發(fā)布時(shí)間：2017-06-05 00:00

  本文關(guān)鍵詞：親環(huán)素A對ox-LDL誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞中NF-κB、M-CSF和ZFP36表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：一、親環(huán)素A、NF-κB、M-CSF和ZFP36在氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞中表達(dá)的改變 目的觀察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)處理RAW264.7細(xì)胞不同時(shí)間后，親環(huán)素A(CypA)、核轉(zhuǎn)錄因子B (NF-κB)、巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)和鋅指蛋白36(ZFP36)在細(xì)胞中表達(dá)之間存在的關(guān)系。 方法實(shí)驗(yàn)過程中過首先使用ox-LDL孵育RAW264.7細(xì)胞不同的時(shí)間(0,4,8,12h)，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)的方法，檢測親環(huán)素A mRNA的表達(dá)的變化，采用蛋白免疫印跡(Western blot)的方法分別檢測親環(huán)素A、NF-κB和ZFP36的蛋白表達(dá)的改變；酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)方法檢測M-CSF表達(dá)的改變。 結(jié)果Ox-LDL與RAW264.7細(xì)胞共同孵育，與對照組相比，ox-LDL處理細(xì)胞4h、8h和12h組，RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)親環(huán)素A的mRNA表達(dá)均明顯增強(qiáng)，差異有顯著性(P0.05)，尤以8h時(shí)表達(dá)量最高。Western blot檢測的親環(huán)素A蛋白表達(dá)的結(jié)果也呈現(xiàn)相似的趨勢，故在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中，ox-LDL處理細(xì)胞的時(shí)間選擇8h。同步檢測的NF-κB p65的蛋白表達(dá)結(jié)果顯示親環(huán)素A一致的趨勢，與對照組相比，ox-LDL處理細(xì)胞4h、8h和12h組，蛋白表達(dá)均明顯增強(qiáng)，在處理8h時(shí)表達(dá)量最高，差異有顯著性(P0.05)；而I-κBα蛋白質(zhì)的表達(dá)趨勢恰好與NF-κB p65的蛋白表達(dá)結(jié)果相反，各組較對照組表達(dá)均明顯降低，在處理8h組表達(dá)量最低，差異有顯著性(P0.05)。Western-blot檢測還發(fā)現(xiàn)ZFP36的蛋白表達(dá)也在ox-LDL處理細(xì)胞4h、8h和12h后明顯減弱，而且8h組表達(dá)改變程度最明顯，差異有顯著性(P0.05)。ELISA檢測結(jié)果顯示細(xì)胞內(nèi)M-CSF的表達(dá)明顯增強(qiáng)，在處理8h時(shí)表達(dá)量最高，差異有顯著性(P0.05)。 小結(jié)Ox-LDL可促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞中親環(huán)素A、NF-κB和M-CSF的表達(dá)，而降低細(xì)胞中ZFP36的蛋白表達(dá)。 二、親環(huán)素AsiRNA對氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞中NF-κB、M-CSF和ZFP36的表達(dá)的影響 目的通過親環(huán)素A siRNA沉默RAW264.7細(xì)胞中親環(huán)素A的表達(dá)，觀察細(xì)胞中NF-κB、M-CSF和ZFP36表達(dá)水平的改變。 方法按Invitrogen公司提供的脂質(zhì)體LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染程序，將親環(huán)素A siRNA轉(zhuǎn)入RAW264.7細(xì)胞，RT-PCR和Western-blot分別檢測親環(huán)素AmRNA和蛋白表達(dá)的改變；在第一部分實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇50mg/L和8h作為ox-LDL處理細(xì)胞的濃度和時(shí)間，Western blot檢測NF-κB p65、I-κBα和ZFP36蛋白的表達(dá)改變；ELISA檢測M-CSF蛋白表達(dá)的改變。 結(jié)果RT-PCR和Western-blot檢測發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組親環(huán)素AmRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)較對照組均明顯降低，差異有顯著性(P0.05)，可以用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。經(jīng)ox-LDL處理的親環(huán)素A siRNA轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞組與對照組相比，NF-κB p65蛋白的表達(dá)明顯降低，而I-κBα蛋白的表達(dá)明顯增加，，差異均有顯著性(P0.05)。Western blot檢測，經(jīng)ox-LDL處理的親環(huán)素A siRNA轉(zhuǎn)染組ZFP36蛋白質(zhì)的表達(dá)也明顯增加，差異有顯著性(P0.05)，ELISA檢測則顯示M-CSF的表達(dá)降低，差異有顯著性(P0.05)。 小結(jié)親環(huán)素AsiRNA可延緩ox-LDL誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞中NF-κB、M-CSF蛋白表達(dá)的上調(diào)和ZFP36蛋白表達(dá)的下調(diào)。 結(jié)論 1Ox-LDL可促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞中親環(huán)素A、NF-κB和M-CSF的表達(dá)和降低細(xì)胞中ZFP36的蛋白表達(dá)。 2親環(huán)素A siRNA可延緩ox-LDL誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞中NF-κB、M-CSF蛋白表達(dá)的上調(diào)和ZFP36蛋白表達(dá)的下調(diào)。
【關(guān)鍵詞】：親環(huán)素A 氧化低密度脂蛋白 RAW264.7細(xì)胞 核因子κB
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R543.5
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 前言10-13
• 實(shí)驗(yàn)材料13-15
• 實(shí)驗(yàn)方法15-20
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-28
• 討論28-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-38
• 主要的縮略語和英文索引38-40
• 文獻(xiàn)綜述40-54
• 參考文獻(xiàn)51-54
• 碩士期間已發(fā)表的論文54-55
• 致謝55-56
• 基金資助56

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 黃水清;沈小燕;韓凌;王斌;王劍;李杰芬;;當(dāng)歸補(bǔ)血湯含藥血清對ox-LDL激活單核細(xì)胞p38 MAPK的作用[J];中藥新藥與臨床藥理;2010年05期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 曾柏生;有氧運(yùn)動對APOE基因缺陷小鼠血脂代謝的影響以及有氧運(yùn)動調(diào)節(jié)血脂代謝以外的其他抗動脈粥樣硬化機(jī)制的探討[D];揚(yáng)州大學(xué);2003年

  本文關(guān)鍵詞：親環(huán)素A對ox-LDL誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞中NF-κB、M-CSF和ZFP36表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：422412