ELISA法分析不同濃度的LPC誘導的損傷VECs與VSMCs共培養(yǎng)模型中VECs IL-6和TNF-α的表達量。采用Western blot和熒光定量PCR測定損傷VECs與VSMCs共培養(yǎng)模型中VECs TLR4在蛋白水平和基因水平的表達。(2)采用CCK-8法測定不同濃度和不同作用時間的DFMG能否干預損傷VECs與VSMCs的共培養(yǎng)模型中VSMCs的增殖。并且,運用TLR4過表達和TLR4沉默的轉(zhuǎn)染技術,采用CCK8法和Transwell遷移法測定DFMG能否通過抑制VECs TLR4的表達干預共培養(yǎng)模型中VSMCs的增殖和遷移。結(jié)果:(1)隨著LPC濃度的增加,LPC誘導的VECs損傷引起VSMCs增殖和遷移的效應增強;(2)隨著LPC濃度的增加,LPC誘導的損傷VECs與VSMCs共培養(yǎng)模型中VECs的TNF-α和IL-6的分泌增加,并且選取30μM作為LPC誘導的共培養(yǎng)模型的最佳濃度;(3)LPC誘導的損傷VECs與VSMCs共培養(yǎng)模型中損傷VECs的TLR4在蛋白水平和基因水平的表達均增高;(4)DFMG抑制損傷VECs與VSMCs共培養(yǎng)模型中VSMCs的增殖,其干預作用呈現(xiàn)一定的時間-濃度依賴特性;(5)TLR4過表達具有與LPC類似的作用,能夠促進共培養(yǎng)模型中VSMCs的增殖與遷移;而DFMG與TLR4沉默也有類似的作用,能夠抑制共培養(yǎng)模型中VSMCs的增殖與遷移。結(jié)論:(1)LPC誘導的VECs損傷可以引起VSMCs的增殖和遷移;(2)DFMG可能是通過調(diào)控VECs TLR4的表達干預損傷VECs對VSMCs增殖和遷移的促進作用。
【關鍵詞】：內(nèi)皮細胞 平滑肌細胞 動脈粥樣硬化 共培養(yǎng) 7-二氟亞甲基-5 4-二甲氧基異黃素
【學位授予單位】：湖南師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R543.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 引言11-14
• 第一部分 損傷VECs對VSMCs的增殖與遷移的影響14-38
• 1.1 材料與試劑14-16
• 1.1.1 細胞14
• 1.1.2 試劑14-15
• 1.1.3 儀器15
• 1.1.4 其它15-16
• 1.2 實驗方法16-29
• 1.2.1 試劑的配置16
• 1.2.2 氧化損傷VECs-VSMCs共培養(yǎng)模型的制備16-20
• 1.2.3 實驗線路圖20
• 1.2.4 CCK-8 法檢測細胞活力20-21
• 1.2.5 Transwell遷移法檢測細胞遷移能力21-22
• 1.2.6 ELISA法檢測VECs TNF-α和IL-6 的分泌量22-24
• 1.2.7 Western blot法檢測VECs中TLR4蛋白水平的表達24-26
• 1.2.8 實時定量PCR檢測VECs中TLR4基因水平的表達26-28
• 1.2.9 統(tǒng)計學分析28-29
• 1.3 結(jié)果29-35
• 1.3.1 損傷VECs對VSMCs的增殖的影響29-30
• 1.3.2 損傷VECs對VSMCs的遷移的影響30-31
• 1.3.3 共培養(yǎng)條件下?lián)p傷VECs TNF-α和IL-6 的分泌量31-33
• 1.3.4 共培養(yǎng)模型中損傷VECs TLR4的表達33-35
• 1.4 討論35-37
• 1.5 結(jié)論37-38
• 第二部分 DFMG調(diào)控氧化損傷VECs TLR4表達對VSMCs增殖與遷移的影響38-54
• 2.1 材料與試劑38
• 2.1.1 細胞38
• 2.1.2 試劑38
• 2.1.3 儀器38
• 2.1.4 其它38
• 2.2 實驗方法38-44
• 2.2.1 TLR4過表達質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染38-39
• 2.2.2 TLR4沉默質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染39-41
• 2.2.3 氧化損傷VECs-VSMCs共培養(yǎng)模型的制備41
• 2.2.4 CCK-8 法檢測細胞活力41-43
• 2.2.5 Transwell遷移法檢測細胞遷移能力43
• 2.2.6 實驗線路圖43-44
• 2.2.7 統(tǒng)計學分析44
• 2.3 結(jié)果44-51
• 2.3.1 DFMG對損傷VECs與VSMCs共培養(yǎng)模型中VSMCs增殖的影響44-46
• 2.3.2 DFMG對VECs TLR4過表達共培養(yǎng)模型中VSMCs增殖和遷移的影響46-48
• 2.3.3 DFMG對VECs TLR4沉默共培養(yǎng)模型中VSMCs增殖和遷移的影響48-51
• 2.4 討論51-53
• 2.5 結(jié)論53-54
• 參考文獻54-60
• 綜述60-71
• 參考文獻66-71
• 英文縮寫詞表71-72
• 攻讀碩士學位期間的主要成果72-73
• 致謝73-74

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