本文關(guān)鍵詞：高遷移率族蛋白1對抗中性粒細胞抗體誘導中性粒細胞細胞外羅網(wǎng)形成作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的在體外探討高遷移率族蛋白1(High mobility group box 1, HMGB1)是否可以通過促進抗中性粒細胞胞漿抗體(Antineutrophil cytoplasmic antiboy, ANCA)誘導中性粒細胞細胞外羅網(wǎng)(Neutmphil extracellular traps, NETs)形成,從而參與ANCA相關(guān)性小血管炎(ANCA associated vasculitis, AAV)的發(fā)病過程。方法通過密度梯度離心法提取健康獻血員外周血中性粒細胞。在體外,用HMGB1及活動期AAV患者血漿置換液中提取的VNCA-1gG共同刺激中性粒細胞,細胞免疫熒光染色觀察NETs的形成,并計算形成的百分比。Pico-green dsDNA/NE Ts染色通過熒光強度檢測dsDNA/NETs濃度進行NETs的定量。結(jié)果細胞免疫熒光染色可以觀察到HMGB1與ANCA共同刺激組有典型NETs的形成,與空白對照、單獨HMGB1或ANC A刺激組相比,HMGB1與ANCA共同刺激NETs形成的百分比明顯增加(P0.05)。同樣的dsDNA/NETs染色熒光強度NETs定量分析發(fā)現(xiàn),IMGB1與MPO-ANCA共同刺激組中性粒細胞dsDNA/NETs的濃度,分別與空白對照、單加HMGB1或MPO-ANCA、健康1gG+HMGB1組相比明顯增加(286.60±29.58ng/ml vs.513.97±116.29 ng/ml, P0.001; 340.82±60.63 ng/ml vs. 513.97±116.29ng/ml, P0.001; 396.63±112.64 ng/ml vs.513.97±116.29 ng/ml, P=0.001,359.82±76.86 ng/ml vs.513.97±116.29 ng/ml, P=0.002)。HMGB1與PR3-ANCA共同刺激組中性粒細胞dsDNA/NETs的濃度,分別與空白對照、單加HMGB1或PR31-ANCA、健康1gG+HMGB1組相比明顯增加(273.20±11.76ng/ml vs.540.25±130.95 ng/ml, P0.001; 358.38±80.01ng/ml vs.540.25±130.95ng/ml, P0.001; 334.78±87.16 ng/ml vs.540.25±130.95 ng/ml, P0.001; 407.25±89.90 ng/ml vs.540.25±130.95 ng/ml, P=0.018)。單加HMGB1或ANCA、健康1gG+HMGB1分別與空白對照比較無明顯差異(P0.05)。結(jié)論HMGB1促進ANCA誘導NETs形成,從而參與AAV的發(fā)病過程。目的體外實驗已證明HMGB1可以通過促進ANCA誘導NETs的形成,從而參與AAV的致病過程,本研究旨在探討在該過程中HMGB1發(fā)揮效應(yīng)所依賴的受體情況以及是否需要NADPH氧化酶。方法通過密度梯度離心法提取健康獻血員外周血中性粒細胞。在體外,分別加入Toll樣受體(Toll like receptor, TLR) 2、TLR4及晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(Receptor for advanced glycation end products, RAGE)抑制劑或阻斷劑以及NADPH氧化酶抑制劑DPI預處理中性粒細胞后,分別給予HMGB1及活動期AAV患者血漿置換液中提取的ANCA-1gG刺激,Pico-green dsDNA/NE Ts染色熒光強度及細胞免疫熒光染色進行NETs的定量分析。結(jié)果dsDNA/NETs染色熒光強度NETs定量分析提示,HMGB1與MPO-ANCA共同孵育組中性粒細胞dsDNA/NETs的濃度為537.25±90.11ng/ml,預先加入TLR2、TLR4及RAG E抑制劑或阻斷劑處理組dsDNA/NETs的濃度與其比較明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(537.25±90.11 ng/ml vs. 403.51±87.89 ng/ml, P=0.012; 537.25±90.11 ng/ml vs.386.18±97.14 ng/ml, P=0.003; 537.25±90.11 ng/ml vs.340.62±66.44 ng/ml, P0.001; 537.25±90.11 ng/ml vs.371.89±70.22 ng/ml, P=0.001)。HMGB1與PR3-ANCA共同孵育組中性粒細胞dsDNA/NETs的濃度為540.33±142.82 ng/ml,預先加入TLR2、 TLR4及RAGE抑制劑或阻斷劑處理組dsDNA/NETs的濃度明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(540.33±142.82 ng/ml vs.355.79±64.70 ng/ml, P=0.005, 540.33±142.82 ng/ml vs.367.42±73.51 ng/ml, P=0.009; 540.33±142.82 ng/ml vs.371.46±56.36ng/ml, P=0.008; 540.33±142.82 ng/ml vs.355.24±51.29 ng/ml,P=0.008)。細胞免疫熒光染色NETs形成百分比分析以及TLR2、TLR4基因敲除的小鼠骨髓中性粒細胞進一步驗證以上實驗結(jié)果。HMGB1與 PR3-ANCA或MPO-ANCA共同孵育組中性粒細胞dsDNA/NETs的濃度以及NETs形成百分比與預先加入DPI處理組比較,預先加入DPI處理組明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(533.66±118.10 ng/ml vs.458.33±136.59 ng/ml, P=0.01; 577.93±121.69 ng/ml vs.450.93±07.549 ng/ml, P=0.001)。結(jié)論HMGB1促進ANCA誘導NETs形成過程,需要依賴與TLR2、TLR4及RAGE,并且該過程NETosis依賴NADPH氧化酶。
【關(guān)鍵詞】：高遷移率族蛋白1 抗中性粒細胞胞漿抗體 中性粒細胞細胞外羅網(wǎng) 抗中性粒細胞胞漿抗體相關(guān)性血管炎 高遷移率族蛋白1 抗中性粒細胞胞漿抗體 中性粒細胞細胞外羅網(wǎng) 抗中性粒細胞胞漿抗體相關(guān)性血管炎
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R543
【目錄】：

• 個人簡歷3-5
• 中文摘要5-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-15
• 第一部分：高遷移率族蛋白1促進抗中性粒細胞誘導中性粒細胞細胞外羅網(wǎng)形成15-31
• 材料和方法15-23
• 實驗結(jié)果23-28
• 討論28-31
• 第二部分 高遷移率族蛋白1促進中性粒細胞細胞外羅網(wǎng)形成主要依賴受體情況31-48
• 材料和方法31-41
• 實驗結(jié)果41-44
• 討論44-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻49-55
• 綜述55-82
• 參考文獻67-82
• 附錄82-84
• 致謝84-86
• 在讀期間發(fā)表及待發(fā)表論文86
• 學術(shù)會議交流86

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本文編號：452940