本文關(guān)鍵詞：GDF-15microRNA干擾質(zhì)粒和真核表達(dá)質(zhì)粒對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)及增殖的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:在體外觀察人GDF-15基因siRNA干擾質(zhì)粒和真核表達(dá)質(zhì)粒對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖及表達(dá)VEGF、bFGF的影響。方法:構(gòu)建人GDF-15基因siRNA干擾質(zhì)粒和GDF-15基因真核表達(dá)質(zhì)粒,分別轉(zhuǎn)染至HUVECs細(xì)胞中,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測GDF-15基因mRNA的表達(dá)水平,篩選出最佳的干擾序列。然后將細(xì)胞分為5組:空白對(duì)照組、干擾組、干擾對(duì)照組、真核表達(dá)組、真核表達(dá)對(duì)照組,用Western blot檢測各組細(xì)胞GDF-15蛋白的表達(dá)情況,并運(yùn)用ELISA法檢測細(xì)胞上清液中VEGF、bFGF的含量,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期,了解細(xì)胞的增殖情況。結(jié)果:1、實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示,HSH022853-24-CU6質(zhì)粒組的mRNA的表達(dá)明顯低于其它各組,抑制率約為92%,HSH022853-24-CU6為最佳干擾質(zhì)粒。真核表達(dá)組mRNA的表達(dá)顯著增高,達(dá)到其對(duì)照組的1000倍,且明顯高于其它各組。2、Western blot檢測目的蛋白,真核表達(dá)組的目的蛋白量最高,且明顯高于其它四組,干擾組最低,且明顯低于其陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組;3、ELISA結(jié)果顯示,空白對(duì)照組VEGF的表達(dá)顯著高于其它四組,但真核表達(dá)組、干擾組與各自的陰性對(duì)照組相比表達(dá)量幾乎相等,而各組的bFGF幾乎測不出;4、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期,進(jìn)入G2期和S期的細(xì)胞比率以真核表達(dá)組最高,明顯高于空白對(duì)照組和干擾組,但是真核表達(dá)組、干擾組與各自相應(yīng)的陰性對(duì)照組相比差別不大。結(jié)論:對(duì)于正常培養(yǎng)的HUVECs,GDF-15基因?qū)ρ軆?nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生VEGF、bFGF能力和對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖能力無影響。
【關(guān)鍵詞】：干擾質(zhì)粒 真核表達(dá)質(zhì)粒 臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞 內(nèi)皮細(xì)胞生長因子 增殖
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R541.4
【目錄】：

• 摘要5-7
• abstract7-9
• 常用縮寫詞中英文對(duì)照表9-10
• 前言10-11
• 1 材料與方法11-26
• 1.1 材料11-16
• 1.2 方法16-26
• 2 結(jié)果26-34
• 2.1 倒置熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀觀察和檢測質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染效率26-27
• 2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測轉(zhuǎn)染后GDF-15基因mRNA的表達(dá)效果27
• 2.3 Western blot檢測GDF-15蛋白含量27-28
• 2.4 ELISA檢測細(xì)胞上清液中VEGF和bFGF的含量28-30
• 2.5 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期30-34
• 3 討論34-36
• 4 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-39
• 綜述39-47
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 致謝47-48
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果48-49
• 個(gè)人簡歷49

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1 張亞如;GDF-15microRNA干擾質(zhì)粒和真核表達(dá)質(zhì)粒對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)及增殖的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：GDF-15microRNA干擾質(zhì)粒和真核表達(dá)質(zhì)粒對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)及增殖的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：466997