發(fā)布時(shí)間：2025-03-30 01:13

　　目的： 構(gòu)建靶向Nrf2基因的siRNA真核表達(dá)重組載體，轉(zhuǎn)染H9c2心肌樣細(xì)胞，利用缺氧/復(fù)氧(H/R)損傷模型及缺氧預(yù)適應(yīng)（HPC）延遲保護(hù)模型，從Nrf2-ARE信號(hào)通路的角度，探討HPC上調(diào)抗氧化酶（HO-1、MnSOD）介導(dǎo)心肌細(xì)胞延遲保護(hù)的新途徑。 方法： 1.利用siRNA真核表達(dá)載體pGPU6/GFP/Neo，設(shè)計(jì)并構(gòu)建靶向Nrf2的RNA干擾重組質(zhì)粒pGPU6/GFP/Neo-Nrf2siRNA，同時(shí)設(shè)計(jì)并構(gòu)建陰性對(duì)照RNA干擾重組載體，用于鑒定pGPU6/GFP/Neo質(zhì)粒介導(dǎo)的RNA干擾體系的特異性； 2.通過(guò)Western Blot法分別檢測(cè)H9c2心肌樣細(xì)胞經(jīng)HPC處理后0、12、24、48、72h各時(shí)間點(diǎn)的Nrf2核轉(zhuǎn)位變化；并在Nrf2核轉(zhuǎn)位最顯著的時(shí)間點(diǎn)，應(yīng)用染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP）法檢測(cè)胞核內(nèi)Nrf2與HO-1及MnSOD基因啟動(dòng)子區(qū)內(nèi)抗氧化反應(yīng)元件（ARE）結(jié)合的變化； 3. H9c2細(xì)胞經(jīng)pGPU6/GFP/Neo-Nrf2siRNA重組載體或陰性對(duì)照載體pGPU6/GFP/Neo-NC siRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染24h后，建立HPC...

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮寫及全稱和中文對(duì)照
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)主要材料
        2.1.1 細(xì)胞株、質(zhì)粒來(lái)源
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)用液的配置
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)主要儀器和設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
        2.2.1 H9c2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 構(gòu)建靶向 Nrf2 基因的 siRNA 表達(dá)載體
        2.2.3 基因轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)
        2.2.4 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕?br>        2.2.5 ChIP 技術(shù)
        2.2.6 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組
        2.2.7 觀察指標(biāo)與方法
    2.3 數(shù)據(jù)處理
第3章 結(jié)果
    3.1 重組質(zhì)粒 pGPU6/GFP/Neo-Nrf2 siRNA 與 pGPU6/GFP/Neo-NC siRNA 的測(cè)序鑒定
    3.2 HPC 對(duì) Nrf2-ARE 信號(hào)通路的影響
    3.3 Nrf2-ARE 信號(hào)通路對(duì) HPC 上調(diào)細(xì)胞抗氧化酶蛋白表達(dá)的影響
    3.4 Nrf2-ARE 信號(hào)通路對(duì) HPC 發(fā)揮延遲保護(hù)作用的影響
    3.5 Nrf2-ARE 信號(hào)通路對(duì) HPC 增強(qiáng) H9c2 細(xì)胞抗氧化應(yīng)激能力的影響
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：4037952