本文關鍵詞：血管內(nèi)皮細胞生長因子密度梯度對內(nèi)皮細胞遷移行為的調(diào)控，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：內(nèi)皮細胞的遷移對于血管再生至關重要,涉及胚胎發(fā)育、傷口愈合、組織再生和腫瘤生長等諸多生理、病理學過程�；瘜W趨觸性是調(diào)控內(nèi)皮細胞遷移的重要途徑之一,可通過構建梯度材料調(diào)控細胞粘附、鋪展和遷移等過程。為了研究材料表面生長因子密度梯度對內(nèi)皮細胞粘附和遷移的影響,本文利用注射法在硅片表面構建血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)密度梯度,對制備過程進行了優(yōu)化,并對基材進行了表征,進而考察了內(nèi)皮細胞在梯度基材表面的粘附和遷移的行為。全文包含以下三方面研究內(nèi)容:1、VEGF均勻密度表面的制備和表征:首先,以硅烷偶聯(lián)劑3-(2,3-環(huán)氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷(3-glycidoxypropyltrimeth oxysilane,GPTMS)浸泡硅片,形成端羥基的單分子層自組裝;進而,以二氫-3-[3-(三乙氧基硅基)丙基]呋喃-2,5-二酮(3-triethoxysilylpropyl succinicanhydride,TESPSA)反浸,得到含端羥基/羧基的復合自組裝單分子層。利用GPTMS與硅片的相互作用時間的不同,可得到系列不同羧基(-COOH)密度的表面。羧基官能團經(jīng)過活化后,與血管內(nèi)皮生長因子共價鍵合,從而得到接枝VEGF的表面。我們利用甲苯胺藍(Toluidine blue,TBO)法、接觸角和血管內(nèi)皮生長因子酶聯(lián)免疫檢測試劑盒(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)表征了羧基密度和VEGF密度與GPTMS反應時間的關系,結(jié)果證實:羧基密度和VEGF密度隨GPTMS反應時間增加而降低,并且呈線性變化。2、VEGF梯度密度表面的制備和表征:基于VEGF密度與GPTMS反應時間的線性關系,通過注射法,利用微流泵,將GPTMS漸進滴入反應體系中,構建羧基梯度表面,通過活化后得到VEGF密度梯度。X-射線光電子能譜儀(X-ray photoelectron spectroscopy,XPS)證實了VEGF密度梯度的形成、免疫熒光染色的激光共聚焦顯微鏡(Confocal laser scanning microscopy,CLSM)觀測到明顯的VEGF密度梯度存在,密度從54到132 ng/cm2,斜率為7.8 ng/cm2/mm。3、VEGF梯度密度表面誘導內(nèi)皮細胞遷移:通過免疫組化法染色細胞核和細胞骨架肌動蛋白,利用激光共聚焦顯微鏡觀察內(nèi)皮細胞的形態(tài)。在均勻VEGF表面,內(nèi)皮細胞骨架蛋白纖維雜亂分布,毫無規(guī)律;而在VEGF梯度密度表面培養(yǎng)的內(nèi)皮細胞,均表現(xiàn)為細胞骨架蛋白纖維趨向于沿著VEGF密度增加的方向。同時,利用活細胞工作站,實時觀測、重建內(nèi)皮細胞運動軌跡,并對細胞運動性相關的參數(shù),包括總遷移距離、凈位移、趨化指數(shù)(Chemotactic index,CI)和向梯度方向遷移的細胞個數(shù)占全部細胞的比值等進行了分析。在VEGF密度梯度上的內(nèi)皮細胞表現(xiàn)出極大的極性分布,72%的細胞向VEGF密度較高的一側(cè)移動。但是,均勻表面和梯度表面對于細胞遷移的速率沒有明顯影響。本論文提供了一種研究化學因素對細胞遷移影響的方法,有助于理解植入體科技中血管再生及向內(nèi)長入涉及的細胞遷移作用。
【關鍵詞】：梯度生物材料 內(nèi)皮細胞 VEGF 趨向性 細胞遷移
【學位授予單位】：重慶大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R543
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-9
• 1 緒論9-19
• 1.1 問題的提出與研究意義9-10
• 1.2 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀10-17
• 1.2.1 細胞遷移與血管再生10-13
• 1.2.2 梯度材料對細胞遷移的影響13-17
• 1.3 研究的思路及主要研究內(nèi)容17-18
• 1.3.1 研究思路17-18
• 1.3.2 研究內(nèi)容18
• 1.4 本論文創(chuàng)新點18-19
• 2 VEGF均勻表面的制備及表征19-30
• 2.1 引言19
• 2.2 VEGF均勻表面的制備19-21
• 2.2.1 材料試劑和儀器19-20
• 2.2.2 硅烷接枝20-21
• 2.2.3 VEGF接枝21
• 2.3 VEGF均勻表面的表征21-25
• 2.3.1 材料試劑和儀器21
• 2.3.2 羧基密度的表征21-23
• 2.3.3 接觸角表征23
• 2.3.4 內(nèi)皮細胞生長因子（VEGF）密度的表征23-25
• 2.4 結(jié)果與討論25-29
• 2.4.1 硅烷接枝反應25-27
• 2.4.2 VEGF均勻表面的制備和表征27-29
• 2.5 本章小結(jié)29-30
• 3 VEGF梯度表面的制備及表征30-37
• 3.1 引言30
• 3.2 VEGF梯度密度表面的制備30-32
• 3.2.1 材料試劑和儀器30-31
• 3.2.2 硅烷梯度的構建31-32
• 3.2.3 VEGF密度梯度的構建32
• 3.3 VEGF梯度的表征32-33
• 3.3.1 材料試劑和儀器32
• 3.3.2 VEGF梯度的免疫熒光染色半定量表征32-33
• 3.3.3 VEGF梯度的XPS表征33
• 3.4 結(jié)果與討論33-36
• 3.5 本章小結(jié)36-37
• 4 VEGF梯度誘導細胞的定向遷移37-47
• 4.1 引言37
• 4.2 內(nèi)皮細胞的培養(yǎng)37-39
• 4.2.1 材料試劑和儀器37-38
• 4.2.2 細胞培養(yǎng)38-39
• 4.3 細胞形態(tài)觀察和細胞遷移39-41
• 4.3.1 材料試劑和儀器39
• 4.3.2 細胞形態(tài)觀察39-40
• 4.3.3 細胞遷移40
• 4.3.4 數(shù)據(jù)處理40-41
• 4.4 結(jié)果與討論41-46
• 4.4.1 內(nèi)皮細胞形態(tài)分析41-42
• 4.4.2 內(nèi)皮細胞的遷移42-46
• 4.5 本章小結(jié)46-47
• 5 結(jié)論和后續(xù)工作展望47-49
• 5.1 結(jié)論47
• 5.2 展望47-49
• 致謝49-50
• 參考文獻50-57
• 附錄57
• A作者在攻讀學位期間發(fā)表的論文目錄57

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