目的探討肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)和類胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF1)在外能否誘導(dǎo)心肌干細(xì)胞(CSCs)發(fā)生增殖并向心肌細(xì)胞定向分化。方法組織貼塊法分離培養(yǎng)心肌干細(xì)胞,免疫熒光技術(shù)鑒定c-kit和CD34表達(dá),流式細(xì)胞儀分選純化c-kit+細(xì)胞,CFDA SE熒光探針示蹤培養(yǎng)檢測(cè)細(xì)胞增殖特征。實(shí)驗(yàn)分為單純心肌干細(xì)胞組和與心肌共培養(yǎng)組,分別用HGF和IGF1干預(yù),倒置顯微鏡觀察細(xì)胞不同時(shí)期數(shù)量與形態(tài)的變化,活細(xì)胞工作站觀察CFDA SE示蹤劑熒光強(qiáng)弱,采集圖像,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。免疫熒光技術(shù)檢測(cè)Nkx2.5、心肌肌鈣蛋白T(cTnT)的表達(dá)。結(jié)果單純心肌干細(xì)胞組,生長(zhǎng)因子刺激后心肌干細(xì)胞數(shù)量與形態(tài)均無明顯變化。與心肌共培養(yǎng)組,細(xì)胞均發(fā)生增殖與形態(tài)變化,Nkx2.5、cTnT陽(yáng)性表達(dá),有個(gè)別心肌干細(xì)胞分化為自發(fā)搏動(dòng)的心肌細(xì)胞。結(jié)論心肌干細(xì)胞與心肌細(xì)胞共培養(yǎng)條件下,HGF和IGF1能夠促進(jìn)心肌干細(xì)胞增殖,聯(lián)合作用能夠誘導(dǎo)心肌干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化。

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圖3c-kit的PE-CY7分選結(jié)果

CSCs形態(tài)及免疫熒光鑒定原代培養(yǎng)24h，成纖維樣細(xì)胞從組織塊邊緣爬出，呈長(zhǎng)梭形或多角形，48h數(shù)量明顯增多;5d左右，心肌干細(xì)胞在成纖維樣細(xì)胞層之上，從組織塊邊緣爬出，細(xì)胞體積小，呈圓球形，折光度高;約10d，小圓亮細(xì)胞大量爬出，14d長(zhǎng)滿整個(gè)培養(yǎng)瓶(圖1)。收集心肌干細(xì)胞，免....

圖6共培養(yǎng)各組心肌干細(xì)胞的Nkx2.5免疫熒光染色標(biāo)尺示50μm(下同)

Vol．45，No．5朱蓓蓓等．肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子和類胰島素樣生長(zhǎng)因子對(duì)心肌干細(xì)胞的誘導(dǎo)作用·667·圖6共培養(yǎng)各組心肌干細(xì)胞的Nkx2.5免疫熒光染色標(biāo)尺示50μm(下同)藍(lán)色為DEPI標(biāo)記細(xì)胞核，綠色為CFDASE標(biāo)記的CSCs，紅色為Nkx2.5圖7共培養(yǎng)各組心肌干細(xì)胞的cTn....

圖8與心肌共培養(yǎng)組心肌干細(xì)胞增殖與分化比率

·668·解剖學(xué)報(bào)45卷，5期圖8與心肌共培養(yǎng)組心肌干細(xì)胞增殖與分化比率Fig．8Cardiacstemcellproliferationanddifferentiationrateinco-culturedwithcardiomyocytes殖、抑制細(xì)胞凋亡、緩解心力衰竭進(jìn)程中....

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