本文關(guān)鍵詞：miR-21促進(jìn)臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞血管向分化作用的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的研究mi R-21促進(jìn)臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞(umbilical cord blood derived mesenchymal stem cells,UCBMSCs)血管向分化的作用,觀察mi R-21過(guò)表達(dá)UCBMSCs在裸鼠下肢缺血模型中的血管再生效果。方法1.UCBMSCs(來(lái)源于同濟(jì)大學(xué)干細(xì)胞庫(kù))培養(yǎng),并通過(guò)誘導(dǎo)UCBMSCs成骨、成脂以及成軟骨方向分化的作用,鑒定其多向分化潛能的干細(xì)胞特征;2.構(gòu)建Lenti-Lacz-Luciferase和Lenti-mi R-21-Luciferase慢病毒載體,并測(cè)定其MOI值,慢病毒轉(zhuǎn)染UCBMSCs后第4 d,D-熒光素鉀處理細(xì)胞,通過(guò)體外生物發(fā)光成像技術(shù)(Bioluminescence Imaging,BLI)檢測(cè)Luciferase表達(dá)情況,檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率;3.在目的基因轉(zhuǎn)染UCBMSCs后的0、1、4、7、14及28 d分別采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR及Western Blot檢測(cè)目的基因及關(guān)鍵成血管因子的表達(dá);4.第3代UCBMSCs分別轉(zhuǎn)染Lenti-Lacz-Luciferase和Lenti-mi R-21-Luciferase后,接種于含有Matrigel的96孔板中,分別于接種后4h至48h在顯微鏡下觀察其tube結(jié)構(gòu)形成情況,并采用Olympus Cell R imaging軟件定量分析tube結(jié)構(gòu)長(zhǎng)度;5.通過(guò)結(jié)扎裸鼠股動(dòng)脈及乆動(dòng)脈建立下肢重度缺血(Critical limb ischemia,CLI)模型,并將UCBMSCs/mi R-21、UCBMSCs/Lacz及生理鹽水各100μL分別注入臀大肌和腓腸肌,在1、4、7、14及28 d,利用熱成像技術(shù)示蹤移植細(xì)胞位置,激光多普勒彩超檢測(cè)其血管灌注量情況。28 d獲取標(biāo)本,在microfil下肢血管灌注后,取臀大肌和腓腸,4%多聚甲醛固定,脫水、石蠟包埋、切片做HE以及CD31免疫熒光染色,檢測(cè)新血管形成情況。結(jié)果1.UCMSCs在成骨誘導(dǎo)后第28天ARS染色中出現(xiàn)鈣結(jié)節(jié),成軟骨誘導(dǎo)后的第16天阿辛藍(lán)染色,成脂誘導(dǎo)后的第16天油紅O染色均出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá),說(shuō)明UCBMSCs具有多向分化能力的干細(xì)胞特性;2.慢病毒載體構(gòu)建成功,其轉(zhuǎn)染效率可達(dá)90%以上;3.q PCR結(jié)果表明,mi R-21組的HIF-1α和VEGF在第4天開(kāi)始顯著高表達(dá),并持續(xù)到7 d和14 d。其它關(guān)鍵成血管因子,SDF-1、b FGF、PLGF及SCF也表現(xiàn)出與HIF-1α和VEGF相同趨勢(shì)。Western Blot結(jié)果與q PCR結(jié)果相似;4.Matrigel結(jié)果顯示在平行的三組實(shí)驗(yàn)中,Lenti-mi R-21-Luciferase組tube結(jié)構(gòu)最多,且長(zhǎng)度最長(zhǎng);5.BLI檢測(cè)顯示植入CLI區(qū)域的干細(xì)胞保持在植入?yún)^(qū)并未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移現(xiàn)象,熒光在第3天表達(dá)最高,并持續(xù)到第28天。激光多普勒彩超顯示CLI區(qū)域血管在術(shù)后第3天,實(shí)驗(yàn)組的血管再生顯著優(yōu)于對(duì)照組,這種結(jié)果一直持續(xù)到術(shù)后28d。免疫熒光檢測(cè)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組CD31表達(dá)量高于Lacz組(3倍)及生理鹽水組(20倍),這一結(jié)果與前期多普勒觀察結(jié)果一致。結(jié)論mi R-21具有促進(jìn)UCBMSCs血管向分化的作用,并對(duì)CLI有一定的治療效果。
【關(guān)鍵詞】：miR-21 UCBMSCs 下肢缺血 血管再生
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R543.5
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-14
• 第一部分：人臍帶血干細(xì)胞的培養(yǎng)以及多分化能力的鑒定慢病毒載體的構(gòu)建轉(zhuǎn)染效率測(cè)定14-20
• 1、材料與方法14-17
• 2、結(jié)果17-19
• 3、討論19-20
• 第二部分：mi R-21 促進(jìn)人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞成血管分化的體外研究20-31
• 1、材料與方法20-24
• 2、結(jié)果24-29
• 3、討論29-31
• 第三部分：mi R-21 促進(jìn)UCBMSCs在裸鼠CLI體內(nèi)成血管的修復(fù)作用31-37
• 1、材料與方法31-33
• 2、結(jié)果33-36
• 3、討論36-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-44
• 附錄44-45
• 致謝45-46
• 綜述46-57
• 參考文獻(xiàn)52-57

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本文編號(hào)：419404