發(fā)布時(shí)間：2017-06-21 16:02

  本文關(guān)鍵詞：戊二醛聚合豬血紅蛋白對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：血紅蛋白類(lèi)氧載體(Hemoglobin-based oxygen carriers, HBOCs)作為一種血液代用品,是通過(guò)對(duì)其前體即血紅蛋白進(jìn)行分子間或分子內(nèi)交聯(lián),或其它的化學(xué)修飾而聚合形成大分子量的聚合物。具有攜氧/釋氧以及擴(kuò)容功能,且使用時(shí)無(wú)需進(jìn)行交叉配型,不受病毒微生物感染,可以大量制備,能長(zhǎng)期保存。HBOCs能夠代替紅細(xì)胞的部分功能,作為血液代用品擁有良好的應(yīng)用前景。本實(shí)驗(yàn)室以豬血紅蛋白為原料,戊二醛為交聯(lián)劑而合成了聚合血紅蛋白,屬于HBOCs的一種。組織在缺血后會(huì)受到嚴(yán)重的損傷,主要的治療方法就是恢復(fù)血液供應(yīng),但恢復(fù)血液供應(yīng)會(huì)造成缺血再灌注損傷(I/R/I),這一過(guò)程,是由很多復(fù)雜的信號(hào)通路以及多種細(xì)胞分泌的因子共同參與的過(guò)程。研究發(fā)現(xiàn)沉默信息轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子1(silent information regulator of transcription 1, SIRT1)在心血管疾病中發(fā)揮了重要的調(diào)控作用。在SIRT1信號(hào)通路的下游有一種重要的信號(hào)分子叫叉頭轉(zhuǎn)錄因子1(forkhead box transcription factor O1, FOXO1), SIRT1對(duì)心肌凋亡過(guò)程的調(diào)控可以通過(guò)改變FOXO1的乙�；�。本論文從細(xì)胞水平和動(dòng)物水平分別研究戊二醛聚合豬血紅蛋白(pPolyHb)對(duì)心肌缺血再灌注損傷的影響。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)采用H9C2心肌細(xì)胞系,根據(jù)MTT檢測(cè)出的細(xì)胞存活率的結(jié)果,設(shè)計(jì)了pPolyHb 10μM 和 20μM兩個(gè)濃度組,采用提前處理細(xì)胞的方法,隨后用缺血液建立缺血再灌注模型。分別檢測(cè)再灌注過(guò)程結(jié)束后細(xì)胞培養(yǎng)液中的LDH和CK活性,[UNEL法檢測(cè)細(xì)胞在再灌注結(jié)束后的細(xì)胞凋亡率,Western Blot檢測(cè)細(xì)胞蛋白樣本中的蛋白表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,P PolyHb預(yù)處理過(guò)的細(xì)胞,其細(xì)胞上清液中的LDH和CK活性比缺血再灌注損傷組有明顯降低,細(xì)胞凋亡率也明顯降低,與凋亡相關(guān)的蛋白Caspase3、Bax、Bcl2和CytC的表達(dá)水平顯示pPolyHb通過(guò)上調(diào)Bcl2的表達(dá),同時(shí)下調(diào)與其起相反作用的Caspase3、Bax和CytC的表達(dá),減輕心肌細(xì)胞的凋亡,對(duì)心肌的損傷起保護(hù)作用。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)選取SD大鼠,本文設(shè)計(jì)了四個(gè)組,分別是假手術(shù)組(Sham),缺血再灌注損傷組(I/R),缺血再灌注損傷加羥乙基淀粉組(I/R+HES),缺血再灌注損傷加聚合血紅蛋白組(I/R+pPolyHb)。將大鼠心臟左前降支(LAD)結(jié)扎建立大鼠缺血再灌注模型。在大鼠再灌注結(jié)束后,留血清檢測(cè)其中的LDH和CK酶活性。TTC-EB雙染色的方法檢測(cè)大鼠心肌梗死的面積。對(duì)再灌注結(jié)束后的大鼠心肌細(xì)胞用TUNEL法檢測(cè)其凋亡率。Western Blot檢測(cè)組織蛋白樣本中各種蛋白的表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,I/R+HES和I/R+pPolyHb組的血清中LDH和CK活性比I/R組明顯降低,梗死面積和凋亡率也明顯減小,與凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)也顯示用pPolyHb提前處理的方法能提高Bc12的表達(dá)而降低Bax、和Caspase3的表達(dá),通過(guò)對(duì)細(xì)胞凋亡過(guò)程的調(diào)控降低了凋亡率,對(duì)缺血再灌注過(guò)程中形成的損傷起到了保護(hù)作用。同時(shí)檢測(cè)了SIRT1信號(hào)通路中SIRT1和Ac-Foxo1的表達(dá),結(jié)果顯示pPolyHb預(yù)處理降低了Ac-Foxo1的表達(dá)水平,提高了SIRT1的表達(dá)水平,說(shuō)明pPolyHb預(yù)處理激活了對(duì)心肌起保護(hù)作用的SIRT1信號(hào)通路,從而減輕了缺血再灌注損傷。
【關(guān)鍵詞】：血紅蛋白氧載體 戊二醛聚合豬血紅蛋白 心肌缺血再灌注損傷
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R542.2
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-7
• 縮略語(yǔ)表7-10
• 第一章 緒論10-21
• 1.1 血液代用品的研究概況10-15
• 1.1.1 開(kāi)發(fā)血液代用品的必要性10
• 1.1.2 血液代用品的分類(lèi)10-11
• 1.1.3 全氟化碳類(lèi)化合物(perfluorocarbons,PFCs)11-12
• 1.1.4 血紅蛋白類(lèi)氧載體(hemoglobin-based oxygen carriers,HBOCs)12-14
• 1.1.5. 血液代用品的發(fā)展前景14-15
• 1.2 心肌缺血再灌注(MI/R)損傷15-18
• 1.2.1 心肌缺血再灌注的損傷機(jī)制15-17
• 1.2.2 心肌缺血再灌注的臨床表現(xiàn)17-18
• 1.3 血液代用品對(duì)心肌的影響18-19
• 1.4 SIRT1信號(hào)通路概況19-20
• 1.5 本文的研究目的及意義20-21
• 第二章 戊二醛聚合豬血紅蛋白(PPOLYHB)對(duì)大鼠心肌細(xì)胞H_9C_2缺血再灌注損傷的影響研究21-33
• 2.1 引言21
• 2.2 材料及方法21-22
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞21
• 2.2.2 主要試劑21-22
• 2.2.3 主要儀器22
• 2.3 實(shí)驗(yàn)過(guò)程22-26
• 2.3.1 H_9C_2缺血再灌注損傷模型的建立22-23
• 2.3.2 MTT法檢測(cè)H_9C_2心肌細(xì)胞活力23-24
• 2.3.3 H_9C_2心肌細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)活性檢測(cè)24
• 2.3.4 H_9C_2心肌細(xì)胞肌酸激酶(CK)活性檢測(cè)24
• 2.3.5 TUNEL檢測(cè)細(xì)胞凋亡率24-25
• 2.3.6 Western blotting檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Caspase3、Bax、Bcl2和CytC的表達(dá)25-26
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-32
• 2.4.1 MTT法檢測(cè)各組H_9C_2心肌細(xì)胞活力26-27
• 2.4.2 H_9C_2細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)活性檢測(cè)27-28
• 2.4.3 H_9C_2細(xì)胞肌酸激酶(CK)活性檢測(cè)28
• 2.4.4 TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋的亡率28-30
• 2.4.5 Western blotting檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Caspase3、Bax、Bcl2和CytC的表達(dá)30-32
• 2.5 討論32-33
• 第三章 戊二醛聚合豬血紅蛋白(PPOLYHB)對(duì)在體大鼠心肌缺血再灌注損傷的影響研究33-45
• 3.1 引言33
• 3.2 材料及方法33-34
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物33
• 3.2.2 主要試劑33-34
• 3.2.3 主要儀器34
• 3.3 實(shí)驗(yàn)過(guò)程34-36
• 3.3.1 在體大鼠的心肌缺血再灌注損傷的分組和給藥34
• 3.3.2 在體大鼠心肌缺血再灌注(IR)損傷模型建立34-35
• 3.3.3 在體大鼠心肌梗死面積的檢測(cè)35
• 3.3.4 在體血清酶學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)35-36
• 3.3.5 TUNEL法檢測(cè)大鼠心臟組織的心肌細(xì)胞凋亡率36
• 3.3.6 Western blotting檢測(cè)相關(guān)蛋白的表達(dá)36
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-43
• 3.4.1 在體大鼠心肌梗死面積的檢測(cè)36-38
• 3.4.2 在體血清中LDH和CK活性的檢測(cè)38-39
• 3.4.3 TUNEL法檢測(cè)在體大鼠心肌細(xì)胞凋亡率39-41
• 3.4.4 Western blotting檢測(cè)相關(guān)蛋白的表達(dá)水平41-43
• 3.5 討論43-45
• 結(jié)論45-47
• 參考文獻(xiàn)47-55
• 碩士期間學(xué)術(shù)成果55-56
• 致謝56

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