目的： 構(gòu)建靶向Nrf2基因的siRNA真核表達重組載體，轉(zhuǎn)染H9c2心肌樣細胞，利用缺氧/復氧(H/R)損傷模型及缺氧預適應（HPC）延遲保護模型，從Nrf2-ARE信號通路的角度，探討HPC上調(diào)抗氧化酶（HO-1、MnSOD）介導心肌細胞延遲保護的新途徑。 方法： 1.利用siRNA真核表達載體pGPU6/GFP/Neo，設計并構(gòu)建靶向Nrf2的RNA干擾重組質(zhì)粒pGPU6/GFP/Neo-Nrf2siRNA，同時設計并構(gòu)建陰性對照RNA干擾重組載體，用于鑒定pGPU6/GFP/Neo質(zhì)粒介導的RNA干擾體系的特異性； 2.通過Western Blot法分別檢測H9c2心肌樣細胞經(jīng)HPC處理后0、12、24、48、72h各時間點的Nrf2核轉(zhuǎn)位變化；并在Nrf2核轉(zhuǎn)位最顯著的時間點，應用染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP）法檢測胞核內(nèi)Nrf2與HO-1及MnSOD基因啟動子區(qū)內(nèi)抗氧化反應元件（ARE）結(jié)合的變化； 3. H9c2細胞經(jīng)pGPU6/GFP/Neo-Nrf2siRNA重組載體或陰性對照載體pGPU6/GFP/Neo-NC siRNA瞬時轉(zhuǎn)染24h后，建立HPC...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮寫及全稱和中文對照
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 實驗主要材料
        2.1.1 細胞株、質(zhì)粒來源
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要實驗用液的配置
        2.1.4 實驗主要儀器和設備
    2.2 實驗方法與步驟
        2.2.1 H9c2 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 構(gòu)建靶向 Nrf2 基因的 siRNA 表達載體
        2.2.3 基因轉(zhuǎn)導技術(shù)
        2.2.4 實驗模型的建立
        2.2.5 ChIP 技術(shù)
        2.2.6 實驗設計與分組
        2.2.7 觀察指標與方法
    2.3 數(shù)據(jù)處理
第3章 結(jié)果
    3.1 重組質(zhì)粒 pGPU6/GFP/Neo-Nrf2 siRNA 與 pGPU6/GFP/Neo-NC siRNA 的測序鑒定
    3.2 HPC 對 Nrf2-ARE 信號通路的影響
    3.3 Nrf2-ARE 信號通路對 HPC 上調(diào)細胞抗氧化酶蛋白表達的影響
    3.4 Nrf2-ARE 信號通路對 HPC 發(fā)揮延遲保護作用的影響
    3.5 Nrf2-ARE 信號通路對 HPC 增強 H9c2 細胞抗氧化應激能力的影響
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻
攻讀學位期間的研究成果
綜述
    參考文獻



本文編號：4037952