本文關(guān)鍵詞：去乙酰化酶Sirt1調(diào)控缺氧心肌細(xì)胞線粒體融合與分裂的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:缺氧是許多心血管疾病共同的病理生理基礎(chǔ)。隨著缺氧程度和時(shí)間的增加,細(xì)胞出現(xiàn)代謝紊亂和功能障礙。線粒體是雙層膜的細(xì)胞器,通過(guò)氧化磷酸化產(chǎn)生能量,在細(xì)胞代謝中發(fā)揮重要作用。在缺氧損傷作用下,作為細(xì)胞能量工廠的線粒體發(fā)生一系列變化,包括線粒體形態(tài)的改變。研究表明線粒體的形態(tài)影響細(xì)胞的功能,從鈣離子信號(hào)到產(chǎn)生ROS、神經(jīng)元的可塑性、肌肉萎縮、以及淋巴細(xì)胞的遷移。融合缺陷會(huì)引起線粒體功能異常,可能是由于融合缺陷的線粒體其進(jìn)行線粒體基質(zhì)交換的能力被削弱引起的。另一方面,阻斷線粒體分裂會(huì)引起自噬介導(dǎo)的清除缺陷性線粒體被削弱,或者通過(guò)其他未知的功能來(lái)改變一些線粒體的功能。線粒體分裂和融合過(guò)程均由均由動(dòng)力蛋白家族中大型GTP酶所介導(dǎo)。線粒體分裂由胞質(zhì)動(dòng)力蛋白家族成員動(dòng)力相關(guān)蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)和分裂蛋白1(fission 1,Fis1)所介導(dǎo)。運(yùn)用Fis1 RNAi或者Drp1的顯性負(fù)性突變體抑制線粒體融合與分裂的周期,從而受損的線粒體材料不斷積聚,進(jìn)而導(dǎo)致代謝功能降低,說(shuō)明抑制線粒體過(guò)度分裂具有重要意義。許多動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明抑制線粒體分裂或者增加線粒體融合在組織缺血灌注、代謝性疾病和神經(jīng)退行性疾病中都有重要的意義。既往研究發(fā)現(xiàn)Sirt1的表達(dá)缺失或者活性降低能夠使心肌細(xì)胞凋亡增加,而其高表達(dá)在大鼠心肌缺血再灌注損傷中發(fā)揮保護(hù)作用。但Sirt1在缺氧心肌中的作用尚無(wú)詳細(xì)報(bào)道。Sirt1調(diào)控線粒體增生、線粒體自噬,而后者與線粒體分裂與融合的變化密切相關(guān)。因此,我們推測(cè):缺氧條件下,Sirt1可能通過(guò)調(diào)控線粒體融合與分裂,為心肌提供保護(hù)作用。目的:觀察缺氧條件下線粒體融合與分裂的變化以及Sirt1在其中的影響及其可能的機(jī)制。方法:1.臨床上收集于2014年1月-2014年12月之間在第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院心外科行手術(shù)治療的先心病患者,其中紫紺組15例,非紫紺組14例,取術(shù)中所切除的右室流出道肥厚的心肌組織為心肌標(biāo)本,運(yùn)用免疫印跡(Western Blot)檢測(cè)Drp1與Fis1蛋白表達(dá)情況。2.缺氧環(huán)境下培養(yǎng)H9c2心肌細(xì)胞。提取不同缺氧時(shí)間節(jié)點(diǎn)的心肌細(xì)胞總蛋白,Western blot檢測(cè)Drp1與Fis1蛋白表達(dá)水平變化。線粒體靶向質(zhì)粒mt RFP轉(zhuǎn)染H9c2細(xì)胞,觀察缺氧條件下線粒體形態(tài)的變化。3.缺氧條件下,DRP1K38A質(zhì)粒和h Fis1質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染至H9c2細(xì)胞,空白質(zhì)粒組做對(duì)照,LDH試劑盒檢測(cè)心肌細(xì)胞毒性。4.將線粒體靶向質(zhì)粒分別同空載質(zhì)粒、Sirt1干擾質(zhì)粒和Sirt1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至H9c2細(xì)胞,于常氧或缺氧條件下培養(yǎng)12h后,激光共聚焦顯微鏡下觀察線粒體融合、分裂變化情況。5.運(yùn)用腺病毒Ad-Sirt1和慢病毒Lv-Sh-Sirt1分別在H9c2細(xì)胞中過(guò)表達(dá)或干擾Sirt1后,Ad-GFP組和Lv-scramble組為相應(yīng)的對(duì)照組,缺氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h,Western blot法檢測(cè)各組Drp1與Fis1表達(dá)水平。結(jié)果:1.紫紺組先心病患者心肌細(xì)胞中Drp1與Fis1表達(dá)顯著高于非紫紺組(P值均小于0.05);Western blot結(jié)果表明缺氧條件下培養(yǎng)的H9c2細(xì)胞中Drp1與Fis1的蛋白表達(dá)隨缺氧的時(shí)間的延長(zhǎng)而上升。線粒體形態(tài)分析表明,與常氧組相比,缺氧能夠誘導(dǎo)線粒體分裂[(64±5.29%)vs(12.33±3.51%),P0.05]。抑制缺氧條件下的線粒體分裂能夠提高心肌細(xì)胞的存活。2.激光共聚焦結(jié)果表明,Sirt1過(guò)表達(dá)后,缺氧誘導(dǎo)的線粒體分裂顯著降低(P0.05),而當(dāng)Sirt1受到干擾后,缺氧誘導(dǎo)的線粒體分裂水平增強(qiáng)(P0.05);同時(shí),Sirt1過(guò)表達(dá)能夠降低缺氧誘發(fā)的H9c2心肌細(xì)胞的死亡率。在缺氧培養(yǎng)條件下,同對(duì)照組相比,過(guò)表達(dá)Sirt1能夠降低Drp1與Fis1蛋白表達(dá)(P0.05),而當(dāng)Sirt1被抑制后,Drp1與Fis1蛋白表達(dá)增加(P0.05)。結(jié)論:缺氧條件下,Sirt1可能通過(guò)抑制促線粒體分裂蛋白Drp1與Fis1的表達(dá)進(jìn)而抑制缺氧誘導(dǎo)的線粒體分裂,對(duì)缺氧心肌起到保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶1 動(dòng)力相關(guān)蛋白1 分裂蛋白1 線粒體融合與分裂 缺氧
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R54
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-10
• 第一章 前言10-12
• 第二章 促線粒體分裂蛋白Drp1與Fis1在紫紺型先心病患者心肌組織與缺氧心肌細(xì)胞中表達(dá)情況的研究12-23
• 2.1 材料和方法12-18
• 2.2 結(jié)果18-21
• 2.3 討論21-22
• 2.4 小結(jié)22-23
• 第三章 Sirt1對(duì)缺氧條件下心肌細(xì)胞線粒體融合與分裂的影響23-30
• 3.1 材料與方法23-25
• 3.2 結(jié)果25-28
• 3.3 討論28-29
• 3.4 小結(jié)29-30
• 全文結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-34
• 文獻(xiàn)綜述 線粒體融合與分裂在心血管疾病中的作用及其研究進(jìn)展34-44
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 研究生在讀期間發(fā)表的論文44-45
• 致謝45

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1 張子怡;張勇;;線粒體動(dòng)態(tài)變化與線粒體質(zhì)量控制:運(yùn)動(dòng)的適應(yīng)與調(diào)節(jié)[J];中國(guó)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志;2011年09期

2 張寧;王士雷;李淑虹;李瑜;王鵬;賈長(zhǎng)新;;線粒體分裂蛋白抑制劑在大鼠腦缺血再灌注損傷中的作用及其機(jī)制(英文)[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2013年18期

3 楊軼;楊敏;;線粒體融合與分裂:治療缺血性心臟疾病的潛在靶點(diǎn)[J];今日藥學(xué);2012年12期

4 阿力木江·買(mǎi)買(mǎi)提江;高秀芳;金波;施海明;;線粒體動(dòng)力學(xué)與心肌細(xì)胞能量代謝的研究進(jìn)展[J];復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年05期

5 郝希純;王東明;;Drp1蛋白調(diào)節(jié)線粒體分裂機(jī)制及其在疾病中的作用[J];廣東醫(yī)學(xué);2011年08期

6 賀文鳳;曹青;洪葵;;線粒體對(duì)iPSC再程序化的影響[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2013年03期

7 張倩;張宏偉;夏建華;連亞軍;謝南昌;;線粒體分裂蛋白抑制劑對(duì)癲癇大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的影響[J];河南醫(yī)學(xué)研究;2014年02期

8 許美芬;何軼群;管敏鑫;;線粒體融合、分裂與神經(jīng)變性疾病[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2013年12期

9 韓小建;萬(wàn)玉英;楊章堅(jiān);張劍鋒;危永芳;賴啟南;;利用蛋白導(dǎo)入法沉默線粒體分裂調(diào)節(jié)蛋白Drp1的表達(dá)[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2014年05期

10 于瀅;李俊平;王瑞元;;運(yùn)動(dòng)對(duì)不同組織線粒體動(dòng)力學(xué)相關(guān)蛋白的影響[J];中國(guó)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志;2014年06期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 楊軼;楊敏;;線粒體融合與分裂:治療缺血性心臟疾病的新靶點(diǎn)?[A];2011年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第11屆中國(guó)藥師周論文集[C];2011年

2 楊軼;劉居理;楊敏;;線粒體融合和分裂與心臟疾病[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第十一次全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議�？痆C];2011年

3 于瀅;王瑞元;;運(yùn)動(dòng)對(duì)不同組織線粒體動(dòng)力學(xué)的影響[A];2013年中國(guó)生理學(xué)會(huì)運(yùn)動(dòng)生理學(xué)專業(yè)委員會(huì)年會(huì)暨“運(yùn)動(dòng)與健康”學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2013年

4 于瀅;王瑞元;;運(yùn)動(dòng)對(duì)不同組織線粒體動(dòng)力學(xué)的影響[A];2013年中國(guó)生理學(xué)會(huì)運(yùn)動(dòng)生理學(xué)專業(yè)委員會(huì)年會(huì)暨“運(yùn)動(dòng)與健康”學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2013年

5 楊軼;楊敏;;線粒體融合與分裂:治療缺血性心臟疾病的潛在靶點(diǎn)~[A];2014年廣東省藥師周大會(huì)論文集[C];2014年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 李國(guó)兵;Cofilin調(diào)控腫瘤細(xì)胞凋亡和線粒體自噬的作用機(jī)制及其干預(yù)策略研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 陳方哲;PINK1基因通過(guò)線粒體分裂融合途徑對(duì)腦缺血的神經(jīng)保護(hù)作用[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

3 李夏春;人全長(zhǎng)Tau蛋白過(guò)度表達(dá)對(duì)線粒體分裂融合動(dòng)態(tài)及細(xì)胞退變的影響[D];華中科技大學(xué);2013年

4 高丹忱;Dynamins在小鼠心肌缺血再灌注損傷中的作用機(jī)制及Dynasore的保護(hù)作用[D];浙江大學(xué);2013年

5 劉玉和;氧化應(yīng)激誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞死亡過(guò)程中溶酶體—線粒體途徑的作用機(jī)制[D];吉林大學(xué);2009年

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1 韓雙雪;淫羊藿苷修復(fù)阿爾茲海默癥線粒體分裂—融合動(dòng)力學(xué)失衡的機(jī)制研究[D];深圳大學(xué);2015年

2 陳咪咪;MCU介導(dǎo)線粒體分裂蛋白Drp-1在人中性粒細(xì)胞遷移中的作用[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

3 張楠;大鼠骨骼肌鈍挫傷恢復(fù)過(guò)程中線粒體融合—分裂基因表達(dá)情況的研究[D];山東體育學(xué)院;2015年

4 周永方;線粒體分裂調(diào)控因子drp-1對(duì)于線蟲(chóng)壽命的調(diào)節(jié)功能研究[D];杭州師范大學(xué);2016年

5 陳俊莉;阿魏酸通過(guò)誘導(dǎo)線粒體自噬保護(hù)糖氧剝奪引起的內(nèi)皮細(xì)胞損傷[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

6 王瑞肖;解偶聯(lián)蛋白2減緩高糖加重缺氧性神經(jīng)細(xì)胞損傷及其與線粒體分裂/融合關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2016年

7 曹海燕;線粒體分裂與鈣信號(hào)交互作用促進(jìn)肝癌轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2016年

8 王穎;血紅素氧合酶1對(duì)內(nèi)毒素致急性肺損傷大鼠的線粒體融合—分裂的影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2016年

9 李剛;線粒體分裂抑制劑-1在大鼠急性脊髓損傷中的保護(hù)作用及其機(jī)制[D];遼寧醫(yī)學(xué)院;2015年

10 申菲菲;線粒體分裂在甲狀腺鱗癌細(xì)胞SW579細(xì)胞增殖、凋亡以及侵襲中的作用[D];遼寧醫(yī)學(xué)院;2015年

  本文關(guān)鍵詞：去乙�；窼irt1調(diào)控缺氧心肌細(xì)胞線粒體融合與分裂的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：491017